+ 44-73620-49920简短的沟通
数量:17 (1)色谱法:分离的技术
雅各布·泰勒*
收到:2022年1月9日;接受:2022年1月13日;发表:2022年1月25日
引用:泰勒j .色谱法:分离的技术。物理化学印第安纳j . 2022; 17 (1): 161。
文摘
色谱法是一种重要的生物物理技术进行定性和定量分析,允许分离、鉴定、纯化的组件的混合物。总电荷大小和形状,表面疏水基团,与固定相都是因素的结合能力,可用于去除蛋白质。离子交换、表面吸附、分区和尺寸排除四个分离的方法是基于分子性质和互动类型。列,薄层和纸色谱法的例子是色谱法程序使用一个固定床。最普遍的方法之一的蛋白质纯化柱层析法
介绍
色谱使用分子混合物的原则被应用于表面或固体和液体固定相(稳定阶段)分离的帮助下从一个另一个在移动一个流动相。分子特性与吸附(固相),分区(固相),和亲和力或变化在他们的分子量是有效的分离过程。一些组件固定相的混合物逗留更长时间和移动缓慢通过色谱系统由于这些差异,而其他人迅速流入流动相,让系统更快的[1]。基本组件有效分离分子相互之间的交互的类型固定相,流动相,物质中包含的混合物。等小分子氨基酸、碳水化合物和脂肪酸可以使用分区分离和鉴定色谱法程序。亲和力色谱法(也称为离子交换色谱法)更为成功地分离大分子核酸和蛋白质等[2]。纸色谱法在研究涉及用于分离蛋白质和蛋白质合成;气液色谱法用于单独的酒精、乙醚、脂质和氨基酸组,以及观察酶相互作用;和分子筛色谱法用于确定蛋白质的分子量。净化,agarosegel色谱法用于RNA、DNA粒子和病毒的纯化。
固定相的色谱法是固相或液相表面涂层固相。流动相流经固定相是气体或液体阶段。如果流动相是液体,称为液体色谱法(LC),如果它是气体就被称为气体色谱法(GC)。气体色谱法适用于气体和混合物的挥发性液体,固体材料[3]。液体色谱法特别是用于热不稳定和非易失性样品。类型色谱-柱色谱、离子交换色谱、凝胶渗透色谱法(分子筛),亲和色谱法、纸色谱法、薄层色谱法,气相色谱,Dye-ligand色谱、疏水作用色谱法、伪亲和色谱法,高压液体色谱法(高效液相色谱)。
讨论
柱层析法,因为蛋白质不同大小、形状、净电荷、固定相使用,和绑定功能,这些区别特征可以用色谱分离过程。列色谱法是其中最常用的方法。净化的生物分子是用这种方法来完成的。列(固定相),应用于样品分离是第一,其次是洗缓冲区(流动相)。他们的流动由内柱材料,确保定位在一个玻璃纤维的支持。样品都聚集在一个时间,volumedependent设备的底部[4]。
离子交换色谱-静电带电蛋白质之间的相互作用组和坚定支持支撑离子交换材料色谱法(矩阵)。矩阵的离子负载对蛋白质的分离,蛋白质的亲和柱是通过离子连接。蛋白质是分开列通过改变缓冲溶液的pH值、离子盐浓度、离子强度。阴离子交换矩阵是带正电的离子置换矩阵,吸附带负电荷的蛋白质[5]。阳离子交换矩阵结合带负电荷的团体和吸附带正电的蛋白质。
凝胶渗透(分子筛)色谱法——这种技术的主要前提是分开的大分子根据他们不同的分子大小使用dextran-containing材料。这种方法主要是用来量化蛋白质分子量和低盐浓度的解决方案。凝胶渗透柱的固定相是由惰性分子小孔[6]。解决方案,其中包含不同大小的分子,不断通过列在一个稳定的流量。分子大于毛孔无法渗透到凝胶粒子和它们之间被困在一个定义的空间。更大的分子穿透多孔粒子间,通过柱的内部迅速行动。
