原文

,数量:16 (14)

• 查看PDF
• 下载

UPLC-MS / MS方法,动力学研究和同时测定氨氯地平阿托伐他汀的大部分,及其结合剂型

*通信:

艾哈迈德·米药物化学部门,学院制药、静脉以往,以往大学1179年开罗,埃及,电话:+ 61469762571;传真:+ 20225541601;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

这项工作的目的是开发和验证一个简单的、敏感的和快速的方法同时定量氨氯地平阿托伐他汀的大部分及其总和制药配方和应用程序强制降解方法的研究。色谱分离达到50 mm×2毫米,1.9μm海波西尔金列,梯度洗脱。分析物被发现使用选择性反应监测(SRM)模式在一个三重四极质谱仪加上电喷雾电离(ESI)在积极的工作模式和消极的模式对氨氯地平(AMO)和阿托伐他汀(ASN)分别。检测是通过监测409.47→238.22 (m / z), 557.65→397.27 (m / z)和256.15→167.07 (m / z)氨氯地平、阿托伐他汀和苯海拉明(分别)。该方法验证(3-50)ng / mL的浓度范围,为氨氯地平(0.8 -50)ng / mL (AMO)和阿托伐他汀(ASN)分别为线性,robusticity内部,埋葬天的再现性。检测下限(LOD)被发现是0.23 ng / mL和0.56 ng / mL和定量下限(定量限)被发现是0.69 ng / mL和1.7 ng / mL分别为氨氯地平阿托伐他汀。量化的方法成功应用阿托伐他汀和氨氯地平在实验室大部分混合物及其结合制药剂型。还强调降解研究中使用该方法的识别降解产物和动力学参数的计算。

关键字

UPLC-MS /女士;氨氯地平;阿托伐他汀;强制降解;动力学退化

介绍

高血压患者动脉粥样硬化的发病率高。钙通道阻滞剂(ccb)已成功地用作抗高血压在过去几十年。另一方面,他汀类药物降低血液中展示了一个强有力的效应程度的脂质(1]。建行和他汀类药物可能有相加或协同效应在预防冠状动脉粥样硬化(2]。氨氯地平(AMO) (IUPAC: 3-Ethyl 5-methyl 2 - [(2-aminoethoxy)甲基]4 - (2 - chlorophenyl) 6-methyl 4-dihydro, 5-pyridinedicarboxylate和中科院:88150-42-9)(图1)是一种钙通道阻断剂用于治疗慢性心绞痛和稳定管理轻度到中度的基本高血压(3]。AMO抑制钙离子进入血管和心脏肌肉(4]。阿托伐他汀(ASN) (IUPAC:(3 r、5 r) 7 - [2 - (4-fluorophenyl) 3-phenyl-4 (phenylcarbamoyl) 5-propan-2-ylpyrrol-1-yl], 5-dihydroxyheptanoic酸和中科院:134523 - 00),(图1)是一种第二代3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme(β)还原酶抑制剂。它可以防止通过抑制胆固醇的合成β-还原酶,这将防止胆固醇生产。显著降低总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和血浆甘油三酯已经看到了长期口服ASN [5]。介绍了几种分析技术测定散装AMO粉,制药配方和体液。这些技术包括高效液相色谱法(高效液相色谱)与紫外检测6,7)、高效液相色谱法和荧光检测(8),液体色谱法耦合单quadropole质量光谱法(LC / MS) (9),液体chromatography-tandem质量光谱法(质/ MS) (10,11)伏安法(12- - - - - -14)荧光光谱测定法(15,16),毛细电泳(16和可见分光光度法17- - - - - -20.]。另一方面,分析散装阿托伐他汀,制药配方和体液被报道。这些方法包括HPLC-UV [21,22],LC / MS [23)、高性能薄层色谱法(效果)与光密度检测24),电位法(25和分光光度法26]。各种方法已报告的同时估计AMO和ASN结合剂型和等离子体。这些方法包括高效液相色谱法(27- - - - - -29日),(质/ MS) (30.,31日)分光光度法(32],伏安法[33]。氨氯地平阿托伐他汀和介绍了制药剂型治疗患者的总和高血压和hyperlipidaemia。结合增加了需要开发一个敏感、准确和简单的方法同时测定每种药物的药品剂型混合物。提出工作的另一个目的是研究AMO的稳定性和ASN压力强制降解。据我们所知没有报道的方法同时测定氨氯地平阿托伐他汀在他们的药物组合,压力强制降解或UPLC-MS / MS谱分析。

