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预防香兰素对脂质过氧化物的影响和抗氧化剂在钾Bromate-Induced在成年小鼠毒性:生化和组织病理学证据

*通信:

萨阿德HB医学院药理学实验室,你/ 12 ES-13, 3029斯法克斯斯法克斯大学突尼斯
电话:+ 21674241888;传真:+ 21674246217;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

溴酸钾(KBrO3)是一种异型生物质导致一些疾病。我们的实验目的是为了评估潜在的心血管香兰素在脂质过氧化物,酶和非酶的抗氧化剂和组织病理学发现KBrO3-induced成年小鼠的毒性。的口服KBrO3 (2 g / L)成年小鼠有显著提高脂质过氧化作用和氧化蛋白质产品先进水平,并显著降低超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活动,减少谷胱甘肽的水平。香兰素的日常管理由intraperitonial注入(100毫克/公斤)KBrO3-induced老鼠一段15天明显下降的脂质过氧化水平和蛋白质氧化,并提高了抗氧化状态通过提高抗氧化酶的活动和非酶的抗氧化剂。心肌组织的组织病理学结果显示香草KBrO3-induced小鼠的保护作用。我们的研究结果表明,香兰素具有anti-lipoperoxidative实验和抗氧化活动KBrO3-induced心脏毒性。

关键字

溴酸钾;香草醛;毒性;氧化应激

介绍

的扰动pro-oxidant-anti-oxidant平衡赞成前者,导致潜在的损害,导致氧化应激。它说明了稳态水平的氧化损伤细胞,组织或器官,由活性氧引起的物种(ROS)。这些活性氧与细胞膜脂质反应,核酸,蛋白质和酶,导致细胞损伤和退化。它们参与许多疾病的病理生理学,包括糖尿病、阿尔茨海默氏症、帕金森病、致癌作用,诱变和老化1]。

溴酸钾(凯擘₃)已经被广泛用于水消毒,染发的解决方案,化妆品,食品2]。毒理学研究表明,凯擘₃是一个氧化剂造成神经毒性、肝毒性甲状腺毒性,引起间皮瘤在实验动物肿瘤的发展3,4]。一些研究调查了凯擘的氧化损伤和可能的机制₃全身的致癌性实验模型(5- - - - - -7]。凯擘₃诱发突变,基地改造、染色体畸变和基因表达改变,导致癌症(8]。用这个背景,重要的是,一个合适的预防/治疗对凯擘代理₃治疗被发现,这可能是廉价、方便、有效低剂量和毒性较小,方便的管理模式,一种抗氧化剂复合,在螯合凯擘可能是有益的₃从细胞内和细胞外的网站。使用草药和植物被证明成功的不同器官对氧化压力在不同的实验模型(9]。香草是一种治愈提取物,植物的生水果香草planifolia。香兰素抑制食品腐败在媒体实验室和果浆(10]。它已被证明有抑制作用的启动和推广致癌作用在不同的动物模型11]。这个增味剂有能力清除超氧化物和羟基自由基,中间体,与膜损伤(12]。许多药理活动被报道的香兰素是一种抗氧化剂(13),王亚南[14]和nephroprotective [15),敦促我们的研究对凯擘香兰素₃全身毒性。然而,缺乏信息可能的香兰素对凯擘引起的氧化膜损伤的影响₃。因此,本文描述了改善香兰素对凯擘的影响₃全身的氧化压力老鼠的心脏。

本研究的目的是检查香兰素对凯擘造成损害的保护作用₃中毒成年小鼠的心脏。香兰素的抗氧化作用可能是由凯擘抵消或减少不良影响₃。

材料和方法

实验动物

所有的实验都与男性进行瑞士小鼠体重40 g 45 g。实验是根据生活的一般指南使用动物在科学调查经伦理委员会批准斯法克斯的科学教师。乐动KENO快乐彩

实验设计

动物分组,每组12只老鼠:控制;凯擘₃(由他们的饮用水2 g / L);凯擘₃+香兰素(100毫克/公斤体重,腹腔内注射)和香兰素。15天的治疗后,所有的老鼠都牺牲了宫颈斩首。心脏组织立即删除并在ice-chilled正常生理盐水冲洗。一个已知的心脏组织的重量在5.0毫升的0.1米均质Tris-HCl缓冲区(pH值7.4)的解决方案。匀浆是离心机和上层清液用于各种生化参数的估计。

