原文
,数量:16 (14)同时测定甲硝唑和呋喃唑酮结合平板剂型:开发和验证稳定性指示高效液相色谱方法
- *通信:
- Murali D生物化学系,Acharya Nagarjuna大学尔,522510年安得拉邦,印度,电子邮件: (电子邮件保护)
收到:5月16日,2016;接受:2016年6月20日;发表:2016年6月25日,
引用:Murali D Rambabu c同时测定甲硝唑和呋喃唑酮的平板电脑结合剂型:开发和验证稳定性指示高效液相色谱方法。肛门化学印第安纳j . 2016; 16 (14): 101。
文摘
一个敏感、准确、准确与紫外线stability-indicating高效液相色谱检测方法已经开发了同时测定甲硝哒唑、呋喃唑酮。色谱分离是实现Purospher®明星RP-18列(250毫米×4.6毫米;5μm粒度)的流动相由乙腈和水(挺,v / v)和0.8毫升/分钟的流量。检测波长被设定为332海里。甲硝唑和呋喃唑酮受到不同的强制降解条件。在所有的情况下,降解产物是解决从甲硝哒唑、呋喃唑酮的山峰。该方法线性浓度范围为30μg /毫升到90μg /毫升(R2 = 0.9999)和10μg /毫升30μg /毫升(R2 = 0.9996)甲硝哒唑、呋喃唑酮,分别。定量的极限是0.793μg /毫升和0.230μg /毫升甲硝唑和呋喃唑酮,分别。方法的精度是令人满意的;相对标准偏差值不超过1%。 The accuracy of the method was proved; the mean recovery of metronidazole and furazolidone was in the range of 99.66% to 100.28%. The developed and validated method was applied successfully for the assay of metronidazole and furazolidone in combined tablet dosage with good precision and accuracy.
关键字
灭滴灵;呋喃唑酮;稳定性指示;高效液相色谱法;平板电脑;量化
介绍
甲硝哒唑是一种合成的导数nitroimidazole抗菌和antiprotozoalactivities [1,2]。在化学性质上它被称为2 - (2-methyl-5-nitroimidazol-1-yl)乙醇。甲硝哒唑用于治疗阴道滴虫病、阿米巴病,贾第虫病,厌氧细菌感染,克罗恩病,antibiotic-associated腹泻和酒渣鼻(3]。
呋喃唑酮是硝基呋喃的衍生物抗菌和antiprotozoal活动(4- - - - - -6]。在化学性质上它被描述为3 - [(E) - (5-nitrofuran-2-yl) methylideneamino] 1, 3-oxazolidin-2-one。呋喃唑酮治疗霍乱,规定由敏感细菌引起的腹泻和肠炎或原生动物7]。在儿童,通常用于治疗的贾第虫病8]。
灭滴灵和呋喃唑酮可在市场上作为片剂剂型或口服悬架(9]。这种组合是有效的治疗阿米巴病,trichomoniasi,贾第虫病、细菌性阴道炎,霍乱、细菌性或混合菌痢的起源。很少有技术在文献中发现的同时测定甲硝唑和呋喃唑酮散装和制药剂型。羽衣甘蓝等。10),Chemate et al。11)和巴苏•(12)已经确定甲硝唑和呋喃唑酮同时使用紫外分光光度法。尽管光谱光度测量的方法很简单,他们遭受缺乏选择性。
埃琳娜和Milea13)已经开发出一种权力平等主义的高效液相色谱过程的定量测定甲硝唑和呋喃唑酮。色谱分离是通过使用Kromasil C18(250毫米×4.6毫米;5μm粒度)与流动相分析柱由甲醇和0.1%磷酸(20:80 v / v),运行1毫升/分钟的流量检测在317海里。stability-indicating高效液相色谱方法分析甲硝哒唑、呋喃唑酮及其降解产物是由Kumar et al。14]。甲硝唑和呋喃唑酮的降解产物的分离是通过使用组成的流动相乙腈、甲醇和磷酸盐缓冲剂(10:40:50 v / v / v)通过一个XTerra C18柱(150毫米×4.6毫米;5μm粒度)1毫升/分钟的流量UV-detection 270海里。
本研究描述了稳定的发展和验证表明高效液相色谱法定量测定甲硝唑和呋喃唑酮的同时在其降解产物的存在。该方法的适用性评价平板配方中甲硝唑和呋喃唑酮的决心。报告的总结,提出了高效液相色谱方法表1。从数据,发现该方法的优点是更敏感,精密,准确比报道的高效液相色谱方法(13,14]。使用更少的流量和二元溶剂体系使该方法经济(13,14]。此外,该方法报道Kumar et al。14)并不适用于联合制定和埃琳娜和Milea13)表示方法不稳定。
