研究

，卷:19(1)DOI: 10.37532/0972-768X.2021.12(1).405

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参、槟榔、种子乙醇提取物对大鼠胰岛素抗糖尿病和保肝作用的协同作用

Asmaa Nabil Mohie^1＊，穆罕默德·阿卜杜勒·拉齐克·多海姆²拉格布·阿卜杜勒·法塔赫·埃尔·马斯里^3.以及艾曼·穆罕默德·埃尔赛义德⁴

¹埃及扎加齐格大学农学院生物化学系

²埃及扎加齐格大学农学院生物化学系

^3.埃及扎加齐格大学农学院生物化学系

⁴埃及扎加齐格大学农学院生物化学系

*通信:

Mohie,埃及扎加齐格大学农学院生物化学系，电子邮件: (电子邮件保护)

摘要

糖尿病(DM)是一种无法治愈的代谢疾病，全球发病率约为2.8%。化学品的不良影响药物需要寻找药用植物作为替代疗法。棕棕是古埃及的一种棕棕，富含原花青素(PACs)，是人类日常饮食的重要成分。它在古埃及被高度重视，尽管其原因需要进一步研究。

将30只雄性大鼠分成5组。I型糖尿病(DM I型)采用单次腹腔注射四氧嘧啶(120 mg/kg)诱导。然后给动物注射胰岛素(30 U/kg，每日)+/- MA种子乙醇提取物(100 mg/kg，口服，每日1次)。观察各组随机血糖(RBS)水平、肝转氨酶活性(ALT、AST)、白蛋白、总胆红素及肝组织病理学检查。

MA仅口服灌胃时，单独或联合胰岛素均可显著降低RBS水平。对血清ALT和AST活性也有类似的影响，但对胆红素、白蛋白水平没有显著影响。它还保存了肝索，门三联结构，窦状窦，冯-库普弗细胞基质比单独胰岛素更好。

MA种子乙醇提取物单独或联合胰岛素使用时，可能改善糖尿病患者的胰岛素治疗效果，并恢复肝组织变化。

关键字

Medemia拓宽额尔古纳;I型糖尿病;老鼠肝脏功能;

简介

糖尿病(DM)属于代谢性疾病，其主要症状是血液中血糖水平持续升高。它可以分为两种主要类型，I和II。糖尿病并发症可能包括失明、下肢截肢、肾功能衰竭和心脏骤停(中风)。在发达国家，约87%至91%的糖尿病患者为II型糖尿病，7%至12%为I型糖尿病，1%至3%为其他类型的糖尿病[1］．由于常规药物的副作用，许多医生在治疗各种疾病，包括糖尿病时，使用天然药物作为常规治疗的替代方法[2］．许多草药已被证明具有预防疟疾的潜力肝毒性在许多学科中[3.，4］．

棕棕是一种富含原花青素(PACs)的古老棕榈树。这些多酚类化合物广泛分布于植物中，是人类饮食中不可或缺的一部分。关于MA的研究很少，它是一种扇形棕榈，生长在埃及南部和苏丹北部的努比亚沙漠绿洲。这种水果已经在第五王朝(公元前2500年)和罗马时代(公元6 - 7世纪)的坟墓中被发现，特别是在图坦卡蒙·安赫·阿蒙的坟墓中[6］．来自MA坚果的PAC是一种有效的抗氧化/硝化的保护者压力与许多疾病有关[5］．

具有有效抗氧化活性的PACs的存在可能强调了argun坚果在古代的有用性，并可能探索这种水果作为含有阿夫采勒素、儿茶素和没食子儿茶素的可水解PACs的新丰富来源的潜在用途[5］．

在本研究中，我们测试了MA种子乙醇提取物对四氧嘧啶诱导的实验性I型糖尿病可能的增效潜力，以及提取物对某些肝功能的治疗价值，无论是单独使用还是作为胰岛素的辅助使用，都通过肝组织组织学检查得到了证实。

