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植物化学的调查Caralluma lasiantha:豆甾醇的隔离,一个活跃的免疫调节代理

*通信:

Suresh Babu K,Mallareddy工程学院化学系,海德拉巴,Telangana,印度,电话:+ 919849180377;电子邮件:babuiict@gmail.com

文摘

豆甾醇,phytosteroid从c . lasiantha孤立首次使用正己烷作为溶剂。豆甾醇为特征的基础上,物理、化学和光谱数据(IR, 1 h NMR, 13 c NMR、1 hnmr、DEPT-45, 90 & 135,和MS)分析以及通过比较他们的文献数据。一系列步骤采用皂化、分步结晶和梯度洗脱一列色谱法隔离豆甾醇,因为一些植物甾醇具有相同的物理特性使得很难隔离成分。

关键字

Caralluma lasianth;印度传统医学;豆甾醇隔离;植物化学的筛选;结构说明

介绍

萝摩科家庭由2500名物种下降200属。Caralluma是萝摩科的一个属的吗家庭和长大后通常在干旱地区(1]。Carallumaumbellata提取物与优越的抗菌活性报道尤其是对细菌导致胃病和疼痛(2]。Carallumalasiantha (syn。Boucerosia lasiantha)是众所周知的物种属的。它被称为Sirumankeerai在泰米尔和与当地不同的名称Kundeti Kommulu在泰卢固语3]。这是一个著名的室内观赏植物和多汁的习惯(4]。发现在安得拉邦的干旱地区,印度和特别是公益性和Chittoor地区。它被用作传统医学降低体温(5]。Methanolic提取的Boucerosia lasiantha(Caralluma lasiantha)表现出良好的抗氧化活性6],anti-proliferative财产[7和抗高血糖药/血糖过低的活动8]。在我们的研究中,我们报告的抗菌活性C.lasiantha针对致病革兰氏细菌(+)(-)和克(9]。同样,提取物的抗真菌活性Caralluma lasiantha对存储真菌也报道了我们最近[10]。

两个c - 21甾体苷(lasianthoside-A和lasianthoside-B) [11)(图。1)和一个已知的黄酮糖苷(Luteoline-4-O-neohesperiodoside) [12] (图。2)提取c . lasiantha使用醇等极性溶剂。在我们之前的沟通,我们报道的隔离C21孕烷类固醇,3β,14β-dihydroxy-14β-pregn-5-en-20-one (图。3)c . lasiantha(13]。全面的文献表明,没有痛苦c . lasianth进行了使用溶剂低极性。因此,本研究的目的是为正己烷提取的植物化学的筛查c . lasiantha这是探索物种。

材料和方法

所有化学品都净化按照常规程序(14)和使用的所有化学分析试剂级,默克公司印度有限公司的茎和根Caralluma lasiantha(萝摩科)收集从Gooty,公益性,安得拉邦,印度在2012年2月。凭证标本是存入标本,植物学,斯克里希纳Devaraya大学,公益性

分离和鉴定

阴凉干燥茎和根粉和渗(筛不。14)。后来粉末是存储在气密容器。粉是体重与索氏提取器通过使用溶剂的极性与非极性端到极地(己烷、氯仿和甲醇)与结束连续溶剂萃取。集中最后的痕迹溶剂的提取和删除,rotavapor (Buchi Labotec rotavapor模型使用r - 205) [15,16]。然后,再结晶是为了净化原油提取。熔点是由使用Fisher-John装置。ifs - 120 h的红外光谱仪用于记录。的¹H核磁共振和¹³C核磁共振光谱被力量75 MHz和300 MHz,光谱仪,使用一个像TMS内部标准。质谱记录使用ZAB-HS质谱仪。

酒精测试

少量的粗提物溶解在0.5毫升的二氧六环。获得的解决方案是添加到0.5毫升硝酸铈铵试剂。然后添加一毫升的二氧六环和动摇。黄色到红色的形成表明一个酒鬼羟基的存在(17]。

Libermann-Burchard测试

添加几滴醋酐的提取和煮熟。浓硫酸加入上述冷却解决方案。固醇的确认形成的棕色环两层交界处和绿色在上层18]。

结果与讨论

极性溶剂影响的性质可榨出的植物化学的。正己烷提取物在目前的研究中。固醇的粗提取液中显示酒精测试的积极成果(17)和Libermann-Burchard测试(18]。彻底的文献表明,豆甾醇的纯形式的分离是很困难的(19,20.双键的存在(C)₂₂= C₂₃)只是β-sitosterol的区别。因此,他们拥有相同的物理性质非常复杂的分离。此外,同样的R_f价值报告豆甾醇和β-sitosterol尽管许多溶剂系统的使用(21]。此外,文献显示,很难获得谷甾醇在纯态(22- - - - - -24]。因此,许多研究人员报道β-sitosterol和豆甾醇的混合物的分离19,21,25]。因此,在本研究为了单独的豆甾醇β-sitosterol和其他植物甾醇,一系列步骤采用皂化、分步结晶和梯度洗脱柱层析法。