生化检测

心脏丙二醛(MDA)浓度,脂质过氧化反应指数,测定spectrophotometrically据德雷伯和哈德利(16]。简而言之,一个整除的提取上清液混合1毫升的三氯乙酸和离心10分钟。一个数量的1毫升的稍后通知试剂添加到500年μL上层清液和加热在90°C的混合15分钟。然后冷却和测量吸光度在532海里。MDA的MDA含量表示为nmol /毫克的蛋白质。

高级氧化蛋白产物(AOPP)水平测定根据当进入的方法等。(17]。每个样本的浓度AOPP用261厘米的消光系数计算¹毫米¹和结果表示为μ摩尔/毫克的蛋白质。

超氧化物歧化酶(SOD)活性在被波的方法和Fridovich化验18]。超氧化物自由基与氮蓝四唑反应的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和生产formazon蓝色。SOD消除了超氧化物自由基的形成,抑制formazon蓝色。颜色的强度成反比的酶的活性在560 nm和阅读。SOD的活性被表示为单位/毫克的蛋白质。

谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动测量根据Flohe Gunzler [19]。GPx催化谷胱甘肽降低氢过氧化枯烯的氧化。氧化减少谷胱甘肽是立即转换为相应的简化型NADPH的氧化,减少谷胱甘肽还原酶的存在和减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)形式。在340纳米测量吸光度下降。谷胱甘肽氧化的酶活性被表示为nmol /分钟/毫克的蛋白质。

过氧化氢酶(CAT)活性化验的方法Aebi [20.]。酶促反应是由添加一个整除的20μL均相的心和衬底(H₂O₂)浓度的0.5米中含有100毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)。吸光度的变化记录在240海里。猫活动计算μmol H₂O₂消费/分钟/毫克的蛋白质。

心减少谷胱甘肽(GSH)含量测定Ellman的方法(21),修改Jollow et al。22)基于一个黄色5的发展,5-dithiobis-2硝基苯甲酸是添加到含巯基化合物组。总之,3毫升的磺基水杨酸是添加到500年μL心脏匀浆的脱蛋白作用和混合磷酸盐缓冲剂是离心机在2500克15分钟。然后Ellman试剂添加到500μL上层清液。10分钟后吸光度测量在412纳米。总谷胱甘肽含量减少表示为μg /毫克的蛋白质。

组织病理学检查

从所有实验获得的心脏组织组立即用盐水洗,然后中性缓冲福尔马林溶液固定在10%。处理固定后,心脏组织石蜡包埋。然后,心脏组织被切割和苏木精和伊红染色())和高倍显微镜下检查(320×)和显微照片。

统计分析

使用统计软件包对数据进行分析程序统计视图5软件对Windows (SAS研究所、伯克利、钙、美国)。执行统计分析使用单向方差分析以及Fisher保护最小显著差测试作为一种事后测试组之间进行比较。所有的值被表示为±标准差(SD)的手段。在P < 0.05级别差异被认为是重要的。

结果

氧化损伤

香兰素在凯擘的抑制作用₃诱导过氧化损伤所示图。1。MDA的水平和AOPP显著增加(p < 0.001)凯擘的心脏组织₃对待动物相比,控制。补充的香兰素缓解MDA和AOPP水平与凯擘相比₃治疗组。没有显著差异值观察小鼠接受香兰素只比控制鼠标的价值观。

抗氧化活动

表1说明酶的水平抗氧化剂即过氧化氢酶、SOD、GPx控制和实验小鼠的心脏。显著降低心脏酶的活动抗氧化剂在凯擘(SOD, CAT和GPx)₃老鼠。单独使用香兰素的疗法并不影响任何测试参数。然而,在他们与凯擘的组合₃,抗氧化酶都归一化控制的价值观。香兰素的废除了凯擘引起的氧化损伤和毒性₃伴随着一个改良抗氧化酶的活动。

表1。酶促抗氧化活动(谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)、谷胱甘肽水平在成年小鼠的心脏控制或治疗期间与凯擘15天₃,凯擘₃+香草醛和香兰素。

表1说明了香兰素对谷胱甘肽的水平在正常和凯擘₃全身的老鼠。与凯擘诱发小鼠₃显示,显著降低(p < 0.001)谷胱甘肽的水平与正常控制老鼠(表1)。管理的香兰素凯擘(100毫克/公斤)₃全身的老鼠明显增加(p < 0.001)与凯擘相比谷胱甘肽的水平₃和诱导的小鼠。