实验

化学药品和试剂

氨氯地平besylate和阿托伐他汀钙从埃及请授予国际制药工业有限公司(EIPICO) (Sharqia斋月十城,埃及)。这两个的纯度药物正在研究使用参考方法测定,发现99.54%氨氯地平besylate [27)100.03%,阿托伐他汀钙(21]。苯海拉明(是)、高效液相色谱级溶剂(甲醇和乙腈)和甲酸从Sigma-Aldrich购买,Steinheim,德国。得到纯去离子水(ELGA Purelab flex)水净化系统。AMO和ASN配方Caduet 10/10平板电脑获得辉瑞,埃及。

仪表

一个Accela U-HPLC系统组成的一个Accela 1250泵和Accela开放autosampler(热科学公司(美国)是用于样品和溶剂。TSQ量子访问MAX三阶段四极质谱仪(热科学公司,美国),配备了加热电喷雾电离(H-ESI)源用于靶向药物的分析。质/ MS的控制系统中,数据的采集和分析进行了使用Xcalibur软件2.2版。

色谱和质谱条件

进行色谱分离Hypersil-Gold列(50毫米×2.0毫米,1.9μm,热科学、美国)。梯度洗脱是使用流动相组成的0.1%的甲酸水(溶剂)和0.1%甲乙腈:水的比例95:5 (v / v) (B)溶剂洗脱梯度是10%到90% B(0 - 0.7分钟),保持B 90%(0.7 4分钟),并逐渐回落至10% B在总运行时间为5分钟。5分钟总流速0.25毫升/毫升。

每个化合物的质谱条件优化的连续注入标准解决方案(1μg /每毫升的流动相)10μL使用哈佛输液泵/分钟。串联质谱计是在选择反应监测(SRM)模式。蒸发器的温度保持在400°C, ion-spray AMO电压是3600 V, -3000 V的ASN。鞘气体压力是15 psi和辅助气体5 psi。碰撞能量,31日和14 AMO, ASN,分别。

标准的解决方案

股票的标准解决方案0.1毫克/毫升AMO, ASN,准备在甲醇和储存在4ºC。进一步稀释每股票标准的解决方案是使用甲醇获得适当的工作标准的解决方案,也被储存在4ºC。

程序

建设的校准曲线

标准校准解决方案准备工作的每种药物的标准解决方案。这些校准解决方案包含了两个药物的浓度范围(0.8 -50)ng / ml AMO, AVN (3-50) ng / ml。每个校准解决方案有5 ng / ml的浓度。每个解决方案的10卷μL注入LC - MS / MS系统。对于每一个药物,校准曲线是由策划峰值区域的比率是峰地区与相应的浓度。

实验室准备的混合物

每一个两个的工作标准的解决方案药物在不同混合比例获得二进制AMO的解决方案和ASN的浓度范围(0.8 -50)ng / ml,分别(3-50)ng / ml。这些二进制的解决方案是化验后校正曲线的程序建设。

分析药品剂型

十片包含两种分析物了,粉和均质。一个准确的金额相当于10毫克药物与甲醇提取过滤。不同整除被送往获得浓度范围(0.8 -50)ng / ml和ng / ml(3-50)分别AMO和ASN。这些稀释后化验程序建设的校准曲线。

动力强迫降解

确定强制降解(AMO的酸性、碱性、氧化)和ASN是由使用0.1 n HCl, 0.1 n氢氧化钠和3%的过氧化氢。为每个0.01毫克药物在10毫升甲醇溶解,转移到25毫升容量瓶稀释和0.1 n HCl, 0.1 n氢氧化钠和3%过氧化氢在每种情况下。这些解决方案都保持在70°C,除了双氧水进行室温保存时间间隔(0、10、20、30、40、50、60)分钟。在指定的时间后样品在酸和碱中和通过添加适当的体积和常态的氢氧化钠和盐酸,而联合国对过氧化氢被声波降解法去除。中和的解决方案是用流动相稀释获得25 ng / ml的每种药物。剩余的AMO的浓度和ASN在不同的时间间隔是由该方法所决定的。