皂化

粗提取液(黑绿褐色油质量)是在室温下风干。这是提取先后与增加极性溶剂。提取集中在真空,然后贴上标签。为了消除脂肪物质,石油醚提取物与酒精皂化KOH(1米)。Unsaponified问题在石油醚提取,除去溶剂。少量的unsaponified提取是溶解在合适的溶剂(三氯甲烷)和测试被发现与薄层色谱硅胶60 F254预镀铝。在一些试点测试,正己烷和乙酸乙酯的混合物(宣告)被发现合适的洗脱液。存在的六种不同的分子甾核喷显色剂(5%证实了H₂所以₄在甲醇)和碘色谱的发展。发达色谱碘室了五到六un-detached R和连续点模式_f范围(0.4 - 0.8)。少数量的薄层色谱斑点unsaponified物质显示更少的化合物相比,它的存在以上的石油提取相结合。

分步结晶为豆甾醇与植物甾醇的分离混合物

n戊醇与环己酮被证明是有效的溶剂分离和净化豆甾醇和β-sitosterol,基于这些植物甾醇的溶解度差异和溶解度的变化与温度(26,27]。考虑到这些点的优势,提出了一种分步结晶过程由徐et al。28五个阶段后)获得92%的纯豆甾醇。采用同样的程序在本研究中由于各种其他的优势,像简单的操作程序简单的溶剂和复苏低污染。25克的植物甾醇被溶解在75毫升环己酮混合物搅拌一个小时60°C。水晶豆甾醇被冷却沉淀的解决方案到室温。过滤后的质量在真空干燥箱干燥60°C。这个分步结晶操作重复了五次获得相对较高的纯度豆甾醇明显的合理分离斑点TLC盘子。

柱色谱分离

所以获得的化合物是通过柱层析法进一步纯化。它是由包装硅胶(60 - 120)网使用己烷进行湿包装方法。梯度洗脱技术之后的极性溶剂混合物增加了添加等OAC己烷(0% - -100%)。洗出液监测用TLC如上所述。收集了172洗出液,类似的分数都汇集在一起。制备薄层色谱用于辅助净化。与相同的R点_f值被刮,提取到石油醚作为溶剂。存在唯一的植物化学的确认从单点即使让TLC使用不同的溶剂混合物像氯仿:乙醇(9.5:0.5),乙酸乙酯:乙醇(9.5:0.5),氯仿,乙酸乙酯(4:1)。

在丙酮、再结晶后得到白色晶体粉末,熔点171 - 172°C和Rf值为0.7(己烷:乙酸乙酯=宣告v / v) (29日]。通过使用质谱),红外光谱、¹h - nmr、C¹³核磁共振技术,结构是阐明豆甾醇(图。4)。

质量(ES-IMS)(m / z): 413.3 (m + H)⁺

分子离子峰的质谱在413.3 m / z (m + H)⁺对应于分子式C_29日H₄₈O相当于豆甾醇的公式,一个众所周知的植物甾醇。

起始点:v_马克斯3419、3025、2935、2866、1567、1021厘米¹

红外信号吸收带观察到3419厘米¹的特点是地伸展。吸收在3025厘米¹是典型的烯= CH -拉伸而吸收频率,如1567厘米吗¹和1021厘米¹由于C = C,分别切断吸收。

¹H核磁共振(CDCl₃)

δ5.35 (1 h d J = 4.62赫兹,H-22), 5.15 (1 h, q, J = 7.86赫兹,H-23), 5.01 (1 h, q, J = 7.85 Hz - 6), 3.52 (1 h, m J = 5.09 Hz H-3), 2.26 (2 h t J = 8.13赫兹,H-4α,4β),2.03 (3 h, m J = 8.07赫兹,3-OH, H-20, H-24), 1.85 (2 h d J = 10.05赫兹,H7α,7β),1.67 (3 h d J = 10.35 Hz H-15αH-17, H-25), 1.46 (8 h, m, J = 5.91 Hz H-2αH-2β,H-8, H-9, H-11α,H-15β,H-16α,H-16β),1.18 (6 h, m, J = 6.95 Hz 11β,H-12α,H-12β,H-14, H-15β,Me-19α,H-28α,H-28β,),1.02 (8 h d J = 6.57赫兹,H-1α,1β,我18,Me-19β,Me-19γ,Me-21α),0.93 (1 h, t J = 5.40 Hz Me-21β),0.82 (10 h, q, J = 7.19赫兹,Me-21γ,Me-26, Me-27, Me-29)。

