原文
,体积:18 (1)猫的部分纯化和研究葡萄籽的葡萄抗氧化活动
收到:2017年2月15日;接受:2018年2月11日;发表:2018年2月16日
引用:Farhan LO Shwayel弗兰克-威廉姆斯,塔拉尔星期。猫的部分纯化和研究葡萄籽的抗氧化活性葡萄。肛门化学印第安纳j . 2018; 18 (1): 130
文摘
葡萄(葡萄l .)是世界上主要的水果作物。它是一种水果从古代;葡萄含有约80%的水,所以它是美味,lowaA热量小吃或甜点。期间使从葡萄果汁,大量的葡萄果肉、种子和皮肤将作为动物的食物。因此,这项研究是旨在衡量MDA的TAC,猫和维生素C在不同类型的葡萄和部分纯化的猫从红色。TAC, MDA、维生素C、总蛋白和猫一直以7种(圣诞玫瑰,意大利,皇帝,马斯喀特的亚历山大,早期马斯喀特,红地球,和黑色玫瑰)葡萄籽和cat酶纯化红地球葡萄籽。结果表明,圣诞玫瑰、红地球、黑玫瑰有维生素C含量最高和马斯喀特亚历山大的从这个分析维生素C含量最低。在马斯喀特亚历山大的MDA含量最高,皇帝从这个分析MDA含量最低,和早期马斯喀特TAC内容和黑玫瑰最高最低TAC的内容分析。除了猫从红地球葡萄籽的净化过滤交联葡聚糖凝胶g - 100和EDTE-Sepharose。
关键字
葡萄籽;抗氧化剂;MDA;服用维生素C
介绍
的化合物能够抑制不同的氧化生物分子被称为抗氧化剂。这些抗氧化剂帮助修复身体组织造成的损害引起的氧化过程。不同的研究都集中在使用的重要性抗氧化剂从自然资源,作为健康的添加剂和潜在的抗氧化剂在日常进食的习惯(1]。
有两个大组抗氧化剂在活细胞:酶抗氧化剂和non-enzymatic抗氧化剂。这些群体分为几个部门。酶的分离抗氧化剂至关重要和次要酶障碍(2]。内阻有三个重要的化学物质,阻止杀死自由基的发展:谷胱甘肽过氧化物酶,使两个电子,使少过氧化物selenols安排而且自慰过氧化物作为潜在芬顿反应底物;过氧化氢酶,将过氧化氢转化为水和氧气亚原子。过氧化氢酶是视为一个杰出的最重要和富有成效癌症预防代理今天是已知的,所以一个粒子的过氧化氢酶信徒60亿个原子的过氧化氢(3]。
过氧化氢酶(EC 1.11.1.6)是已知的最强的催化剂之一。催化作用的反应是很重要的。两个分子H的歧化作用2O2通过使用这种酶是catatalysed。这个强大的氧化剂有潜在有害水和氧气。在植物中,H2O2线粒体电子传递期间生成的过氧化氢酶可以回收(4]。
葡萄(葡萄)是世界上最大的水果作物之一葡萄籽含有约40%纤维,16%的石油,11%的蛋白质和7%的复杂的酚类,除了糖,矿物盐,等。此外,葡萄籽具有丰富来源的单体的酚类化合物,如(+)儿茶素、(-)表儿茶素、(-)Epicatechin-3-o-gallate,和二聚的,三聚物的四聚物的原花青素类物质,含有抗诱变剂的和抗病毒效果(5]。
几个类黄酮用酚醛自然存在于葡萄籽的功能成分。这些类黄酮包括单体的黄烷醇,二聚的,三聚物的聚合原花青素类物质,酚酸(6]。各种各样的癌症类型、心血管疾病以及一些皮肤疾病可以用葡萄籽酚类化合物的抗氧化活性,因为他们与这个活动密切相关7,8]。
本研究的客观测量的MDA, TAC,猫和维生素C在不同类型的葡萄从葡萄籽和部分纯化的猫。
材料和方法
我们收集了7种葡萄从2016年7月在巴格达当地市场。我们的皮种子分离,然后由空气一周干种子,我们磨干种子的搅拌器,在这一步中样品都可以使用。
准备的提取
一克每个标本均质在研钵和研杵了5毫升超级冷提取缓冲(0.1磷酸钾缓冲,ph值- 7.8)。
匀浆已经离心机在18000 g 30分钟后在4°C和上层清液被筛选。浮在表面的部分是利用作为抗氧化参数的测量的未经提炼的集中和酶活性。每个插图的抗氧化能力评估的策略并由Benzieand应变(9]。丙二醛(MDA)的物质是由硫代巴比土控制破坏性反应(10]。蛋白质的痴迷是阴暗的控制技术(11]。维生素c测定血清中根据遗嘱,和。Wimalasiri策略12]。过氧化氢酶(CAT)的活性被Aebi定居在25°C说(13]。反应混合物包含40毫米H2O2在50 mm磷酸22支持ph - 7.0,和0.1毫升纯酶3毫升的总量。过氧化氢酶(CAT)的发展是在吸光度减少调查的H2O2在240纳米。
