原文
，卷:16(15)
纯和药物剂型中Enzalutamide的有效紫外光谱测定方法
Zamir GK, Shwetal SP, Prashant KD和Praveen OP＊
h·r·帕特尔药物研究所质量保证部教育& Research, Karwand Naka, Shirpur，马哈拉施特拉邦，印度
- *通信:
- Praveen OPh·r·帕特尔药物研究所药物化学系教育& Research, Karwand Naka, Shirpur, Dhule 425405，印度马哈拉施特拉邦电子邮件: (电子邮件保护)
收到:2016年6月23日;接受:2016年7月18日;发表:2016年8月2日
引用:扎米尔GK, Shwetal SP, Prashant KD，等。纯和药物剂型中Enzalutamide的有效紫外光谱测定方法。化工学报，2016;16(15):111。
摘要
建立了两种简便、快速、准确、新颖的分光光度法测定纯制剂和药物剂型中Enzalutamide的含量。一种新型非甾体抗雄激素药物EZA用于治疗转移性去势抵抗性前列腺癌。目前尚无单一的紫外分光光度法测定EZA的报道。本研究重点发展了以236 nm处EZA测定为基础的简单分光光度法(method I)和220.0 ~ 255.0 nm处AUC测定的曲线下面积分光光度法(method II)。这是继比尔-兰伯特之后的一种药物法律在3 ~ 15 μg/mL浓度范围内(r2=0.999)。根据ICH指南对方法的准确性、精密度、灵敏度和坚固性进行了验证。乐动KENO快乐彩所提出的方法在平均值和标准偏差方面的性能没有显著差异。相对标准偏差百分比不超过2%。该方法适用于日常质量控制。
关键字
Enzalutamide;紫外光谱法;曲线下面积;方法验证
缩写
UV:紫外线;EZA: Enzalutamide;AUC:曲线下面积;浓缩的。:浓度;LOD:检测限;定量限;定量限;RSD:相对标准偏差百分比
简介
Enzalutamide在化学上是4-{3-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]-5,5-二甲基-4-氧基-2-硫氧咪唑烷-1-基}-2-氟- n-甲基苯甲酰胺(图1) [1］．EZA的治疗适应症是治疗已接受多西他赛治疗的转移性去势抵抗性前列腺癌的成年男性[2］．前列腺上皮组织的恶性转化是由于改变的模式基因表达通过雄激素受体(AR) [3.］．EZA是非甾体类雄激素抑制剂，通过结合AR的配体结合域(LBD)和减少核易位，DNA结合和招募AR共激活剂，也抑制前列腺癌症细胞生长通过激活TGF-β通路[4，5］．
图1:Enzalutamide的化学结构。
文献综述表明，目前尚无单一的紫外光谱法测定EZA的报道。很少有色谱、生物分析方法采用LC-MS/MS测定人血浆中的药物[6]和大鼠血浆中LC-串联质谱分析[7］．因此，本工作的目的是开发一种简单的AUC方法来估计大体积和小体积的EZA制药配方使用紫外线光谱学以及根据ICH指南验证方法[乐动KENO快乐彩8，9］．
在目前的工作中，方法涉及使用光谱学因为它的简单，特异性和低成本。
材料与方法
化学品和试剂
EZA的礼品样品由印度的Zydus Cadila Ahmadabad提供;采用室内制剂配制EZA (40 mg)软胶囊制剂;甲醇(HPLC级)采购自默克(印度)有限公司。孟买,印度。
仪表
紫外可见分光光度计;双束紫外分光光度计(岛津- 1700)，10mm匹配石英电池和紫外探头-2.21软件;秤:岛津Aux 220。
溶剂的选择
从溶解度、稳定性和成本等方面考虑，选择甲醇作为溶剂。
标准溶液的制备
用10mg甲醇溶解于100ml容量瓶中，制得EZA原液标准液，体积与标号相同，最终浓度为100 μg/ ml。
简单紫外光谱法(method - i)
从股票将溶液稀释成适当的稀释度。溶液以甲醇为空白试剂，在200nm ~ 400nm的紫外范围内扫描。EZA在236 nm处表现出最大吸收(图2)．因此，选择该波长进行进一步实验。线性范围为3 ~ 15 μg/mL (表1)．为了确定线性关系，制备的浓度范围为3 μg/mL至15 μg/mL，在236 nm处测量吸光度。用浓度对吸光度法绘制校准曲线(图3) [10］．
| 参数 | 方法我 | 方法二 |
|---|---|---|