结果

方法开发

优化的SRM转换(前体离子m / z→产品离子m / z): m / z ASN 557.65→397.19, 409.47→238.22 AMO和256.15→167.11。在这些LC - MS / MS条件下,AMO的保留时间,ASN 2.1,分别为2.52和2.23分钟。代表质/ MS色谱图所示图2。优化喷雾器电压做是为了确保分析物的离子化。喷高电压可能容易排放。减少喷涂电压降低不必要的副反应可能干扰信号强度降低。获得良好的色谱分离和为后续的量化工作峰值特征,流动相的选择是一个重要因素。分析物的色谱分离是实现足够的保留时间和峰的形状使用梯度洗脱和0.1%的甲酸水和乙腈海波西尔金(50毫米×2毫米,1.9μm)列。不同的流量测试和最优流量为0.25毫升/分钟。与这些色谱条件下,峰的形状是量化的工作即使在非常满意低浓度(图3)。

方法验证

验证我们的方法是由我指导方针后Q2 (R1)推荐(乐动KENO快乐彩34]。

线性和范围

分析方法的线性是由校准用标准样品的浓度范围(0.8 -50)ng / ml (3-50) ng / ml,分别AMO和ASN。校准曲线是由每个分析物的峰面积比值的线性回归对相应的得到使用1 / concentration2权重因子的浓度。线性浓度和峰面积比之间的关系药物被发现。线性回归方程中列出(表1)。

表1。对氨氯地平阿托伐他汀的线性数据提出质/ MS方法*。

定量限度(定量限)和检测极限(LOD)

检测极限(LOD)分析物的最低浓度,可以很容易地检测到,而定量的限制(定量限)是分析物的最低浓度,可以量化的方法。LOD、定量限的计算都是基于响应的标准差(SD)和校准曲线的斜率。

LOD = 3.3σ/ s (s =校准曲线的斜率)

定量限= 10σ/ s(σ= SD的反应)

σ可以从SD空白获得响应,标准差y-residual回归线(S_{y / x})和SD回归直线的截距35]。我们的计算基于SD的拦截。中列出的结果表1。

精度

评价该方法的准确性是由5个浓度的标准溶液的分析每个药物三次。该方法的结果与从参考方法(27]AMO和ASN [21]。

统计方法的性能比较与报道的方法表明,没有显著差异的准确度和精密度如图所示,结果学生的t检验和方差比率分别野生(表2)。

表2。该方法获得的数据的准确度和精密度和报道的分析氨氯地平阿托伐他汀的纯粹的形式。

精度

盘中精度评估是由复制试验标准的解决方案的研究药物同一天,inter-day精度均通过复制的标准解决方案的试验研究药物连续三天(表2)。

系统适用性

系统适用性用来证实色谱系统的适用性进行分析具有高准确度和精密度的同意。按照USP指南(乐动KENO快乐彩36)和与一致性参数值(37]。方法的适用性是通过与外部方法,采用定量的分析物浓度之间的线性范围的分析物(3-50)ng / mL和(0.8 -50)分别ng / mL AMO和ASN。分析物的峰面积。AMO的浓度和ASN得到以下方程:

AMO Y = 0.0358 * C + 0.2702 r²= 0.999

ASN Y = 4.52×10³C + 7.00×10³r²= 0.999

C是每种药物的浓度在ng / ml, Y是药物和之间的面积比。该方法的测试系统的适用性表示通过测试中显示表3。

表3。结果该方法的系统适用性试验。

该方法的鲁棒性

分析方法的鲁棒性措施的能力它抑制分钟但深思熟虑的方法参数的变化(38]。评价该方法的鲁棒性色谱以及完成,质量参数,如流量的流动相(±10μL /分钟),蒸发器温度或转让毛细管温度(±5°C),碰撞能源(±2 V)和鞘气体压力(±5 psi)的值的变化不显著峰值区域。

