研究

，卷:12(3)

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2型糖尿病患者与正常健康对照组血脂及载脂蛋白A-1的研究

*通信:

Prasad Naidu先生，纳拉亚纳医学院和医院生物化学系，安得拉邦内洛尔，印度，52400，电话:+ 918801527888;电子邮件: (电子邮件保护)

摘要

糖尿病在不同的患者身上表现不同。糖尿病的症状、症状、严重程度和类型各不相同。但有一件事总是高血糖。本研究的目的是估计空腹血糖，餐后血糖，总胆固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白胆固醇，低脂蛋白胆固醇密度，非常低密度脂蛋白-胆固醇，载脂蛋白A-1(apo A-1)水平2型糖尿病糖尿病患者与正常健康对照组。50例T2DM患者和50例年龄匹配的健康对照组。计算各项生化指标的平均值和标准差。用学生均数t检验来确定组间的显著性。p值< 0.05被认为是显著的。本研究报告指出，测量载脂蛋白a1水平有助于动脉粥样硬化的早期发现炎症以增加载脂蛋白A-1水平为目标的治疗可能会防止由于冠状动脉动脉粥样硬化。

关键字

Apolipoprotein-A;糖尿病;血脂;冠状动脉粥样硬化

简介

流行病学研究表明糖尿病可加速动脉粥样硬化过程，增加心血管事件和中风的发生率。糖尿病在不同的患者身上表现不同。糖尿病的症状、症状、严重程度和类型各不相同。但有一件事总是高血糖[1-4］．载脂蛋白A-1 (apo A-1)是高密度脂蛋白的主要蛋白质成分[5，6］．

在空腹和餐后状态下，胰岛素对脂肪细胞的作用减弱导致脂肪分解抑制减弱，即存储的三酰甘油水解抑制减弱，从而非酯化脂肪酸(NEFA)的释放增加。由此导致的NEFA向肝脏输送的增加增加了肝脏三酰甘油的产生，进而驱动肝脏VLDL的产生。在空腹和餐后状态下，胰岛素对肝细胞的作用减弱导致VLDL生成抑制减弱[7］．

因此，在富含三酰甘油的脂蛋白增加的情况下，胆固醇酯转移蛋白(CETP)活性增加，从而使所有循环脂蛋白在三酰甘油中富集，特别是HDL和LDL颗粒。由于高甘油三酯血症和CETP活性增加而富含三酰甘油的LDL颗粒也被肝脂肪酶的甘油三酯脂肪酶活性转化为更小、更致密的颗粒[8］．而大的浮性LDL被LDL受体途径清除得很快，小的高密度LDL被清除得更慢。小而密集的LDL颗粒更容易被氧化、糖基化修饰，更容易引起动脉粥样硬化。糖基化和/或氧化LDL已证明对血管细胞活力、脂质积累、生长因子表达和细胞内氧化有不良影响压力［9］．富含三酰甘油的高密度脂蛋白颗粒被肝脂肪酶的甘油三酯脂肪酶活性转化为更小的颗粒，这些颗粒是分解代谢途径的更好底物[10］．

在胰岛素抵抗性高甘油三酯状态下，HDL颗粒趋于小而致密，因此更容易进行分解代谢，因此HDL颗粒数量和HDL-c浓度降低[11］．

最近的一项研究表明，高密度脂蛋白apoA-I分解代谢的增加是NIDDM伴有明显的糖尿病血脂异常(高甘油三酯血症和高甘油三酯血症)的高密度脂蛋白浓度降低的完全原因低高密度脂蛋白胆固醇)。载脂蛋白A-1是高密度脂蛋白的主要结构蛋白，约占高密度脂蛋白总蛋白的70%。其分子质量为28 kDa。载脂蛋白a -1也直接从肝脏产生，在较小程度上从肠道产生，并与磷脂结合形成新生的高密度脂蛋白[12］．“apoA-I的心脏保护作用的潜在机制包括。”促进逆向胆固醇运输，图1．降低氧化应激，提高过氧酶活性，增强抗凝血活性，通过一氧化氮(NO)调节血管张力[13，14］．

其他动脉粥样硬化保护作用:载脂蛋白A-I的抗炎作用是通过抑制中性粒细胞的激活、粘附、扩散和迁移[15-17］．最近有报道称载脂蛋白A-I可以上调内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性，可能是通过内皮细胞内amp活化蛋白激酶(AMPK)的特异性磷酸化。

本研究主要测定了糖尿病患者的空腹血糖、餐后血糖、总胆固醇、甘油三酯、hdl -胆固醇、ldl -胆固醇、vldl -胆固醇、载脂蛋白A1(apo A-1)水平2型糖尿病糖尿病患者与正常健康对照组。

