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数量:22 (8)DOI: DOI: 10.37532 / 0974 - 7419.2022.22 .212 (8)

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快速筛选方法对小麦与改性醇溶蛋白组成线:MALDI-TOF-MS产物和比较

*通信:

埃里克稻草印度日报》总编辑,分析化学:汉普郡,英国。电子邮件:janalchem@theresearchpub.com

文摘

一组复杂的小麦面粉蛋白质麦可能会导致乳糜泻和严重的食物敏感。结果,新的小麦线路较低的免疫原性可能被使用突变繁殖和生物技术技术。建立快速、高通量的技术可以应用作为第一步在选择行改变了醇溶蛋白含量对这些努力至关重要。在这项研究中,我们改进了反相高效液相色谱法(rp)和Matrix-Assisted激光解吸/电离飞行时间质量光谱法隔离(MALDI-TOF-MS)方法麦从小麦属植物aestivum简历。中国的春天(CS)。使用整个组醇溶蛋白从这个品种以及基因序列最近获得的非整倍体线的集合,我们评估了质量在CS生成的配置文件。通过使用MALDI-TOF-MS,麦被分成13峰。有多个峰值或者-麦,这是合理的努力减少的目标免疫原性面粉和包括很多乳糜泻抗原表位。然而,其他的山峰,其中包括多达12个不同的麦胶蛋白,含有几个麦。相比之下,28日麦胶蛋白峰分离得到的蛋白质产物使用,包括13个山峰含有麦胶蛋白和8个山峰,包括麦。即使能够独立的反麦比MALDI-TOF-MS好,是不可能连接特定的山峰到特定的蛋白质序列。MALDI-TOF-MS和rp -成功分离麦。尽管MALDI-TOF-MS更快,可能是有利的专注于特定的调查麦,一个高效的技术,可以更广泛地用于识别的变化醇溶蛋白合成产物。

关键字

蛋白质;光谱法;生物技术。

介绍

小麦L。,也被称为小麦,是一个关键的主食谷物粮食,世界各地的人们消费和饮食中蛋白质的重要来源。约占总数的70%谷物蛋白质组成面筋蛋白质。面筋蛋白质,蛋白质是由70 - 100不同的蛋白质,产生重大影响面粉把面团和如何确定他们是否适合创造面包。此外,一些面筋蛋白质导致严重疾病的人,如食物过敏和乳糜泻(CD)。传统上,面筋蛋白分为麦谷和麦胶蛋白。高分子量麦谷蛋白亚基组成高分子麦谷。二硫化连杆连接高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)。大约40%的面筋蛋白质单体的蛋白质被称为麦胶蛋白,特别是免疫原性。根据其电泳淌度的酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,麦胶蛋白通常划分为一个复杂的类即麦胶蛋白。根据大小和重复图案,麦进一步分成5麦胶蛋白和1,2麦。而5麦胶蛋白包含一些引起食物过敏的抗原表位,小麦依赖运动诱发过敏反应(WDEIA), 1、2麦胶蛋白的抗原表位,活跃在腹腔疾病。

六倍体小麦的基因编码and-gliadins位于Gli-1位点在群体的短臂1同源染色体和连接到LMW-GS,而基因编码麦是位于Gli-2位点组6条染色体的短臂。一套完整的醇溶蛋白和LMW-GS基因,包括47-gliadin 14-gliadin, 5-gliadin, 19 -醇溶蛋白,和17 LMW-GS基因,是组装和注释。最近基因组测序的努力在中国参考小麦春季(CS)揭示了基因组的复杂性。其中,全身蛋白质编码的基因编码26 -麦胶蛋白,11-gliadins, 2 LMW-GS 7 LMW-GS, 10 LMW-GS。进一步的转录组研究表明大的变化基因表达家庭内的水平。此外,有关具体的蛋白质斑点从CS中总蛋白提取面粉26-gliadin 16, 10, 11, two-gliadin之一,六seven-gliadin基因利用二维凝胶电泳(2-DFE)加上串联质量光谱法(女士)。在转录组研究中,大部分的基因没有联系蛋白质斑点编码的蛋白质,要么是高度与其他蛋白质或少量表达。

许多研究机构正在把麦胶蛋白,包括免疫原性序列从使用传统育种方法或小麦面粉生物技术的方法来减少免疫原性小麦面粉的潜力。突变育种方法如乙显示(EMS)或射线辐照,通过RNA干扰基因沉默,基因组编辑方法像CRISPR / Cas9都可以用来灭活或删除特定基因,组同源基因,或者整个基因的染色体区域。高通量筛选技术的可用性,可以使用作为第一步在选择行改变了醇溶蛋白水平对这些努力是至关重要的。

在这项研究中,我们改进了反相高效液相色谱法(rp)和Matrix-Assisted激光解吸/电离飞行时间质量光谱法(MALDI-TOF-MS)方法分析麦胶蛋白。我们可以评估是否有足够的分辨率的方法暴露的复杂性组蛋白通过使用引用小麦CS在这个调查,也允许我们考虑最近发表的醇溶蛋白序列。此外,非整倍体的分析线从染色体的CS允许确认麦胶蛋白检测各色谱峰的位置以及评估的能力区分线缺乏染色体区域有醇溶蛋白基因。在本文中,我们比较和对比的优缺点MALDITOF-MS和rp -使用的初步筛查。