该方法的应用

该方法应用于分析实验室AMO和ASN在不同比例的混合物。满意的结果和上市表3。Caduet 10/10平板电脑进行分析使用我们提出质/ MS方法证明其效率的分析AMO和ASN制药剂型的质量控制测试。每种药物的浓度计算使用相应的回归方程,该方法得到的。SRM模式检测产生高度的选择性测量离子从指定的父离子唯一指定产品。验证应用程序在制药剂型标准除了技术应用(39]。中列出的结果表4和5。

表4。氨氯地平阿托伐他汀在实验室测定混合物的方法。

表5所示。测定氨氯地平阿托伐他汀在他们的结合平板电脑使用标准技术。

动力强迫降解

医药产品在储存期间发生的降解不同的利率。这些反应是受不同的条件如温度、pH值的解决方案,光、氧化。这些退化的订单取决于浓度的时间变化之间的关系。大多数药物的降解遵循零阶、一阶或伪一阶40]。因为AMO和ASN评议大量的地方,这两种药物的降解是显示符合一级动力学(41]。符合一级获得的两个反应物浓度在不同的比率,这样任何变化主要反应物(酸或基地,过氧化)将小反应物的浓度变化相比可以忽略不计(药物)。策划的日志%剩余浓度与时间,评估每种药物的动力学退化参数在酸性、碱性、氧化条件。速率常数(K),时间留给50%力量(t_1/2)和时间留给90%力量(t90)为每个迫使条件获得下列方程(42]。

降解动力学参数的结果所示表6。

表6所示。摘要降解动力学参数的准一阶反应。

降解产物的识别

AMO和ASN在酸的降解产物,基地并被质过氧化物。AMO Q1扫描的这些产品标识为主要产品和m / z为407.32,208.13和163.19。

讨论

优化质量和色谱参数取决于化合物的结构。酸性的那一部分的存在在AMO ASN和基本的一半,是增强电离的ASN -模式(mh)的形式,积极模式的形式[M + H) + AMO,。使质子化和deprotonated形式在Q1扫描,主导,被用来作为前体离子获得第三季度产品离子光谱(图4)。离子抑制效应产生的矩阵是最小化的优化喷雾AMO电压为3600 V, 3000 V的ASN。迫使退化在温和的条件下进行的酸、碱和过氧化。降解产物m / z = 407.32成立的氧化剂如过氧化的芳构化,4-dihydro吡啶吡啶(43]。其他2降解产物在酸性和碱性介质形成的。预测的结构机制的形成和确认的报告数据(44,45]。ASN降解产物的鉴定质透露,m / z = 521.17成立于酸性和碱性介质由于形成内酯,紧随其后消除一个水分子形成酐的ASN内酯。而酰胺的水解消除苯胺在酸性和碱性介质产生m / z = 464.62。以防氧化降解的ASN侧链被撤ASN产生m / z = 397.87。预测的结构机制的形成和确认的报告数据(46]。

结论

总之我们开发和验证一个新的UPLC-MS / MS方法同时测定氨氯地平阿托伐他汀的大部分和制药剂型。该方法简单、快速、选择性和敏感。的有效性方法支持常规分析的适用性和质量控制测试的氨氯地平阿托伐他汀药物剂型。的稳定药物在酸性、碱性和氧化介质显示AMO和ASN都迅速退化的媒介进行测试。两者都遵循伪的退化——一级动力学。AMO的t1/2值和ASN在测试中按照以下顺序是减少酸性氧化碱和碱性,酸性和氧化介质分别AMO和ASN。识别的一些AMO的降解产物和ASN是由质。

