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,体积:4 (2)简要回顾在南方玷污其方法论和应用程序
收到:2021年9月30日;接受:2021年10月14日;发表:2021年的10月25日
引用:古普塔NA。简要回顾南部印迹方法和应用。生物化学杂志。4 (2):142
介绍
印迹是一种策略用于亚原子科学识别一个特定的DNA排列DNA测试。南部在内巩固electrophoresis-isolated DNA的部分转移到一个通道层和产生的部分发现测试杂交。
技术命名的英国学者埃德温南部,1975年最初分配它。(即其他模糊策略。免疫印迹,满地北部、东部涂抹,南西方涂片),利用比较标准,然而利用RNA和蛋白质;后来被命名为关于埃德温南部的名字。马克是同名,提升南部,作为正式的是司空见惯的人、地点或事物。为其他名称在内的策略可能会遵循这个节目,以此类推(1]。
方法
1。限制内切酶是利用强原子重量DNA链切成更温和的部分。
2。DNA部分然后在琼脂糖凝胶电泳分离他们的大小。
3所示。只是碰碰运气,一部分DNA部分大于15 kb,之前弄脏,这种凝胶可能会腐蚀处理,例如,削弱盐酸。这depurinates DNA部分,将DNA分解成更温和,随后允许额外的生产交换的凝胶层。
4所示。只是碰碰运气,抗酸剂交换技术是利用DNA凝胶放入一个基本的安排(通常含氢氧化钠)变性的双重的废弃的DNA。可溶性的变性气候可能工作在限制相反带电胸腺嘧啶代谢产物的DNA的着重带电氨基酸聚会层,隔离成单股DNA杂交晚些时候到测试(见下),并歼灭任何剩余的RNA可能在任何情况下可用的DNA。抗酸剂的决定公正的交易策略,在任何情况下,定期准确,可能导致类似的结果。
5。一张硝基(或者,话又说回来,尼龙)电影设置上(或下,视课程交换)的凝胶。张力是同样适用于凝胶(利用拉,或通过设置一堆纸巾和负载的层和凝胶),保证大甚至凝胶和电影之间的联系。LD乐动体育官网在移动的情况下,拉,20 x SSC垫是用来保证密封,防止凝胶的干燥。缓冲将由细长的活动从一个区域的高水潜力的地区低水势(通常频道纸、纸巾)然后使用移动的DNA凝胶到电影;粒子贸易协会领带层由于负电荷的DNA的DNA和正电荷层。
6。这部电影是准备在真空或正常肉用鸡2小时在80°C(标准条件;硝基或尼龙层)或提交给永远明亮的辐射(尼龙层)加入DNA转移到这部电影。
7所示。这部电影然后提交给DNA杂交测试一个孤独的部分与特定分组的出现在目标DNA并不是真正的解决。测试DNA标记所以很好识别,一般通过加入放射性或标签的粒子荧光显色的颜色。有时,杂交试验使用RNA可能产生,而不是DNA。保证测试的限制的明确性DNA的例子中,最正常的杂交技术利用鲑鱼和鲱鱼精子DNA薄膜表面的阻碍和目标DNA,去离子的甲酰胺,清洁剂SDS减少模糊限制的测试。
8。杂交后,丰度测试是洗的层(通常利用SSC支持),和杂交的例子是设想X-beam电影通过放射自显影法的放射性或荧光测试,或改善阴影的电影如果显色位置技术是利用2]。
结果
杂交试验的一个特定的DNA部分频道的电影表明这段包含DNA积分到测试的安排。交流阶段的DNA电泳凝胶层允许简单的限制的命名size-fractionated DNA杂交试验。它同样考虑了困扰的客观测试一半半,所需调查通过放射自显影法或其他识别技术。南部与限制污迹进行复合处理基因组DNA可能利用决定安排的数量(例如,质量副本)的基因组。测试,跟一个孤独的DNA片段没有减少限制蛋白质将单独带南部涂片,而不同群体可能会看到当测试与几个异常比较分组(例如,那些可能连续重复的结果)。杂交条件的变更(例如,扩大杂交温度或减少盐聚焦)可能利用杂交构建明确性和下降100%以下的测试还是比较(3]。
应用程序
南部印迹转移可能用于homology-put一起克隆对蛋白质的氨基腐蚀性继承的前提下客观质量的结果。寡核苷酸计划与目标,他们就像目标。放射性标记的寡核苷酸是综合混合,用于屏幕DNA库,或者克隆的DNA片段的不同分类。分组与杂交杂交试验另外解剖,例如,得到完整的一系列指定的质量。
南部印迹同样可以用来识别甲基化目的地具体品质。特别有用的限制核酸酶MspI HpaII,感知和切断两个在一个类似的安排。尽管如此,HpaII需要一个C在网站被甲基化,而MspI分裂DNA unmethylated网站。通过这种方式,任何甲基化区域内分组调查与一个特定的测试将由前分离,但不是最后提到的,酶(4]。
引用
- 阿切尔SL。线粒体dynamics-mitochondrial核裂变和核聚变在人类疾病。新英格J医学。2013;369 (23):2236 - 51。
- Arnaudo E, Shanske年代,DiMauro et al。消耗的肌肉线粒体DNA与zidovudine-induced肌病艾滋病患者。《柳叶刀》杂志。1991;337 (8740):508 - 10。
- 陈CH,程恩华YC。细胞质在线粒体脱氧胞苷激酶的作用反的影响免疫缺陷病毒化合物,2 ',3 '双脱氧胞苷。J生物化学杂志。1992;267 (5):2856 - 9。
- Gripon P, Rumin年代,城市et al。感染人类肝癌细胞系通过肝炎B病毒。Nat Aca Sci进行。2002;99 (24):15655 - 60。