材料与方法

化学物质

四氧嘧啶购自Sigma化学公司(圣路易斯，密苏里州，美国)。Mixtard胰岛素(可溶性胰岛素30%，异硫芬胰岛素70%)，来自埃及当地市场，丹麦诺和诺德进口。所有其他使用的化学品都是分析级的。

将槟榔科(Palmae)古参(mediia argn)种子与果实分离，放在干燥干净的地方放置5天，用粉碎机碾碎成小颗粒。种子粉末状颗粒在含70%乙醇的锥形瓶中保存2天。将锥形瓶口盖上铝箔，放在摇瓶中摇24小时。以150转/分钟的速度持续搅拌，以充分混合，并完全阐明活性物质溶解在相应的溶剂中。然后用滤纸对提取液进行过滤。采用旋转真空蒸发器，水浴温度为45ºC，去除提取物中的溶剂。最后将粗提物收集于培养皿中，在干燥干净的地方保存2天。然后将粗提物配制成无菌生理盐水，用于腹腔注射[7，8］．

动物与实验设计

实验程序遵循《动物护理和使用国际动物伦理标准》。30只体重100-120克的成年雄性Wistar白化大鼠被随机分配用于研究。这些动物被关在一个适度潮湿的房间里的聚乙烯笼子里，在受控的12小时明暗循环下，在恒定的环境和营养条件下，自由地获得标准食物和水。实验开始前饲养动物2周驯化后，按表1随机分为5组。注射四氧嘧啶1周后测定血糖，确诊糖尿病;只有血糖超过200 mg/dl的动物才被认为是糖尿病[9］．治疗持续一周后，动物被处死。实验在埃及扎加齐格大学医学院的动物房里进行。

表1。实验小组

血液样本采集

实验结束后，处死大鼠。动物斩首后直接取血样，4ºC静置45分钟后，以2500 rpm离心10 min。获得的血清保存在-80ºC进行生化检查。

肝组织取样

取肝组织解剖，用冷生理盐水冲洗，纸巾吸干，置于10% v/v的甲醛生理盐水中进行组织学检查。

血清生化检查

随机血糖水平[12]、谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性[13]、白蛋白[14]、总胆红素[15]的水平进行分光光度分析。

组织病理学检查

固定和组织处理:福尔马林保存的肝组织在自动组织处理器中处理。该过程包括最初的2步固定和脱水。固定包括将组织浸泡在10%缓冲福尔马林溶液中48小时，然后在蒸馏水中去除固定剂30分钟。然后通过分级酒精(70%、90%和100%)使组织脱水。首先将组织暴露在70%的酒精中120分钟，然后是90%的酒精90分钟，然后是两个无水酒精循环，每次1小时。脱水之后，在二甲苯的几次变化中清除样品。它包括将组织浸泡在50%酒精和50%二甲苯的混合物中一个小时，然后再浸泡纯二甲苯一个半小时。然后用熔化的石蜡浸渍样品，然后嵌入并封闭。石蜡切片(4 ~ 5 um)用苏木精和伊红染色[16］．染色切片检查炎症、变性、坏死和其他病理改变。

统计分析

数据采用美国SPSS软件进行统计分析，对照组和治疗组数据均以(Mean±SE)表示。采用双尾方差分析(Two-Tail ANOVA)和未配对t检验(unpaired t-test)比较对照组与治疗组之间是否有显著性差异。P值<0.05为显著性。

结果与讨论

研究表明，四氧嘧啶给药大鼠，诱导糖尿病(DM)， 10天内表现为随机血糖水平显著升高。ALT和AST活性也显著升高。单独用MA种子提取物治疗糖尿病动物，可使这些参数接近正常。DM诱导对白蛋白和总胆红素均无显著改变，MA作用也不显著。与糖尿病大鼠相比，胰岛素治疗糖尿病大鼠可显著恢复RBS、ALT、AST活性、白蛋白和总胆红素值。MA联合胰岛素对糖尿病大鼠的Co治疗显著降低了RBS，尽管在其他参数上没有增加胰岛素的值(表2)。

表2。各组间血清随机血糖、ALT和AST活性、总胆红素和白蛋白水平的变化(值表示为Mean±SEM, n=6)

