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体外抗菌的潜力Coturnix粳稻鸡蛋壳膜粉

*通信:

Irokanulo EO生物科学学院,微生物学计划,里程碑式的大学,PMB 1001 Omu-Aran Kwara州,尼日利亚,电话:+ 2347014720491;电子邮件:eoirokanulo@yahoo.co.uk

文摘

日本鹌鹑(Coturnix粳稻)蛋壳膜粉,虽然没有完全调查,已经被贫困人民使用用于治疗皮炎。我们进行了体外研究抗菌药物潜在的原油日本鹌鹑蛋壳膜,磨成粉,对两个细菌隔离;铜绿假单胞菌(ATCC6633)和金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和四个地方分离株真菌;黄曲霉、来自烟曲霉菌Microsporum audouinii和Microsporum gypseum。分析是基于琼脂扩散细菌和和琼脂稀释方法真菌生物分别。光度技术被用来确定最低抑制浓度(MIC)的粉末。抗菌活性的观察粉对两种细菌分离和四个真菌相比,控制药物;分别使用环丙沙星、氟康唑。虽然蛋壳膜被用于他们的低级,结果获得了一个抗菌粉的潜力。进一步评估这个天然产品用于治疗皮肤从细菌和感染导致真菌代理建议。

关键字

自然产品;抗菌药物;鹌鹑;蛋壳膜;在体外

介绍

使用天然产品抗菌剂的发展已成为有吸引力的,因为他们的明显低对人类的毒性细胞比综合生产。这种转变已经在全球得到了极大的关注和应用。

这个新方法健康护理管理和交付,目前主要在发达国家和发展中国家是欣赏更多的在缺乏资源的国家健康护理仍然持续,最初的一大部分人口依赖ethno-medicinal产品,以满足他们的主要食品健康保健需求(1]。在寻找有效的抗菌素,各种植物和动物来源的天然产物被测试;这种方法进一步推动下出现的传染性微生物的耐多药的品种。

提取天然有机产品发现有效的隔离用于药品的生产2- - - - - -4]。天然产物中被使用蛋从鸟类物种。鸡的胚胎囊蛋发现使用在其他领域由于其丰富的蛋白质含量。它被用于医学甚至是园艺(5- - - - - -7]。

蛋黄含有溶菌酶和蛋白,与少量的其他蛋白质壳角质层。这些成分具有强大的抗菌性。的其他成分蛋抗菌性包括矩阵的蛋白质和多糖,还发现在蛋壳角质层蛋膜(8- - - - - -10]。研究表明,这些矩阵蛋白能够防止通道和革兰氏阴性腐败细菌的增长蛋(11]。蛋膜蛋白也被运用于化妆品(12]。

蛋壳是一个复杂的、多功能生物矿物材料与有机相的脂质和蛋白质和多糖组成,羟磷灰石晶体,脂质和糖蛋白与抗菌药物的原则(13]。的鹌鹑蛋及其壳副产品被认为具有固有的营养和药用价值,成为众多非常受欢迎健康和营养;虽然大部分的报告这些科学尚未确定。尽管他们体积小,鹌鹑的营养价值蛋是关于鸡蛋的三到四倍。它们含有更多的蛋白质、维生素、铁和钾比鸡肉和鸭蛋(14]。报告显示,一个小鹌鹑的一部分蛋壳或其膜放在一个黑色的头;青春痘或粉刺可以擦掉皮肤瑕疵,可以治疗浅表感染(15]。以前的研究已经表明提取的鸟类蛋壳角质层评估他们的抗菌活性表现出杀菌活动对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌(13,16]。真菌引起的感染的皮肤,头发和指甲由于其能力获得养分角质化的材料。常见的皮肤真菌感染的例子包括脚气;也被称为脚癣和股癣股癣(17]。皮炎和其他相关表面的感染是普遍的在农村地区由于卫生差。的患病率皮炎也是由于个人的职业;尤其是农村贫困人口,职业等农业往往伴随着很流行压力诱发抑郁症产生的免疫系统的发展皮肤感染。引起的皮炎通常是无处不在的细菌等金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,病毒如单纯疱疹和皮肤真菌菌(18]。Microsporum, Epidermophyton和毛癣菌属是最常见的变形菌属涉及皮肤感染。