| 药物 | 流量(毫升/分钟) | LOD(μg /毫升) | 定量限(μg /毫升) | 恢复(%) | 相对标准偏差(%) | 参考 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 灭滴灵 | 1.0 | 0.8 | 2.7 | 102.75 | 1.658 | 13 |
| 呋喃唑酮 | 0.7 | 2.3 | 88.41 | 0.894 | ||
| 灭滴灵 | 1.0 | 4.637 | 14.053 | 99.98 | 0.1 | 14 |
| 呋喃唑酮 | 1.7798 | 5.3935 | 98.34 | 1.3 | ||
| 灭滴灵 | 0.8 | 0.262 | 0.793 | 99.96 | 0.193 | 提出了 |
| 呋喃唑酮 | 0.076 | 0.230 | 100.02 | 0.058 |
表1:报告和提出方法之间的比较。
材料和方法
仪表
高效液相色谱仪器由日本岛津公司高效液相色谱类LC系列配备两个LC-10,副泵和可变波长可编程紫外检测器。峰地区综合使用日本岛津公司LC软件程序的解决方案。色谱分离和量化进行Purospher®明星RP-18(250毫米×4.6毫米;粒度5μm)分析柱保持室温。流动相、药品标准的解决方案,平板电脑样品的解决方案和强迫退化之前通过微孔滤膜过滤样品注入高效液相色谱系统。
药物、化学品和溶剂
甲硝唑和呋喃唑酮的参考标准是获得Remedix药品样品(印度班加罗尔)作为礼物。Dependal M平板电脑(葛兰素史克Smithkline制药有限公司印度)声称含有100毫克的呋喃唑酮和300毫克的甲硝哒唑被用于这项研究。盐酸、氢氧化钠和过氧化氢的分析试剂级来自Sdfine-Chem有限(印度孟买)。乙腈的高效液相色谱级是来自印度默克有限(印度孟买)。在分析Milli-Q-water使用。
色谱条件
流动相:乙腈:水(挺v / v)
流量:0.8毫升/分钟
检测波长:332海里
柱温:室温
注入量:20μL
运行时间:12分钟
标准药物解决方案
流动相是用作溶剂制备的标准解决方案。标准股票甲硝哒唑溶液(600μg /毫升)和呋喃唑酮(200μg /毫升)是由溶解精确称重的甲硝哒唑(30毫克)和呋喃唑酮(10毫克)25毫升50毫升容量瓶的流动相。瓶是由马克与流动相。的股票解决方案与流动相稀释恰当地准备灭滴灵的工作标准的解决方案(30、45、60、75和90年μg /毫升)和呋喃唑酮(10、15、20、25和30μg /毫升)。
平板电脑样品溶液
十片重和细粉。股票解决方案(灭滴灵600μg /毫升和呋喃唑酮200μg /毫升)是由溶解平板粉相当于30毫克甲硝唑和10毫克呋喃唑酮在25毫升的流动相在50毫升容量瓶和用近5分钟。解决办法是使用了微孔过滤膜过滤和最终的解决方案是马克用流动相稀释。的股票解决方案与流动相稀释适当获得浓度等于60μg /毫升的甲硝唑和20μg /毫升的呋喃唑酮进行分析。
校准曲线
校准曲线的方法是准备在30μg /毫升的浓度范围为甲硝唑和90μg /毫升10μg /毫升为呋喃唑酮30μg /毫升。每个解决方案准备一式三份和20μl注入到每个解决方案的列。山峰被确定在332海里。甲硝唑和呋喃唑酮的校准曲线是由绘制峰面积和浓度。
测定甲硝唑和呋喃唑酮的平板电脑
二十μl平板样品溶液(灭滴灵60μg /毫升,呋喃唑酮20μg /毫升)三次被注入到高效液相色谱系统。的峰值区域药物确定在332海里。的浓度药物在平板电脑决心从相应的校准曲线或从相应的回归方程。
应力降解研究
应力退化进行了研究使用不同我规定压力条件如酸性、碱性、氧化、热和光解的压力15]。
酸降解
平板电脑粉相当于60毫克的甲硝唑和20毫克的呋喃唑酮是在100毫升容量瓶。5毫升0.1 N HCl是添加到瓶和保持在80°C的回流条件2 h。完成后的压力,解决方案是用0.1 N氢氧化钠中和和完成马克与流动相。
基地退化
平板电脑粉相当于60毫克的甲硝唑和20毫克的呋喃唑酮是在100毫升容量瓶。5毫升0.1 N氢氧化钠添加在烧瓶和保持在80°C 2 h回流条件。完成后的压力,解决盐酸中和用0.1 N和完成马克与流动相。
氧化降解
平板电脑粉(相当于60毫克的甲硝哒唑;呋喃唑酮的20毫克)和5毫升的20% H2O2在100毫升容量瓶补充道。瓶是保持在80°C 2 h回流条件。完成后的压力,完成了瓶马克与流动相。
热降解
为此,平板粉(相当于60毫克的甲硝哒唑;20毫克的呋喃唑酮)摄于玻璃培养皿和放置在干热灭菌器在105°C 2 h。指定的时间后,平板电脑粉被转移到一个100毫升容量瓶和流动相组成的。