注:P值代表各组间的差异，Pa代表与阴性对照组的差异，Pb代表与糖尿病对照组的差异。P值<0.05为显著性。结果采用双尾方差分析计算

肝组织检查(图1)显示，与对照组相比，DM诱导在门静脉区显示中度炎症浸润，在门静脉三合一(图2)中以嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润为主，显示正常肝实质，保留肝索，门静脉三合一结构，窦状窦，冯-库普弗细胞MA治疗糖尿病大鼠肝实质正常，但部分肝细胞呈水变性(图3)。胰岛素治疗糖尿病组肝、门静脉轻度至中度充血，淋巴管扩张，轻度胆管炎及退行性改变，少量浑浊肿胀及水变性改变(图4)。MA与胰岛素治疗糖尿病大鼠肝实质正常，肝索保留。门脉三联结构，正弦波，冯-库普弗细胞和基质。少数部分胆道轻度增生，Von-kupffer细胞在这些切片中出现肥厚(图5)。

图1:它显示了研究组的组织病理学结果(所有都用H&E染色):

单词“Diabetes”意为“通过虹吸管的人”，而“Mellitus”意为“甜的”，两者都源自希腊单词。据信，希腊人之所以这样使用这些术语，是因为糖尿病患者大量的尿液排泄吸引了一些昆虫[17，18］．它是由胰岛素缺乏或无效引起的，导致血液中的葡萄糖水平升高。它会损害许多身体系统，特别是血管、眼睛、肾脏、心脏和神经[19］．糖尿病分为两种常见类型，即胰岛素依赖型糖尿病(IDDM, I型)和非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM, II型)。I型糖尿病被认为是一种自身免疫性疾病，其特征是胰岛及其周围的局部炎症反应，随后是B细胞的破坏，而II型糖尿病的特征是外周胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损[20.］．在目前的工作中，四氧嘧啶诱导治疗大鼠DM，这是众所周知的报道模型[21］．谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著上调，对血清白蛋白和总胆红素均无显著影响。此动作之前也已登记[22］．肝组织门脉三联征呈中度炎症浸润，以嗜酸性粒细胞和中性粒细胞浸润为主。以前也有其他研究人员注意到这种组织变化，他们报道了肝窦增大、大泡性肝细胞脂肪变性以及结构损失、脂肪性肝炎和门脉周围纤维化[22］．

在这项研究中，MA治疗糖尿病大鼠显著降低了血糖水平。据我们所知，该提取物未被报道具有抗糖尿病活性，但是，据报道，该提取物的主要成分PACs可显著降低血糖水平，这与我们的结果一致[23］．MA治疗也显著降低了ALT和AST的肝酶活性。据报道，PACs具有相同的效果[24］．同一作者还在同一篇文章中发表了PACs对肝组织形态的显著保护作用。胰岛素治疗可显著降低糖尿病大鼠血糖、肝脏ALT、AST活性及白蛋白、总胆红素水平。同样，有报道称胰岛素可显著降低糖尿病大鼠肝脏ALT和AST活性[25］．肝、门脉轻度至中度充血，淋巴管扩张，轻度胆管炎，退行性改变，不能恢复四氧嘧啶诱导的肝组织改变[26］．在胰岛素中加入MA提取物后，胰岛素对血糖的影响显著改善，但治疗时间较短，对糖尿病组胰岛素对肝功能的影响无明显改变。其他地方报道PACs联合胰岛素对胰岛素敏感有更好的仿胰岛素活性细胞系［27]和糖尿病小鼠，通过改善胰岛素敏感性[28］．

结论

胰岛素和MA提取物的联合使用使正常的肝实质和保留的肝索、门静脉三联结构、窦状窦和冯-库普弗细胞糖尿病大鼠的间质。糖尿病对肝脏和其他重要组织有许多并发症。添加富含PACs的MA种子提取物，可通过恢复血糖和维持肝酶活性，增强糖尿病受试者的胰岛素样反应。添加MA还能保持更好的肝组织结构，并最大限度地减少DM引起的炎症反应。

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