作者的贡献

第一和第二作者的贡献同样对这项工作

引用

1. Quon MJ Koh KK,韩寒SH, et al .添加剂的有利影响与氨氯地平阿托伐他汀联合轻度到中度高血压患者。Int心功能杂志。2011;146(3):319 - 25所示。
2. Jukema JW,范德Hoorn JW。氨氯地平阿托伐他汀在动脉粥样硬化:回顾联合治疗的潜力。专家当今Pharmacother。2004; 5 (2): 459 - 68。
3. 威尔逊JH Gisvold。有机药物和药物化学。12。比尔JM,阻止JH,编辑。纽约:Lippincott威廉姆斯和威尔金斯;2010年。
4. 汗毫克。心脏药物治疗。纽约:胡玛纳出版社有限公司;2007年。
5. 据美联社,Lea McTavish d·阿托伐他汀。审查的药理学和治疗的潜力管理hyperlipidaemias。药。1997;53 (5):828 - 47。
6. Zarghi, Foroutan SM, Shafaati et al .验证的高效液相色谱方法测定人血浆中氨氯地平及其药代动力学研究中的应用。Farmaco。2005; 60 (9): 789 - 92。
7. Bagyalakshmi J,拉维·t·菲利普•SM产物的开发和优化方法的估计(-)氨氯地平片剂剂型。Der制药Chemica。2011; 3 (4): 140 - 5。
8. 巴拉米G, Mirzaeei SH。简单和快速的高效液相色谱方法测定氨氯地平在人类血清荧光检测及其药代动力学研究中使用。J制药生物医学肛门。2004;36 (1):163 - 8。
9. 邹Q,詹Y, Z, et al .液相色谱-光谱法方法测定人血浆中氨氯地平及其生物等效性研究中的应用。Arzneimittelforschung。2009; 59 (8): 383 - 91。
10. Devani KP Bathula SNP。定量测定人血浆氨氯地平的超高效液相色谱-电喷雾电离质谱分析:应用临床药代动力学研究。亚洲JPharmaClinRes。16 2012;5 (5):89 - 93。
11. 周Shentu J,傅L H, et al .测定人血浆氨氯地平的使用自动化在线固相萃取HPLC-tandem质谱:应用生物等效性研究的中国志愿者。J制药生物医学肛门。2012;70:614-8。
12. Kazemipour M,安萨里米,穆哈马迪,等。利用吸附方波阳极溶出伏安法在碳糊电极测定氨氯地平besylate制剂。J分析化学杂志。2009;64 (1):65 - 70。
13. Goyal RN,俾斯诺依美国再驱车伏安测定氨氯地平besylate人类尿液和药品。生物电化学。2010;79 (2):234 - 40。
14. Stoiljkovi Z,最终20 M, Petrovi年代,et al .伏安和方波阳极StrippingDetermination ofAmlodipine Besylate黄金电极。IntJElectrochemSci。2012;7:2288 - 303。
15. Abdel-Wadood嗯,Mohamed NA马哈茂德。验证spectrofluorometric方法测定氨氯地平besylate平板电脑。Spectrochim学报一摩尔Biomol Spectrosc。2008; 70 (3): 564 - 70。
16. Mikus P, Marakova K, Valaskova我,et al。测定氨氯地平对映体在药品使用毛细管电泳分离和二极管阵列检测。Pharmazie。2009; 64 (2): 76 - 9。
17. Gohil K, Trivedi P, Molvi K Amlodioine的光度分析Besylate散装和片剂剂型。印第安纳州J医药科学。2005;6:376-8。
18. 莎玛SA,阿明,Mabrouk ESM, et al .效用的氧化还原反应光度法测定氨氯地平Besylate。ArabJChem。2009;2 (1):95 - 102。
19. Almani F,皮菲利普-马萨,Memon啊,莫卧儿王朝UR, Laghari MGH, Memon N, et al。光度法测定氨氯地平Besylate使用2-Hydroxynaphthaldehyde Derivatizing试剂。亚洲JChem。2010;22(2):1205 - 13所示。
20. Aswini GL, Dhachinamoorthi D, Rao JVLNS, et al。可见光度法测定氨氯地平Besylate散装药品和平板剂型。Res J制药技术。2011;9 (4):1432 - 5。
21. 穆斯塔法克,阿兹,Ahmad陆地,et al . Stability-indicating rp -散装阿托伐他汀药物的分析方法,销售平板电脑和nanoemulsion配方。JChilean ChemSoc。55 2010;(2):184 - 8。
22. 马XT, H,刘结核病。中国新药杂志。2011;024年。