| 线性(µg / mL) | 3日- 15日 | 3日- 15日 |
| 线性方程 | 0.0649 y = x + 0.0142 | 0.1701 y = x + 0.1576 |
| 坡 | 0.0649 | 0.1701 |
| 拦截 | 0.0142 | 0.1576 |
| 相关系数(r2） | 0.9997 | 0.9994 |
表1。线性研究结果。
图2:Enzalutamide的紫外光谱。
图3:Enzalutamide的校准曲线(方法一)。
曲线下面积(AUC)法(方法二)
工作标准溶液为10 μg/mL，在200 nm ~ 400 nm范围内进行扫描。EZA在236 nm处表现出最大吸光度。选取220 nm至255 nm两个波长记录曲线下面积(图4)．为了确定线性关系，制备了3 μg/mL ~ 15 μg/mL的浓度，并通过分析220.0 ~ 255.0 nm的所有浓度来确定AUC。用浓度对AUC绘制校准曲线(图5)．
图4:Enzalutamide的紫外光谱显示AUC在220.0 ~ 255.0 nm之间。
图5:Enzalutamide校准曲线(方法二)
原料药和药剂配方分析
从标准来看股票在236 nm和220.0 ~ 255.0 nm范围内测定AUC。测定EZA浓度(表2)，用公式:
| 方法我 | %发现量，µg/mL (n=6) | %相对标准偏差 | 方法二 | %发现量，µg/mL (n=6) | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 散装 | 100.9 | 0.69 | 散装 | 99.8 | 0.11 |
| 配方 | 98.17 | 0.67 | 配方 | 99.4 | 0.002 |
表2。原料药及制剂分析结果。
y = mx + c (1)
式中，y为标准溶液的吸光度或AUC, x为10 μg/mL溶液中的浓度，m和c分别为直线的斜率和截距。
药物含量百分比由公式确定:
%药物含量=[发现含量(μg/mL)/实际含量(μg/mL)] × 100 (2)
百分比回收率研究
为了评估所提方法的准确性，在80、100和120%三个不同水平上进行了回收率研究。在预先分析的样品溶液中加入已知量的标准药物溶液，按三种不同的水平添加。回收率令人满意(表3)．
| 恢复水平(%) | 加药量(µg/mL) | 恢复% n=3 | |
|---|---|---|---|
| 方法我 | 方法二 | ||
| 80 | 4 | 99.36 | 98.36 |
| One hundred. | 5 | 100.10 | 99.86 |
| 120 | 6 | 98.20 | 99.35 |
表3。恢复研究的结果。
精度
方法的精密度分别为重复性、日内精密度和日间精密度。测定6次EZA (10 μg/mL)的重复性。表4)．
| 药物 | 方法 | 检出量(µg/mL) (n= 6) | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|
| EZA | 我 | 99.50 | 0．10 |
| 2 | 99.81 | 0.41 |
表4。重复性结果。
当日3次分析5、10、15 μg/mL EZA，测定日内精密度。通过在三个不同的日子分析相同浓度的溶液来确定日间精度(表5)．
| % RSD (n= 3) | 方法我 | 方法二 | ||
|---|---|---|---|---|
| Interday | 盘中 | Interday | 盘中 | |
| 1．18 | 0.51 | 0.33 | 0.23 | |
表5所示。日内和日内精度的结果。
灵敏度
所提出的方法的灵敏度是根据LOD(检测限)(待检测分析物的最低量)和LOQ(定量限)(可测量分析物的最低量)(表6)．
| 参数 | 方法我 | 方法二 |
|---|---|---|
| LOD | 1.29 | 0.22 |
| 定量限 | 4.32 | 0.67 |
表6所示。敏感度。
强度
由两名分析人员在相同的操作条件和环境条件下(表7)．
| EZA | 分析师 | 方法(n= 6) | |
|---|---|---|---|
| 我 | 2 | ||
| %相对标准偏差 | 我 | 0.33 | 0.08 |
| 2 | 0.29 | 0.15 | |