部分纯化的猫是由凝胶过滤色谱法利用交联葡聚糖g - 75段。部分被填充到1.0×90厘米的玻璃部分和平衡0.1磷酸摇篮[Ph-7]。总蛋白和化学被解决(11]。动态部门公认为过氧化氢酶的运动通过观察A240减排。随后的过滤的部分聚集和汇集deae纤维素部分(2×10厘米),平衡与磷酸盐缓冲剂(pH值7)。
统计分析
结果的平均值7道。相关的三种估计方法利用显著水平的P < 0.05是通过一种途径调查改变(方差分析)利用状态图形计算机系统,5.1变体。
结果与讨论
一笔7各种葡萄籽(圣诞玫瑰,意大利,皇帝,马斯喀特的亚历山大,早期马斯喀特,红地球,和黑色玫瑰)考虑。TAC、MDA和维生素C是物质的七个种类的葡萄种子排列在吗表1。结果表明,圣诞玫瑰,红地球、黑玫瑰有最大的维生素C物质和马斯喀特亚历山大的最小维生素C从这个调查内容。MDA在马斯喀特亚历山大的最大的物质和皇帝有至少从这个分析MDA含量,和早期马斯喀特最大的TAC物质和黑色玫瑰最少TAC内容从这个调查。所示表1。
葡萄的种子 | TAC (平均数±标准差) |
MDA (umol / L)(平均数±标准差) |
服用维生素C (mg / dl) (平均数±标准差) |
---|---|---|---|
圣诞玫瑰 | 0.42±0.029 | 0.40±0.01 | 15.58±0.03 |
意大利 | 0.47±0.002 | 0.41±0.02 | 11.50±0.05 |
皇帝 | 0.44±0.01 | 0.25±0.01 | 8.25±0。13 |
马斯喀特的亚历山大 | 0.55±0.01 | 0.54±0.01 | 2.13±0.01 |
早期马斯喀特 | 0.59±0.01 | 0.35±0.10 | 9.80±0.15 |
红色的世界 | 0.33±0.01 | 0.39±0.01 | 14.95±0.05 |
黑玫瑰 | 0.09±0.011 | 0.34±0.01 | 15.73±0.27 |
表1:平均值和标准偏差的TAC, MDA和维生素C从不同种类的葡萄种子。
在最近的十年中,无数的化验中总抗氧化能力的营养和有机晶格。他们每个人都有自己的属性;有差异的自由基使框架中,原子的目标,终点,活跃,自然网格,在lipo-and亲水舱和生理意义。每一个重要的影响参数不能评估只利用一个测试公约(14]。
提出电子给予限制,反映生物活性的减少力量混合,是与细胞强化行动。抗氧化剂可以的还原剂,失活的氧化剂还原可以描绘成氧化还原反应的反应哪一个物种类型的损害减少氧化的其他15]。每个值复制三次实验(平均数±标准差)。
安排的有很多评论抗氧化剂参数,例如,水果和蔬菜来源,维生素C含量自报告暗指维生素C从卷心菜它有17.416(10毫克/ g), 1.868(毫克/ 10 g)从酸橙和4.337(10毫克/克)橙(16]。
抗氧化剂帮助细胞从活性氧的伤害效应是安全的,如过氧化物、单线态氧、过氧化氢、羟基自由基、过氧化氢自由基和过氧化亚硝酸盐。几个ROS,例如,超氧化物和过氧化氢,往往是在细胞的上后果比对表明分子生化反应(17]。
ROS活动可以通过抗氧化植物显然是有限的。动态成分中发现一些抗氧化剂草药的反应显然与活性氧的清除和减少ROS活动(18]。过氧化氢酶(EC.1.11.1.6)是一个四聚物的血红素含有酶中发现每一个充满活力的生活被假设在确保关键部分细胞对氧化压力(19]。