根据以往的科学虽然未经证实的报道称,鹌鹑蛋壳的治疗特性,本研究试图确定在体外的抗菌特性蛋贝壳粉在一些微生物常与主要或次要的原因皮肤感染。

材料和方法

收集和处理的鸡蛋

Coturnix粳稻家禽养殖场的鸡蛋是获得国家兽医研究所Vom高原州,尼日利亚。鸡蛋在4°C到存储灰尘免费使用。

的外面蛋壳轻轻但正确洗干净的水净化和清除秉承碎片和表面使用无菌蒸馏水漂洗干净。洗鸡蛋被允许风干,然后打开并清空内容到清洁无菌的容器。

的蛋贝壳在无菌洁净水浸泡一小时洗掉白蛋白残渣紧随其后的是另一个飞机的无菌蒸馏水冲洗洗贝壳。洗壳留给风干,然后放在玻璃瓶在烤箱30°C 24 h干燥恒重。

干蛋壳压碎在干净无菌瓷钵和进一步在沃伦搅拌机成细粉。结果从贝壳粉是存储在一次性无菌玻璃罐。

抗菌活性

的蛋贝壳粉是用于原油状态没有提取。的抗菌活性进行粉营养琼脂合并硝酸钠在培养皿中为0.8%。1毫升的琼脂培养基后来播种10³CFU /毫升铜绿假单胞菌(ATCC6633)和金黄色葡萄球菌(ATCC6583)悬浮液均匀地分散在琼脂表面,然后允许干在孵化器37°C。使用沟的方法,井测量0.5毫米直径在接种无聊琼脂培养基使用无菌琼脂打孔。四个浓度的蛋贝壳粉解决方案;1000毫克,500毫克,250毫克和125毫克,都准备在10毫升无菌蒸馏水和适当的混合使用旋涡混合器(全)600 rpm 60秒钟。混合物都淹没了,站在环境温度(28°C)在使用前48 h。井在接种琼脂之后满0.1毫升;相当于10毫克,5.0毫克,2.5毫克和1.25毫克的解决方案蛋贝壳粉/。同样,0.1毫升(10毫克当量)解决方案的控制药物环丙沙星(氟喹诺酮类),一种广泛使用的抗菌药物添加到控制井。三的测试进行了复制。

测定细菌微生物的最低抑制浓度(MIC)

两套,A和B蛋贝壳粉四种不同浓度的解决方案是由重;100毫克,50毫克,25 mg和12.5毫克的粉和重组9毫升的营养肉汤分别在无菌普遍的瓶子。第一组,添加1毫升,10³细菌悬液的CFU /毫升金黄色葡萄球菌(ATCC6583)和第二组管B, 1毫升每10³细菌悬液的CFU /毫升铜绿假单胞菌(ATCC6633)补充道。都彻底混合在一个漩涡机产生的最终浓度为10毫克/毫升,5毫克/毫升,2.5毫克/毫升和1.25毫克/毫升蛋贝壳粉。每个powder-organism混合物的吸光度测定立即使用分光光度计(Jenway UV / Vis分光光度计6705)的波长500 nm。这之后,混合的蛋贝壳粉和细菌生物被孵化37°C 24 h后的吸光度样品再次阅读在同一波长。两项数据均记录和比较来确定最低浓度与吸光度的变化。阅读前,汤是用作空白的不同浓度蛋壳溶液如上所述,是用作测试参考。

抗真菌活性

贝壳粉的抗真菌活性进行了测试在4真菌隔离;黄曲霉,来自烟曲霉属真菌,Microsporum gypseum,Microsporum audouinii使用琼脂稀释法作为描述该协会等。19]。

四套Sabouraud葡萄糖琼脂培养基准备测试和控制。短暂,20毫升刚做好Sabouraud葡萄糖琼脂(实验室- 009)培养基在培养皿40°C添加1毫升200毫克,150毫克,100毫克,50毫克,25毫克和12.5毫克的鹌鹑蛋贝壳粉解决方案和200毫克氟康唑的另一个1毫升无菌蒸馏水作为控制药物。这些很好地混合在板凳上旋转,允许固化。最终的浓度蛋贝壳粉10毫克/毫升,7.5毫克/毫升,5毫克/毫升,2.5毫克/毫升,分别为1.25 mg / ml, 0.625毫克/毫升,氟康唑10毫克/毫升。每个琼脂板然后用0.1毫升的孢子悬浮液接种含有103 /毫升的真菌进行测试。接种板块被置于37°C 6 h孵化器的孢子真菌培养基的表面上吸附。板块在25°C 14天之后孵化了真菌通过菌丝生长形成开始孵化后24小时。表明灵敏度没有板上的真菌的生长。消极的控制包括四个真菌;单独SDA板注射四种物种真菌没有鹌鹑蛋贝壳粉或氟康唑补充道。所有的测试都在复制三种。

确定的最低抑制浓度(MIC)真菌生物

鹌鹑的最低抑制浓度蛋贝壳粉的四个使用类似真菌进行了测试协议细菌生物使用浓度蛋贝壳粉;10毫克/毫升,7.5毫克/毫升,5.0毫克/毫升,2.5毫克/毫升和1.25毫克/毫升10毫升土豆葡萄糖肉汤和接种1毫升(103)的每个孢子悬浮液的真菌和孵化为14天。吸光度读数是相同的协议在细菌麦克风的决心。