方法

本研究在普通医院门诊患者中进行了为期1年的研究医学安得拉邦内洛尔市钦塔雷迪帕莱姆纳拉亚纳医学院和医院的科室。这项研究对50名2型糖尿病患者和50名健康对照组进行了研究。年龄均在35 ~ 70岁之间。男女皆可。纳拉亚纳医学院伦理委员会批准了这项研究，并从患者那里收集了书面知情同意书。受试者应患有糖尿病至少1年，肝功能正常，无神经病变、视网膜病变等并发症肾病包括受试者。

患者服用促甲状腺药物、皮质类固醇、降脂药物、口服避孕药、阿司匹林、磺胺类药物、吸烟者、慢性酗酒者等孕妇被排除在外。本研究估计的参数为;空腹血糖，餐后血糖，总胆固醇，甘油三酯，hdl -胆固醇，ldl -胆固醇，vldl -胆固醇，载脂蛋白A1(载脂蛋白A-1)水平。

样本采集

这项研究的受试者被建议在夜间禁食(12小时)。在禁食状态下采血。从每个人身上取5 ml静脉血样本，转移到平管中，离心提取血清并保存于-200°C以测量分析物。

血糖测定采用葡萄糖氧化酶和过氧化物酶法，使用市售试剂盒Human (gmbh德国)，使用Humastar 300化学分析仪(Human gmbh德国)。总胆固醇、甘油三酯和hdl -胆固醇使用Human (gmbh德国)的试剂盒，使用Humastar 300化学分析仪(Human gmbh德国)进行测量。

胆固醇氧化酶-过氧化物酶法:胆固醇脂质清除因子(LCF)酶比色法。经酶解和氧化测定胆固醇。指示物喹奈胺是由H₂O₂而4-氨基苯氮酮在苯酚和过氧化物酶的存在下。参考值:150 mg/dl -200 mg/dl。

理想:高达200毫克/分升，边界高:200-239毫克/分升和高:>240毫克/分升。用均质酶法测定高密度脂蛋白胆固醇，使用沉淀试剂沉淀其他脂蛋白后可以测定HDL- c部分，并在上清液中测量HDL- c。

用GPO-PAP酶比色法测定甘油三酰脂脂清除因子(LCF)。三酰甘油经脂肪酶酶解后测定。指示剂是由H₂O₂．4-氨基比林和4-氯苯酚在过氧化物的催化作用下。正常值:80 mg/dl -160 mg/dl，边缘性高:150 mg/dl -199 mg/dl，高:200 mg/dl-499 mg/dl，非常高:>500 mg/dl。使用Friedwalde方程计算ldl -胆固醇。LDL=总胆固醇- hdl胆固醇-甘油三酯/5和正常水平:80 mg/dl-150 mg/dl。VLDL胆固醇的测定;用甘油三酰浓度除以5计算VLDL-C。

载脂蛋白A-1的估计:血清载脂蛋白A-1采用浊度免疫法测定，使用市售试剂盒(Erba Mannheim)和Humastar 300化学分析仪(Human gmbh德国)。终点法测定抗原抗体反应。试剂为0.9 g %氯化钠、抗血清、磷酸盐缓冲盐水(pH值7.43)。山羊抗人载脂蛋白A-1(可变)，叠氮化钠(0.09%)和缓冲磷酸盐缓冲盐水(pH值7.43)。聚乙二醇(60克/升)，洗涤剂(0.1%)，叠氮化钠(0.09%)，校定器:去纤池人血浆，液体和稳定。含0.09%叠氮化钠，试剂的制备和稳定性，试剂制备液体试剂，随时可用的稳定性和储存。当保存在2-8°C时，试剂在有效期前是稳定的。如果避免污染，仪器的稳定性至少为4周。不要冻结。采用新鲜血清采集样品。如果当天不能进行检测，血清可在2°C -8°C保存48小时。如果保存时间较长，样品应冷冻。计算OD值，绘制标准曲线，并读取对照和样品的浓度。

手工过程:参比曲线:将校准仪按1:10、1:20、1:40、1:80依次稀释，得到参比曲线。1:160生理盐水9 g/l或稀释的校准器系列1:10生理盐水9 g/l。以9 g/l生理盐水为零点。测试:将10 pi样品，校准器和对照品与900 pi缓冲液混合。读取样品、校准器和对照在340 nm处的光密度(OD1)。加入80 pi抗血清。混合并在室温下孵育5分钟。读取样品、校准器和对照在340 nm处的光密度(OD2)。计算▲OD;绘制标准曲线以及对照和样本的浓度。 Reference Values in Men: 107 mg/dl-177 mg/dl (IFCC), Women: 107 mg/dl -205 mg/dl, This range is given for orientation only. Each laboratory should establish its own reference values.