安排的有很多评论抗氧化剂参数,例如,猫从各种来源的活动,因为报告暗指来自过氧化氢酶活性麻风树来源有173.2 (U /毫克)和26.03积雪草的。在充满活力的生命形式和植物,氧气是一个基本组件还可以减少和帧ROS是危险和限制变量在发展和进步的植物20.]。过氧化氢酶活性在不同类型的葡萄在种子表2。高过氧化氢酶特定的活动中看到红色的种子集中全球(0.192户/ mg)角度高具体行动的红地球,预备审查已经完成可萃取性,可靠性和性能的粗酶。
葡萄的种子 | Cat活性单位/毫升 (平均数±标准差) |
总蛋白(毫克/毫升) (平均数±标准差) |
具体的活动 单位/毫克 � |
---|---|---|---|
圣诞玫瑰� |
24.63±0。631年 | 153.075±5.13 | 0.161 |
意大利� | 18.11±0.28 | 105.06±10.00 | 0.172 |
皇帝� | 14.41±0.85 | 103.755±8.04 | 0.138 |
亚历山大�马斯喀特 | 2。78±0.75 | 53.59±7.52 | 0.051 |
马斯喀特初� | 18.49±0.15 | 105.12±6.10 | 0.175 |
红地球� | 12.21±1.155 | 104±7.79 | 0.192 |
黑玫瑰 | 15.72±0.62 | 126.10±2.01 | 0.124 |
表2:猫活动的平均值和标准偏差,总蛋白和特定的活动从不同种类的葡萄种子。
每个值复制三次实验(平均数±标准差)。在这项研究中过氧化氢酶纯化从红地球葡萄。数据与过氧化氢酶的纯化红一直在总结全球种子表3。
净化步骤 | 活动(单位/毫升) | 总 活动 (单位) |
总 蛋白质(毫克/) |
具体的 活动 (单位/毫克)。 |
褶皱净化 | 恢复(%) |
---|---|---|---|---|---|---|
粗酶 | 12.21 | 244.2 | 104年 | 0.192 | 1 | One hundred. |
交联葡聚糖g - 100 | � 30.92 |
61.84 | 20� | 1.546� | 0.64 | 25.32 |
EDTE-Sepharose | 57.29 | 114.58 | 5.2 | 11.02 | 7.12 | 185.2 |
表3:净化总结红地球葡萄籽的过氧化氢酶。
这种酶筛选了孤独物种类型在底层交联葡聚糖g - 100色谱法风险作为证明图1。额外的酶是通过清除EDTE-Sepharose凝胶过滤图2。表3压缩的后果的每一个进展过氧化氢酶清洗。化学提纯约7.12倍,最后具体活动11.02 U /毫克。
图1:非典型的洗脱图色谱法猫。
图2:非典型的洗脱图色谱法猫。
特定的过氧化氢酶的活性峰值为11.02 U / mg看着红地球葡萄籽。具体活动有提升每一个纯化步骤(21]。看着特定酶活性的上升在每个部分纯化的过氧化氢酶纯化步骤是香蕉皮,和Van苹果(金冠苹果),至6.85,8.7折痕,收益率为40%和11%,分别为6.85,8.7折痕,收益率为40%和11%,分别(22,23]。
结论
在结果的前提下获得从不同的7种葡萄籽(圣诞玫瑰,意大利,头,马斯喀特的亚历山大,早期马斯喀特,红地球和黑玫瑰)一个像样的源泉的声音,红地球葡萄籽好热点过氧化氢酶催化剂。这些发现保证另外的清洁检查细胞强化复合从不同种类的葡萄籽,因为葡萄的种子可能有助于避免疾病的自由基。
引用
- Msaada K, Jemia MB,萨勒姆N, et al。methanolic提取物的抗氧化活性三芫荽(Coriandrum一l .)水果品种。阿拉伯J化学2013;12 (11)。
- Carocho M,费雷拉IC。回顾抗氧化剂,prooxidants和相关争议:天然和合成化合物、筛选和分析方法和未来的观点。食品化学Toxicol。2013; 51:15-25。
- Shebis Y, Iluz D, Kinel-Tahan Y, et al .天然抗氧化剂:功能和来源。食物营养Sci。2013; 4 (6): 643。