亲和色谱法——酶、激素、抗体、核酸,并使用这个特定的蛋白质纯化色谱法技术[7]。列的填充材料的配体,可以形成一个复合某些蛋白质(右旋糖酐、聚丙烯酰胺、纤维素等)。自由蛋白质离开列时,特定的蛋白质与配体形成一个复杂的绑定到固体支持(矩阵)和列。然后结合蛋白质释放列通过改变离子强度(通过改变或添加盐溶液pH值)。纸色谱法——的支持材料色谱法是一层纤维素用水浸泡。在这个方法很厚滤纸的支持,和静止的“液态”水滴定居在毛孔。介绍了一个合适的流体在流动相在发展中坦克。“液-液”色谱法是纸色谱法[8]。
薄层色谱,薄层色谱法是一种色谱法使用“固液吸附”。A solid adsorbent material placed on glass plates serves as the stationary phase in this approach. All solid substances used in column色谱法(氧化铝、硅胶、纤维素)可以用作吸附剂材料。通过固定相的流动相爬向上。通过毛细管作用,溶剂上升的薄板浸泡。它还推动混合物之前掉在底部区域的板用吸管向上不同流速在这过程[9]。因此完成的分离分析。的极性物质,固相,溶剂影响向上运输率。在此方法中,气相色谱的固定相是一个列,插入的设备,包括液体固定相吸附到表面的惰性固体。气体色谱法是一种色谱法使用这两种气体和液体。气体氦或N2等构成了载波相位。在高压下,流动相,这是一种惰性气体,通过一个列。蒸发样本进入气体流动相。坚定支持,样品中的组件是流动相、固定相之间的传播。气体色谱法是一个简单的,通用的,高度敏感,quick-to-apply分离技术极其微小的化合物[10]。染料-配位体色谱各种酶的能力将嘌呤核苷酸汽巴龙蓝色F3GA染料中演示了这一技术的发展。NAD的结构类似于一个平面环与带负电荷的团体。绑定的汽巴龙蓝色F3GA染料腺嘌呤,核糖结合位点的NAD已经证明了这种联系。染料在ADPribose一样工作。这种类型的吸附剂有约束力的能力比其他吸附剂的10 - 20倍。
吸附的蛋白质是分开列利用吸附剂的离子交换性能和合适的pH值条件下,洗脱high-ionic力量解决方案,和吸附剂的离子交换特性[11]。疏水作用色谱法(嗝)-吸附剂生产作为亲和层析柱材料的配体结合在这个过程。疏水侧链连着之间的相互作用色谱矩阵提供嗝的基础技术。Pseudo-affinity色谱——因为他们对脱氢酶的亲和力,激酶,转移酶和还原酶,一些化学物质,比如anthraquinonoid染料和偶氮染料作为配体可以使用。固定化金属亲和色谱法是最著名的这种色谱法。高压液相色谱-可以进行结构和功能分析以及大量化合物的净化使用这个色谱法技术在很短的时间[12]。氨基酸、碳水化合物、脂质、核酸,蛋白质,类固醇,都可以和其他生理活性物质分离和确定使用这个技术。高效液相色谱的流动相流经列在一个较高的速度(0.1厘米/秒到5厘米/秒)的压力和10 atm - 400自动取款机。小颗粒和高的就业压力的溶剂流率这种方法提高液相色谱的分离能力,在短时间内执行和分析。
的色谱法生物化学家技术是一种强大的工具,它是非常简单的使用在临床实验室检测。例如,纸色谱法用于识别糖类和氨基酸在生理体液与遗传代谢疾病。在实验室、气体色谱法是用来测量类固醇、巴比妥酸盐和脂肪。维生素使用色谱和蛋白质分离过程[13]。
结论
与天然色素,色谱技术最初用于分离化合物根据他们的色调。其应用领域已显著增长。色谱法现在被认为是一个非常敏感而有效的分离技术。一个最有用的是柱层析法分离和测定方法。列色谱法是一种蛋白质纯化技术,是基于蛋白质的显著特征之一。此外,这些技术是用来确保一个蛋白质的纯度。高效液相色谱法能净化氨基酸,蛋白质,核酸,碳氢化合物、碳水化合物、药物、抗生素,类固醇,除此之外,因为它增加了敏感性,快速的周转率,和使用作为一个定量的方法。