23. 陈董马L, J, X, et al。开发和验证LC-ESI-MS和应用阿托伐他汀的生物等效性研究在中国健康志愿者。色谱学。2007;65 (11):737 - 41。
24. Shirkhedkar AA, Surana SJ。开发和验证一个反相高效薄层chromatography-densitometric方法确定的阿托伐他汀钙原料药和平板电脑。采用AOAC公认的Int。2010; 93 (3): 798 - 803。
25. 军刀。PVC膜电位测定传感器的阿托伐他汀在生物样品和制剂。电分析。2013;25(12):2707 - 14所示。
26. 万尼为助教,哈利勒NY,任嗯,et al .小说microwell-based光度分析测定阿托伐他汀钙的药物配方。化学分j . 2011; 5 (1): 57。
27. 穆罕默迪,Rezanour N,尹浩然,安萨里Dogaheh。stability-indicating高效液相色谱(HPLC)测定的同时测定阿托伐他汀和氨氯地平在商业平板电脑。J Chromatogr B分析化学抛光工艺生物医学生命科学。2007;846(1 - 2):215 - 21所示。
28. Hefnawy MM,苏丹,Al-Johar h .毛细管的发展电泳同时观测技术和氨氯地平阿托伐他汀联合药物制剂。遗传代数J液体Chromatogr抛光工艺。2009;32 (20):2923 - 2942。
29. 哈菲兹嗯,阿卜杜拉AE - LM, et al .定量测定氨氯地平Besylate,洛沙坦钾、缬沙坦和阿托伐他汀钙的高效液相色谱制药配方。J色谱仪Separat Techniq。2014; 5 (3): 226。
30. 于问,胡锦涛ZY,朱镕基,财政年度的同时测定et al . HPLC-MS-MS阿托伐他汀和氨氯地平在高血压患者血浆。色谱学。2011;73 (3):257 - 62。
31. Pilli NR、Inamadugu JK Mullangi R,等。同时测定阿托伐他汀,氨氯地平、雷米普利和贝那普利在人类血浆质/女士及其人体药代动力学研究中的应用。生物医学Chromatogr。2011; 25 (4): 439 - 49。
32. 达尔维什HW哈桑SA,萨勒姆,等。三个不同的光谱光度测量的方法操纵比二元混合物的光谱测定氨氯地平阿托伐他汀。Spectrochim学报一摩尔Biomol Spectrosc。2011; 83 (1): 140 - 8。
33. Topal BD, Bozal B, Demircigil BT, et al . Electroanalytical研究和同时测定氨氯地平Besylate和Atorvastatine钙Ratio-Voltammetric二进制混合使用一阶导数的方法。电分析。2009;21 (22):2427 - 39。
34. Suhara Y, Kamao M, Tsugawa N, et al。方法测定人血浆中维生素K同系物使用高效液相chromatography-tandem质谱分析。肛门化学2005;77 (3):757 - 63。
35. Shrivastava,古普塔诉的方法检测极限的确定和限制的定量分析方法。记录的年轻科学家。2011;2 (1):21-5。
36. USPharmacopeia。USP 35-NF 30。罗克维尔市:美国Pharmacopeial公约,2012年。
37. Adamovics农协。色谱分析药品。纽约:马塞尔·德克尔公司。1997。
38. 分析方法的验证:文本和方法论。国际协调会议(我)的技术要求注册药品供人类使用。
39. 哈里斯。定量化学分析。纽约:WH弗里曼;2003。
40. Gorog美国药品安全、药品质量、药物分析。J制药生物医学肛门。2008;48 (2):247 - 53。
41. FlorenceAT AttwoodD。物理化学制药原则。第三版。伦敦:麦克米伦出版社,1998年。
42. 康纳斯KA,美沙酮GL, Stella六世。药物的化学稳定性:药剂师的手册,第二版。纽约:著名;1986年。
43. Hashemi MM, Ahmadibeni Y, Ghafuri h .芳构化汉栖1 4-Dihydropyridines过氧化氢在醋酸钴(II)的存在。Monatshefte毛皮化学。2003;134 (1):107 - 10。
44. 村上T, Fukutsu N,近藤J,等。应用液体chromatography-two-dimensional核磁共振光谱学使用各种常用列捕获和液体相色谱光谱法降解产物的识别在强调商业马来酸氨氯地平片。J Chromatogr a . 2008, 1181 (2): 67 - 76。
45. 女子RN,沙N, Bhalani V, et al . LC、MSn和质/ MS研究氨氯地平的降解产物的表征。JPharmaAnal。5 (1):33-42。2015;
46. 沙RP, Kumar V,辛格s .液相色谱/质谱研究阿托伐他汀及其压力降解产物。快速Commun质量范围。2008;22(5):613 - 22所示。