光解的退化
光解的降解研究,平板粉相当于60毫克的甲硝唑和20毫克的呋喃唑酮被转移到一个玻璃培养皿放置在阳光直射2 h。完成后的压力,平板电脑粉被转移到一个100毫升容量瓶和流动相组成的。
结果与讨论
高效液相色谱条件的优化
色谱条件进行了优化分离所有可能的降解产物峰的甲硝哒唑、呋喃唑酮。高效液相色谱方法优化过程中,一些试验使用不同的列,被不同的有机相,不同的流率。良好的峰形状观察当使用Purospher®明星RP-18(250毫米×4.6毫米;粒度5μm)分析柱和乙腈:水(挺v / v)为流动相的流速0.8 mL / min。废水监测在332海里。甲硝唑和呋喃唑酮的保留时间是4.292分钟,8.921分,分别为(图1)。
图1:优化后获得的色谱方法。
方法验证
系统适用性、线性度、灵敏度、精度、准确性、选择性、专一性、健壮性和强度进行方法验证参数按我指南(乐动KENO快乐彩16]。
系统适用性
系统适用性进行了研究使用工作标准溶液含有甲硝哒唑(60μg /毫升)和呋喃唑酮(20μg /毫升)由五重复注射的优化方法。结果进行了总结表2。这些结果满足要求的方法同时灭滴灵和呋喃唑酮的分离和定量。
| 参数 | 价值 | 推荐标准 | |
|---|---|---|---|
| 灭滴灵 | 呋喃唑酮 | ||
| 保留时间 | 4.274 (% RSD = - 0.876) | 8.931 (% RSD = - 0.401) | 相对标准偏差≤2 |
| 峰面积 | 6690755 (% RSD = - 0.608) | 4211712 (% RSD = - 0.167) | 相对标准偏差≤2 |
| USP板数 | 13709.6 | 6683.4 | > 2000 |
| USP尾矿因素 | 1.094 | 1.094 | ≤2 |
| 决议 | - - - - - - | 11.694 | > 3 |
表2:系统适用性。
线性和范围
在优化的实验条件下,建立了一个线性关系策划药物对药物浓度的峰面积(μg /毫升)。的浓度范围是30μg /毫升到90μg /毫升甲硝唑和10μg /毫升为呋喃唑酮30μg /毫升。线性回归分析的数据给以下方程:
y = 11151 x + 855.3 (R2灭滴灵= 0.9999)
y = 21064 x - 4041.0 (R2呋喃唑酮= 0.9996)
地点:x = y =峰面积浓度的药物(μg /毫升)和R2=回归系数。高值与小拦截显示良好的线性回归系数的校准曲线。
灵敏度
该方法的敏感性评估通过计算定量限度(定量限)和检测极限(LOD)。LOD和定量限计算如下:
定量限= 10 sd / b;LOD sd / b = 3.3
Sa =标准差的药物反应和b =校准曲线的斜率。LOD值是0.262,0.076μg /毫升,而定量限值是0.793,0.230μg / mL甲硝哒唑、呋喃唑酮,分别。这些值证明该方法的满意的灵敏度分析选择的药物组合。
精度
建立了精度分析甲硝唑和呋喃唑酮的浓度60μg /毫升,20μg /毫升,分别。系统精度测试通过应用该方法测定metronidozole和呋喃唑酮的纯形式连续五次。通过反复分析方法精度测试metronidozole和呋喃唑酮的平板电脑样品连续五次。结果进行了总结表3。%相对标准偏差值系统精度和方法精度< 0.7%,表明该方法具有良好的精度的同时分析甲硝哒唑、呋喃唑酮。
| 方法精度 | 系统精度 | ||
|---|---|---|---|
| 峰面积 | 统计分析 | 峰面积 | 统计分析 |
| 灭滴灵(60μg /毫升) | |||
| 6697550 | 意思是:6696261 SD:3067.75 %相对标准偏差:0.045 |
6631137 | 意思是:6690755 SD:40682.82 %相对标准偏差:0.608 |
| 6699886 | 6683003 | ||
| 6695684 | 6682018 | ||
| 6691533 | 6732905 | ||
| 6696655 | 6724711 | ||
| 呋喃唑酮(20μg /毫升) | |||
| 4218364 | 意思是:4214005 SD:3227.91 %相对标准偏差:0.076 |
4191873 | 意思是:4211712 SD:18111.28 %相对标准偏差:0.430 |
| 4210488 | 4204426 | ||
| 4215986 | 4200566 | ||
| 4211498 | 4228756 | ||
| 4213692 | 4232941 | ||
表3:精密研究的结果。
精度