¹H核磁共振光谱由山峰了领域的主要地区。然而,两个信号对应于烯地区观察到高的化学变化值。多重态在δ3.52 (1 H, m, H-3α)特征carbinylic质子甾醇的一部分。峰在低即吸收领域。,at δ δ 5.35 (1H, d, J=4.62 Hz, H-22), 5.15 (1H, q, J=7.86 Hz, H-23) and 5.01 (1H, q, J=7.85 Hz H-6) correspond to two and one ethylene protons respectively present on C₂₂= C₂₃和C₆。高强度的峰值在δ1.02和0.82对应甲基(十九个,我18、Me-26 Me-27和Me-29)。

¹³C核磁共振(CDCl₃):

δ140.86 (c - 5), 138.44 (C-23), 129.38 (C-22), 121.8(其他),71.88(颈),56.98 (c - 17), 56.06 (C-24), 51.36(碳14),50.27 (c - 4), 42.39 (C-9), 42.32 (c13), 40.62 (C-10), 39.8 (c - 2), 37.38 (C-20), 36.62(颈- 1),32.01(技术),32.01 (C-25), 32.01(即),31.74 (8),29.04 (C-28), 25.53 (C-15), 24.48 (C-16), 21.35 (C-11), 21.21 (C-18), 21.21 (C-19), 19.52 (C-26), 19.11(印度),12.37 (c - 21), 12.16 (c29)。

¹³C核磁共振频谱显示6甲基的存在,9亚甲基,11次甲基,3季碳原子。信号在δ140.86和121.8对应双键碳原子之间C5、C6的Δ5 spirostene [30.]。附件β-hydroxyl集团从一个峰值在δ71.88 C3是可见的(31日]。高强度的峰值在δ21.21代表角甲基碳——C19和C18。γ-Gauche互动提高了筛选C-18导致较低的化学位移(δ)作为C-18观察¹⁹。

部门(CDCl₃):

部门45:

碳氢键碳:138.34,129.25,121.70,71.76,56.86,55.93,51.24,50.14,40.53,31.61,31.89。

CH₂碳:42.26,39.68,37.25,31.89,31.89,28.94,25.42,24.37,21.12。

CH₃碳:21.25,21.07,19.41,19.0,12.28,12.06。

90年部门:

碳氢键碳:138.34,129.25,121.70,71.76,56.86,55.93,51.24,50.14,40.53,31.61,31.89。

135年部门:

了CH₃碳:21.25,21.07,19.41,19.0,12.28,12.06。

CH碳:138.34,129.25,121.70,71.76,56.86,55.93,51.24,50.14,40.53,31.61,31.89。

了CH₂碳:42.26,39.68,37.25,31.89,31.89,28.94,25.42,24.37,21.12。

它确认了孤立分子豆甾醇是由于存在与一个羟基甾醇骨架(颈),两个双键(在/颈- 5 6 C-20 / c - 21),六甲基(18,22- - - - - -24]。的物理、化学和光谱(天然橡胶。¹H核磁共振,¹³C NMR,部门(90和135)质)数据、孤立的分数在符合那些可用的文学。

植物固醇也被称为植物甾醇的质膜的重要结构组成(32]。豆甾醇是一个传播植物甾醇在真菌、植物和动物。这种二次代谢物健康促进组成(33和展品抗菌34),抗氧化剂,低血糖、甲状腺抑制属性(35]。β-sitosterol被证明是负责许多植物提取物的免疫调节活动(30.,36]。需要大量的纯豆甾醇的研究结构在植物生物学等不同领域,营养和制药。

文献调查显示,尽管豆甾醇提取不同物种萝摩科家族的Calotropis巨大的(24),Calotropis procera(37),Oxystelma esculentum(38),蒙迪亚whytei(钩。f。) [39),Leptadenia试(Retz) [40),g .叶(41),从第一次的隔离Caralluma属是报告Caralluma wissmanni(42]。然而,目前的研究报告首次对豆甾醇的提取c . lasiantha。各种根和功能性基团合成和天然分子决定他们的药理活性43- - - - - -46]。因此,特区(结构活性关系)stigmosterol与此类活动可以进一步研究。

结论

比较文学、可用的物理特性分析的化学测试和光谱数据显示,豆甾醇,著名的甾醇从c . lasianta孤立首次使用正己烷作为萃取溶剂。

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