- Tayefi-Nasrabadi H, Dehghan G, Daeihassani B, et al。一些过氧化氢酶的生化特性从红花(红花l .素简历。m - cc - 190)。误判率J阿格利司杂志2011;6 (23):5221 - 6。
- Kim SY Jeong SM,公园WP, et al。葡萄籽的加热条件对葡萄籽提取物的抗氧化活性。食品化学。2006;97 (3):472 - 9。
- Guendez R, Kallithraka年代,Makris d的决心低分子量在葡萄多酚成分(葡萄sp。)种子提取物:相关性与反激进主义的活动。食品化学。2005;89:1-9。
- 李,王X,李P,等。抗氧化活性的比较研究葡萄(葡萄)种子粉评估不同的方法。J食品药品肛门。2008;16 (6)。
- 萨利赫N, Nadia h .葡萄籽萃取物的保护作用毒性药物阿霉素诱导的雄性老鼠。生物科学和生物技术的进步。2014;5:1078 - 1089。
- 敌我识别B,应变j .等离子体的铁还原能力(收紧)作为衡量抗氧化力量:收紧化验。学生物化学肛门。1996;239:70-6。
- Bailly C, Benamar Corbineau f变化的丙二醛含量和超氧化物歧化酶,过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶活动在葵花籽在加速老化与恶化。杂志。1996;97:104-10。
- 阴暗的h . Rosebough蛋白质测量folin苯酚。J生物化学杂志。1951;193:265 - 75。
- 遗嘱R, Wimalasiri P,绿地h .液相色谱microfluorometry, dye-titration测定维生素C在新鲜水果和蔬菜。肛门化学协会。1983;66:1377-9。
- Aebi h .过氧化氢酶在体外。:在酶学方法。美国学术出版社。1984;105:121-6。
- Pulido R, Saura-Calixto f .杯1贡献的饮料,亲脂性的,亲水的摄入量抗氧化剂在西班牙的饮食。欧元J减轻。2003;57:1275 - 82。
- 阿利尤古萨乌AB,马易卜拉欣,穆萨,et al .自由基清除和总抗氧化能力的根提取物Anchomanes difformis英格兰(天南星科)。Acta波尔制药。2013;70(1):115 - 21所示。
- 穆罕默德QY,哈马德WM穆罕默德·埃克。光度法测定总维生素C在Koya区域在某些水果和蔬菜吗?伊拉克库尔德斯坦地区/。J基尔库克大学吗?Sci钉。2009;4。
- Al-Sowayan NS Mahmoud NH。葡萄籽萃取物的保护作用毒性药物阿霉素诱导的雄性老鼠。生物科学和生物技术的进步。2014;5 (14):1078 - 89。
- 斯坦格尔V,洛伦兹米,斯坦格尔k .茶和茶的作用类黄酮在心血管健康。分子营养和食品研究。50 2006;(2):218 - 28。
- Chaudi�再保险J, Ferrari-Iliou r .细胞内抗氧化剂:从化学到生物化学机制。食品化学Toxicol。1999; 37 (9): 949 - 62。
- Deshpande党卫军,Madhavi DL Salunkhe DK。食品抗氧化剂:技术、毒理学和健康视角。CRC出版社。1995年。
- 罗文PC, Switala J,尹浩然,Smolenski。分子特征的三个突变katG影响hydroperoxidase我的大肠杆菌的活性。生物化学细胞杂志。1990;68 (7):1037 - 44。
- Farhan LO Hameed Mustafa SA。从香蕉皮部分纯化和表征的过氧化氢酶。2016年。
- 金正日L,设计D, Yoon WC。人类肝脏过氧化氢酶的克隆、表达和描述的单克隆抗体。摩尔的细胞。2003;15:381 - 86。