结果

对50例T2DM患者和50例年龄匹配的健康对照组进行空腹血糖、餐后血糖、血脂和载脂蛋白A-1水平测定。计算各项生化指标的平均值和标准差。两组间的显著性用学生均数t检验确定。显著性p值<0.05表1．

表1:T2DM和对照组的生化参数MEAN+SD和P、t值。

讨论

糖尿病是一种代谢障碍，通常涉及碳水化合物和脂质代谢，其原因是胰岛素分泌不足，胰岛素作用不足或两者兼有。与长期糖尿病相关的代谢紊乱引起多器官系统的继发性病理生理变化，导致各种危及生命的并发症，如动脉粥样硬化、视网膜病变、神经病变、肾病。的患病率全球2型糖尿病的发病率正以惊人的速度增长。冠状动脉粥样硬化是糖尿病人群死亡的主要原因。糖尿病可加速动脉粥样硬化过程。

本研究旨在“估计Apo A-1型2型糖尿病受试者的脂质谱”。本研究包括100名受试者。其中50人是2型糖尿病健康对照组50例图2．在两种情况下和对照组的脂质剖面、载脂蛋白A-1和高敏c反应蛋白水平测定。

在目前的研究中图3-5病例组TC均值为174.78±46.52，对照组TC均值为183.72±40.50。结果不显著(p=0.3079)。两组TG均值和标准差分别为164.22±95.50和115.88±36.97。这种增加有统计学意义(P=0.0012)。

两组VLDL均值和标准差分别为32.86±19.05和23.18±7.39。这种增加有统计学意义(P=0.0011)。两组LDL均值和标准差分别为99.62±29.20和108.5±35.22。这种下降没有统计学意义(P=0.173)。两组HDL均值和标准差分别为42.38±12.99和51.86±10.35。这种下降有统计学意义(P=0.0001)。这一结果可以归因于低胰岛素对肝脏载脂蛋白合成的影响图6与肝脂肪酶相反，LPL的调节降低，胆固醇酯转移蛋白(CETP)活性升高，胰岛素在脂肪组织(脂肪分解升高)和肌肉(FFA摄取低)上的外周作用降低。本研究与Michael B. Adinorteyet al， [18]和Ayaz K Mallick1 Ravindra Maradi等[19］．

载脂蛋白脂蛋白A-1是高密度脂蛋白的主要结构之一，占高密度脂蛋白总蛋白的~ 70%。在我们的研究结果中，载脂蛋白A-12型糖尿病糖尿病患者(151.13±37.18)例，正常健康人(201.42±29.35)例。这种下降有统计学意义(P=0.0003)。这里载脂蛋白A-1的减少归因于载脂蛋白A-1的分数清除率的增加。高甘油三酯和低密度脂蛋白特别小，而且密度大，易被氧化。慢性高血糖与糖基化合作低密度脂蛋白、胆固醇和这两种机制都被认为可以提高LDL-C的动脉粥样硬化性。RCT是一种从肝外细胞(最重要的是血管细胞)中去除过量胆固醇的途径，从而防止动脉粥样硬化的发展。胆固醇外排是胆固醇反向转运的第一步，也是最有可能的限速步骤。胆固醇外排到载脂蛋白a -1可能是巨噬细胞胆固醇外排的重要补充。载脂蛋白A-I具有抗氧化活性，具有预防和/或延缓作用低通过去除氧化磷脂(包括1-棕榈酰-2)来氧化高密度脂蛋白。(5-oxovaleroyl)- sn-甘油-3-磷酸化胆碱和1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷酸化胆碱，也来自LDL和细胞动脉壁。载脂蛋白A-1具有抗炎活性。这有效地抑制了炎症仲裁人血管细胞粘附分子-1、细胞间粘附分子-1、白细胞介素-1等的表达，因此降低载脂蛋白a -1水平可能在动脉粥样硬化中起作用。该研究与Jens Pietzsch等人的研究结果一致。, (20.]拉吉尼·达瓦尔，萨克什·辛格尔[21］．

结论

冠心病是其中发病和死亡的主要因素糖尿病人口。糖尿病可加速动脉粥样硬化过程。本研究旨在“估计2型糖尿病受试者的血脂和载脂蛋白A-1”。在这两种情况和控制血脂概况{总胆固醇，三酰基甘油，非常低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL- C)}和载脂蛋白- a1 (apo A-1)。在这项研究中，我发现与对照组相比，T2型糖尿病患者载脂蛋白A-1水平显著降低图7．载脂蛋白A-1具有抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗炎的特性，并能预防动脉粥样硬化。从这项研究中，我得出结论，测量载脂蛋白a1水平对于动脉粥样硬化的早期检测是有用的，甚至在动脉粥样硬化发生之前炎症以增加载脂蛋白A-1水平为目标的治疗可能会防止由于冠状动脉动脉粥样硬化。

确认

与部门合作生物化学安得拉邦内洛尔市钦塔尔迪帕莱姆市纳拉亚纳医学院和医院中央实验室。

利益冲突

没有宣布

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