表7所示。强度:
结果与讨论
在实验研究中，EZA的紫外和AUC光谱分别记录在236.0 nm和220.0 nm至255.0 nm (图2和4)．两种方法在3 μg/mL ~ 15 μg/mL范围内均呈线性关系，其校正曲线回归方程为y=0.0649x+0.0142 (R2=0.9997)用于方法一(图3)， y=0.1701x+0.1576 (R2=0.9994)用于方法II (图5)．纯粹的毒品和制药配方分析发现，方法一原料药含量百分比为100.9%，制剂中药物含量百分比为98.17%;方法二原料药含量百分比为99.73%，制剂中药物含量百分比为99.48% (表2)．根据ICH指南对方法进行了验证，并对结果进行了统计比较。乐动KENO快乐彩在三种不同浓度的样品溶液中加入标准药物溶液，进行准确度测定，计算回收率，方法一和方法二的回收率分别为98.20% ~ 100.10%和98.36% ~ 99.86% (表3)．精密度由可重复性决定，日内及日间分析显示变异不超过2 (% RSD) (表4和5)．灵敏度显示待测量和检测量最小，方法一的LOD和LOQ分别为1.29和4.32，方法二的LOD和LOQ分别为0.22和0.67 (表6)．建议的方法不受操作符变化的影响，并通过计算% RSD值来解释结果，发现结果在(表7)．
结论
得出的结论是，目前还没有开发出任何分光光度法来估算EZA。因此，本文提出了一种简便、快速、可靠的紫外光谱法和曲线下面积法，用于EZA的常规测定。该方法准确、灵敏、精密度高，可用于常规分析的质量控制。
确认
作者感谢h·r·帕特尔药物研究所教育以及印度Shirpur Research (MS)为开展这项研究工作提供设施。
参考文献
- 含有胁迫响应蛋白DUF538结构域的异源表达及其形态生化后果。植物学报，2011;30(5):351- 551。
- 高桥S，吉川M, Kamada A，等。Chenopodium album的光可转换水溶性叶绿素结合蛋白是DUF538超家族的成员，该超家族分布在胚胎植物中。中国植物科学，2013;29(4):529 - 529。
- Ashraf G, Kohnehrouz sb .识别DUF538cDNA克隆Celosia cristata非应力叶和应力叶的表达序列。中国植物科学。2010;57(2):247-52。
- 中神H，杉山N, Mochida K，等。大规模比较磷酸化蛋白质组学鉴定植物中保守的磷酸化位点。植物科学进展。2010;29(3):344 - 344。
- 王志强，王志强。2013;32(2)。
- 先天免疫系统杀菌/渗透性增加蛋白与水解酶三级结构同源性的预测。IntJBiosci。2014; 5(2): 1 - 6。
- Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seiolman JG, Smith JA，等。分子生物学的最新进展。纽约:John Wiley & Sons;1991.
- Livak KJ, Schmittgen TD。相对分析基因表达数据采用实时定量聚合酶链反应2−ΔΔCT方法。方法。2001;25(4):402 - 8。
- 马晓燕，王志强，王志强，等。监视表达式配置文件大米基因在寒冷，干旱和高盐度胁迫和脱落酸应用cDNA微阵列和RNA凝胶-印迹分析。植物杂志。2003, 133(4): 1755 - 67。
- 肖泽明，王志强，王志强，等。监管网络基因表达在干旱和寒冷中压力响应。中国植物学报。2003;6(5):410-7。
- Shinozaki K, Yamaguchi SK.与干旱相关的基因网络压力反应和容忍。JExpBot。58 2007;(2): 221 - 7。
- 山口SK, Shinozaki K.渗透和冷胁迫响应启动子中顺式作用调控元件的组织。植物科学进展，2005;10(2):88-94。
- 杨晓明，李志强，李志强，等。植物抗旱耐盐性研究进展。中国植物科学，2005;24(1):23-58。
- 王晓东，王晓东，王晓东，等。利用cDNA基因芯片检测1300个拟南芥基因在干旱和寒冷胁迫下的表达模式。植物学报，2001;13(1):61-72。
- 张志强，张志强，张志强，等。一个基因表达拟南芥发育图谱。NatGenet。2005年,37(5):501 - 6。