pre平板样品分析解决方案,一个已知数量的标准溶液添加在三个不同的水平,即。、50%、100%和150%。提出的解决方案是重新分析方法。恢复研究的结果(表4)表明,% 99.66%和100.17%之间的复苏% RSD < 0.6%。结果显示良好的准确性的方法。证明了该方法的选择性的辅料不干扰分析物的分析。
| 上升水平(%) | 大量的毒品 | %的复苏 | 统计分析 | |
|---|---|---|---|---|
| 添加(µg /毫升) | 发现(µg /毫升) | |||
| 灭滴灵 | ||||
| 50 | 15 | 14.93 | 99.53 | 意思是:100.17 SD:0.585 %相对标准偏差:0.584 |
| 15 | 15.05 | 100.33 | ||
| 15 | 15.10 | 100.67 | ||
| One hundred. | 30. | 29.98 | 99.93 | 意思是:100.05 SD:0.273 %相对标准偏差:0.272 |
| 30. | 30.11 | 100.37 | ||
| 30. | 29.96 | 99.87 | ||
| 150年 | 45 | 45.06 | 100.13 | 意思是:99.91 SD:0.194 %相对标准偏差:0.194 |
| 45 | 44.89 | 99.76 | ||
| 45 | 44.93 | 99.84 | ||
| 呋喃唑酮 | ||||
| 50 | 5 | 4.96 | 99.20 | 意思是:99.66 SD:0.503 %相对标准偏差:0.505 |
| 5 | 5.01 | 100.20 | ||
| 5 | 4.98 | 99.60 | ||
| One hundred. | 10 | 9.97 | 99.70 | 意思是:99.83 SD:0.321 %相对标准偏差:0.321 |
| 10 | 9.96 | 99.60 | ||
| 10 | 10.02 | 100.20 | ||
| 150年 | 15 | 14.97 | 99.80 | 意思是:99.84 SD:0.402 %相对标准偏差:0.403 |
| 15 | 15.04 | 100.27 | ||
| 15 | 14.92 | 99.47 | ||
表4:复苏的研究结果。
强度
方法的强度决定了60μg /毫升,20μg /毫升浓度的甲硝哒唑、呋喃唑酮,分别通过分析整除两个分析师,两列和两个系统使用相同的实验条件。结果给出了表5。的低% RSD值(< 0.7%)演示了该方法的强度的同时分析所选的药物组合。
| 参数 | 灭滴灵(60μg /毫升) | 呋喃唑酮(20μg /毫升) | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 发现(µg /毫升) | %的复苏 | %相对标准偏差 | 发现(µg /毫升) | %的复苏 | %相对标准偏差 | |
| 分析我 | 60.05 | 100.08 | 0.259 | 19.94 | 99.70 | 0.521 |
| 分析师二世 | 59.98 | 99.97 | 0.315 | 19.86 | 99.30 | 0.263 |
| 列我 | 59.95 | 99.92 | 0.628 | 20.10 | 100.50 | 0.158 |
| 列二世 | 60.10 | 100.17 | 0.125 | 20.06 | 100.30 | 0.254 |
| 系统我 | 59.94 | 99.90 | 0.458 | 19.95 | 99.75 | 0.168 |
| 系统二世 | 59.89 | 99.82 | 0.264 | 20.03 | 100.15 | 0.627 |
表5:强度方法的结果。
鲁棒性
为了评估该方法的鲁棒性,小而故意变异的影响实验条件对分析物的峰面积。方法的鲁棒性检查60μg /毫升,20μg /毫升甲硝唑和呋喃唑酮,分别。结果进行了总结表6。结果表明,区域的峰值药物未受影响(RSD < 1%)由小流量的变化,流动相的组成、温度和检测波长表示重要方法的鲁棒性。
| 参数 | 价值 | 峰面积 | |
|---|---|---|---|
| 灭滴灵(60µg /毫升) | 呋喃唑酮(20µg /毫升) | ||
| 流量(毫升/分钟) | 0.7 | 6686924 | 4226384 |
| 0.8 | 6697550 | 4215628 | |
| 0.9 | 6685291 | 4205391 | |
| 的意思是 | 6689922 | 4215801 | |
| SD | 6656.596 | 10497.57 | |
| 标准偏差 | 0.099 | 0.249 | |
