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使用DNA和蛋白质检测方法在农业生物技术

*通信:

依琳娜琼斯
圣保罗大学的基因工程,圣保罗,
巴西,
电子邮件:chemtech@alliedresearch.org

描述

基于DNA和蛋白质的检测方法是常用的仪器监测biotechnology-derived作物和他们的产品在世界各地。为产品开发、种子生产、合规和合同的要求,农业生物技术公司,食品/饲料供应商和供应链,诊断测试组织和监管当局广泛依靠这两种技术。DNA和蛋白质检测方法主要是用于验证转基因的存在与否(GE)材料,以及量化通用电气材料包含在产品的数量。

一些国家已经通过立法禁止出售转基因(GE)食品在全国市场。转基因产品也被称为生物工程(是)或biotechnology-derived产品。的可用性测试方法能够识别通用电气组件的存在和/或集中在食物或散装货物的农业种子和谷物等大宗商品是至关重要的确保遵守通用食品标签法规。结果,农业生物技术业务使用DNA和蛋白质测试方法定期检测biotechnology-derived特性。这些化验检测旧小说蛋白质或蛋白质。虽然dna技术,如广泛使用聚合酶链反应(PCR),被认为是“黄金标准”的测试,这项技术确实有局限性。

例如,聚合酶链反应分析可以有大量的仪器和耗材成本,它需要训练有素的人员和合适的实验室条件下。蛋白质(免疫测定)技术包含方法如酶联免疫吸附测定(ELISA)和横向流带(LFS)。分析提供了一个灵活的格式多样的应用程序,提供简单、具体,且经济有效的蛋白质检测方法。而基于dna的方法,如常用的聚合酶链反应(PCR),被认为测试的“黄金标准”,他们并不是没有缺点的。

PCR分析,例如,可以是昂贵的仪器和耗材,这需要训练有素的工人和理想的实验室条件。酶联免疫吸附试验(ELISA)和横向流带的蛋白质免疫测定技术(LFS)。免疫测定是一个通用的格式,提供简单、具体,具有成本效益的蛋白质检测方法为各种不同的应用程序。

他们满足广泛应用;但是他们有缺点大,样本处理效果可以变性蛋白质的兴趣。这两种类型的检测程序是众所周知的,并提供定性、半定量和定量的结果。定量检测平台广泛用于国内外测试实验室。聚合酶链反应是判断给定的DNA序列的技术存在或缺席biotechnology-derived植物产品。聚合酶链反应方法可以用主观的存在与否来确定biotechnology-derived特征样本,或定量确定biotechnology-derived DNA的含量。唯一的特定序列biotechnology-derived特征可能被使用聚合酶链反应技术。这种方法有时被称为“专题”PCR。多个独特的目标,如转基因本身,它的启动子,和/或边境地区序列,可以使用基于dna的方法。在DNA水平检测的另一个优点是DNA分子本身的韧性。

他们能承受恶劣的环境条件和保留功能,允许长期测试后被移除或腐烂的有机体。测试加工食品时,这一点尤其重要,因为即使所有蛋白质变性和退化,DNA分子可能仍然存在作为目标进行测试。定量测试,也称为实时、定量聚合酶链反应执行(qPCR或rtqPCR),使用绝对量化对标准曲线或相对计算通过比较转基因DNA相对频率端点。半定量或业者方法,它结合了定性的端点检测统计模型量化,是另一种方式获得绝对定量的结果。总的来说,通用电气测试可以分为两类基于矩阵被测试。种子、粮食、食品和饲料组都有自己的的市场需求和技术障碍。接下来的小节将解决这个差异解决用人的优缺点聚合酶链反应通用电气测试。

PCR和一般结构分子的调查都有很高的选择性。使用的寡核苷酸引物的序列和长度确定的特异性聚合酶链反应反应;引物的序列退火越独特,更有选择性和具体的分析。聚合酶链反应允许测试在不同的特异性和增加度通过构造引物与不同的保守派。目标基因筛查方法,组件是常见的许多转基因事件,是在一个较低的水平。这个地址是否广泛(多少)通用电气DNA存在于样本没有能够确定哪个事件(s)引起了积极的结果。35 s启动子和NOS终结者是最普遍的目标检测方法。Trait-specific化验,目标转基因基因的DNA序列,下一层特异性量表。没有分析师能够确定精确的事件(s)的贡献,所有事件携带相同基因会导致积极的结果,为收集的数量。Construct-specific化验,共享的目标向量的DNA链由多个事件,达到类似水平的特异性。

探测连接,将上面的不同组合,可以获得各种中间水平的特异性。监管的交集元素和构建骨干,或转基因基因的交叉和监管元素或构造序列,是例子。顶部的专题分析是特异性的范围;这些测试目标嵌合基因的DNA序列插入站点,通常放大部分由转基因序列DNA片段和部分从侧翼,本地人,基因组序列,一个独一无二的和非常具体的组合。