组织病理学研究

控制老鼠的心脏组织正常心肌纤维和肌肉束与正常架构(图。2)。凯擘的心脏组织₃治疗小鼠显示心肌纤维分离血管充血,水肿、白细胞炎症、心肌坏死(图2 b。)。香兰素对小鼠的心肌部分显示略有分离心肌纤维与小炎症单核集合的焦点没有坏死损害(图2 c。)。香兰素alone-treated显示正常心肌纤维无病理变化(图2 d。)。

讨论

许多金属的毒性,包括凯擘₃,与活性氧的增加产量导致氧化压力在细胞(23]。在生活最丰富的ROS生成细胞超氧化物阴离子及其衍生物,特别是高反应性和破坏性的过氧化氢氧自由基导致细胞膜脂质(24]。MDA是一种代谢的产物产生的脂质过氧化物氧自由基引起的脂质氧化反应的组织。脂质过氧化反应,一种多不饱和脂肪酸的氧化变性,已经与改变膜结构和酶失活25]。在我们的研究中,凯擘的MDA含量增加₃治疗组在心脏表示严重的氧化应激。许多报道表明,过度的凯擘₃治疗导致严重的氧化压力和脂质过氧化增加(26]。它可以表明高脂质过氧化可能导致活动减少的抗氧化酶。谷胱甘肽是一种重要的化合物对多种细胞的调节功能。它有一个直接抗氧化功能通过与超氧化物自由基反应,形成过氧化自由基和单线态氧的氧化谷胱甘肽和其他二硫化。GPx是GSH-dependent抗氧化酶(25]。另一方面,SOD的歧化作用催化超氧阴离子(O₂)H₂O₂然后解毒,H₂通过过氧化氢酶(阿24]。过氧化氢酶是一种常见的酶中发现几乎所有的生物。其功能包括催化过氧化氢分解的水和氧气(27]。目前的结果支持假设凯擘的机制₃毒性与抗氧化防御系统的损耗。抗氧化剂酶活性显著下降,增加自由基的实验模型以及对象是典型的常用化疗方案中,这是凯擘特别相关₃治疗(28]。

在目前的研究中,观察到凯擘的谷胱甘肽水平下降₃治疗小鼠与对照组相比表明,谷胱甘肽的耗竭,导致脂质过氧化反应增强,而过度消费引起的脂质过氧化增加谷胱甘肽。GSH-dependent抗氧化剂酶的活动,在凯擘GPx活性显著降低₃组与对照组相比。GPx活性的降低可能是由于底物的减少可用性,减少谷胱甘肽(25]。SOD活性下降可能导致起始和传播凯擘的脂质过氧化作用₃治疗组(29日]。降低SOD活性不足以清除在正常代谢过程中产生的超氧化物阴离子(30.]。超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活动的减少可能是由于增加活性氧的生成过氧化物、过氧化氢等,进而导致抑制这些酶的活动(25]。众所周知,ROS不断生成在活的有机体内用于生理。然而,ROS生产能力之外的一种抗氧化剂系统可以导致氧化损伤脂质,核酸和蛋白质,导致氧化应激。过氧化氢酶H拾荒₂O₂生成的自由基清除超氧化物阴离子或草皮。当老鼠凯擘之前接受香兰素₃管理,减少SOD,猫和GPx活性被抑制。香兰素独自没有造成大的谷胱甘肽的变化内容和GPx的活动,猫和草皮。香兰素的保护作用是由于多酚类物质的存在。事实上,Moskaug et al。31日)报道,多酚调节的一个重要的表达在细胞抗氧化防御系统和酶解毒外源性物质。Akihiroet al。(32清楚地证实了我们的结论和验证这个分子的有益作用。

另一方面,心脏的组织病理学检查证实了香兰素对凯擘的保护作用₃诱导氧化损伤的器官系统。组织学变化的老鼠接受凯擘的核心₃与炎症表现为心肌纤维的分离单核集合,和心肌坏死。香兰素在凯擘的补充₃治疗小鼠改善凯擘的组织学改变₃中毒组和减少心脏损伤,这可能是由于抗氧化剂香兰素的礼节。从总体结果,得出的结论是,香兰素表现出抗氧化和anti-peroxidative属性,这可能会产生有益的影响对凯擘导致的氧化心脏损伤₃。香兰素的化学属性的可用性的酚醛氢氢捐赠激进的食腐动物和单线态氧饮料预测他们的抗氧化活性32]。

总之,香兰素是本研究中观察到的影响可以帮助预防和减少凯擘的心肌损伤的程度₃治疗小鼠以及改善心肌功能。针对这一点,香兰素可能被用作药物改善心肌病外源性物质引起的。

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