| 温度(摄氏度) | 25 | 6656321 | 4238164 |
| 27 | 6697550 | 4215628 | |
| 29日 | 6686324 | 4224862 | |
| 的意思是 | 6680065 | 4226218 | |
| SD | 21315.23 | 11329.03 | |
| 标准偏差 | 0.319 | 0.268 | |
| 流动相比例(v / v) | 88:12 | 6684136 | 4203628 |
| 挺 | 6697550 | 4215628 | |
| 92:08 | 6695175 | 4203951 | |
| 的意思是 | 6692287 | 4207736 | |
| SD | 7158.16 | 6836.869 | |
| 标准偏差 | 0.106 | 0.162 | |
| 波长(nm) | 330年 | 6659318 | 4226017 |
| 332年 | 6697550 | 4215628 | |
| 334年 | 6662846 | 4216059 | |
| 的意思是 | 6673238 | 4219235 | |
| SD | 21128.58 | 5877.625 | |
| 标准偏差 | 0.316 | 0.139 | |
表6:结果的方法的鲁棒性。
特异性
该方法的特异性是调查使用强制降解研究。退化的研究是为了确保该方法能够单独甲硝唑和呋喃唑酮的生成可能的降解产物在强制降解研究。酸、碱、氧化、光解和热降解研究与平板电脑样品进行60μg /毫升的浓度和20μg /毫升的甲硝哒唑、呋喃唑酮,分别。提出了退化研究的结果表7。色谱图所示图2- - - - - -6。更多比例的退化在碱性条件下发生的药物。甲硝哒唑降解的比例是在热降解而furazoline的光解的条件。在所有的降解条件,除了基降解,降解产物峰之一是观察。由于产生的降解产物压力不会影响到甲硝哒唑、呋喃唑酮的检测,因此该方法可以被视为稳定——指示。
| 类型的退化 | 灭滴灵(60 ug /毫升) | 呋喃唑酮(20µg /毫升) | ||
|---|---|---|---|---|
| %的复苏 | %退化 | %的复苏 | %退化 | |
| 未经碰撞的 | 100.02 | 0.000 | 99.97 | 0.000 |
| 酸 | 98.459 | 1.541 | 98.842 | 1.158 |
| 基地 | 94.372 | 5.628 | 96.517 | 3.483 |
| 氧化 | 95.179 | 4.821 | 96.289 | 3.711 |
| 光解的 | 98.114 | 1.886 | 99.131 | 0.869 |
| 热 | 98.882 | 1.118 | 99.075 | 0.925 |
表。7。强制降解研究的结果。
图2:酸降解的色谱图。
图3:色谱的基础退化。
图4:氧化降解的色谱图。
图5:热降解的色谱图。
图6:色谱图的退化。
应用程序的方法
分析方法的应用评估的商用平板电脑(Dependal M平板电脑,葛兰素史克Smithkline印度制药有限公司;声称含有100毫克的呋喃唑酮和300毫克的甲硝哒唑)。百分比分析发现99.96%±0.193%甲硝唑和呋喃唑酮100.02±0.058 (表8)。好%和% RSD值表明,提出的方法是准确和精确,分别分析甲硝哒唑、呋喃唑酮片剂剂型。
| 被分析物 | 标签声明(5毫克/毫升) | 发现(毫克) | 的意思是 | %的复苏 | %相对标准偏差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 灭滴灵 | 300年 | 299.84 | 299.90 | 99.96 | 0.193 |
| 300年 | 299.75 | ||||
| 300年 | 300.12 | ||||
| 呋喃唑酮 | One hundred. | 99.95 | 100.02 | 100.02 | 0.058 |
| One hundred. | 100.04 | ||||
| One hundred. | 100.06 |
表8所示。测定甲硝唑和呋喃唑酮的平板电脑。
结论
开发和验证稳定性指示同时量化的甲硝唑和呋喃唑酮的高效液相色谱方法简单、准确、精确、敏感、具体,崎岖的和鲁棒性。该方法可以被应用甲硝唑和呋喃唑酮的常规分析结合平板剂型。
确认
作者感谢当局Acharya Nagarjuna大学,托尔和Chalapathi药学院,托尔提供设施开展工作。
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