结果

的鹌鹑蛋贝壳粉显示两个细菌生物抗菌和抗真菌的活动;铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌和四个真菌:黄曲霉,来自烟曲霉属真菌,Microsporum audouinii和Microsporum gypseum。

抗菌活性

的结果意味着区域之间的抑制革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性细菌(铜绿假单胞菌)分别显示每个浓度相比无显著差异。另一方面,控制药物环丙沙星的结果相比,平均区记录10毫克的蛋壳粉对这两种细菌物种显示不同的鹌鹑蛋壳粉用于测试生物铜绿假单胞菌(图1一个,1 b)。

抗真菌活性

抗真菌活性结果记录为抑制没有真菌生长在孵化后21天在所有三个复制。鹌鹑的浓度更高蛋贝壳粉有更多比低浓度的抑制作用真菌生物。控制药物(fluconazole-10毫克)抑制黄曲霉和Microsporum audouinii而来自烟曲霉属真菌和Microsporum gypseum没有抑制氟康唑。所有的真菌生长记录发生后10天开始孵化。

细菌分离株的最低抑制浓度(MIC)

鹌鹑的最低抑制浓度(MIC)蛋根据生物细菌隔离不同的贝壳粉:12.5毫克(1.25毫克/毫升)金黄色葡萄球菌和50毫克(5毫克/毫升)铜绿假单胞菌(图2一个,2 b)。

最低抑制浓度(MIC)真菌隔离

5.0毫克/毫升的麦克风记录黄曲霉和曲霉属真菌香薰(图3一,3 b),而Microsporum audouinii和Microsporum gypseum有麦克风分别2.5毫克/毫升和1.25毫克/毫升(图4一,4 b)。

吸光度的变化(nm) = A0;(A2 - A1)

A1 =孵化前吸光度

A2 = 48小时孵化后吸光度

A0 = (A2-A1)的区别。

吸光度的变化(nm) = A0;(A2 - A1)

A1 =孵化前吸光度

A2 = 48小时孵化后吸光度

A0 = (A2-A1)的区别。

讨论

一大堆健康条件被认为是治疗的鹌鹑蛋。大部分的这些说法尚未被证明是通过科学的研究方法。例如,鸡蛋,尤其是来自日本鹌鹑的报告来帮助治疗肺结核、支气管哮喘和糖尿病。根据Ronjit et al ., (1)印第安人准备孵出鸡的火山灰剩菜蛋壳,他们使用治疗人认为是食物中毒。

基于我们的研究结果在体外研究中,我们报告的粉蛋从日本鹌鹑壳膜(Coturnix粳稻)具有抗菌和抗真菌特性。我们还要注意细菌生物测试;革兰氏阳性(金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性(铜绿假单胞菌),被抑制的粗粉的解决方案蛋壳。这个发现让人们相信早些时候报道的药用鹌鹑蛋壳(15]。蛋壳中含有大量的钙具有生物可利用性。除了其骨骼增强和建筑性能、钙中和酸。这种酸中和房地产的钙在改变中发挥作用的酸性真菌生长环境要求碱性抑制他们的生存。蛋壳因此,有人说,可能是鸡蛋里面一样重要,我们非常珍惜。我们的报告进一步支持索赔的使用蛋贝壳粉原油的形式对当地治疗皮炎。

在这项研究中,膜上蛋壳,以保护的内容蛋从细菌入侵,也防止快速蒸发的液体蛋是外壳一起搅碎20.,21]。这蛋膜包含ovotransferrin糖蛋白中发现的蛋蛋白;被添加到的亲脂性的原则蛋在鸡蛋的发展(22]。这种蛋白质是热的,通常被称为“热休克蛋白”和作为抗菌剂中扮演着重要角色在保护发展中胚胎免受细菌感染。

结论

鹌鹑的抑制活性蛋贝壳粉在四两个细菌和真菌检测观察到在这个研究因此,可以由部分的抗菌性ovotransferrin:这有一个铁扎属性艾滋病的膜蛋壳牌剥夺自由铁细菌的新陈代谢和复制;从而抑制其增长和钙含量高的shell提供了一个名副其实的碱性环境,是有害的真菌增长。如前所述,高碱性的内容蛋壳由于酸钙否定环境促进真菌中和酸的增长环境。我们打算进一步评估提取的蛋外壳使用不同的溶剂来帮助阐明的原则和活跃肽涉及的其他用途。遵循我们的调查结果从这项研究中,我们建议使用蛋壳粉,单独或作为配方的一部分作为抗菌准备局部应用对投机取巧的有机体皮肤感染。

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