原文
，卷:11(1)
溴化剂和甲基橙分光光度法测定片剂中阿莫曲坦的含量含量均匀度测量的应用
收到日期:2017年11月19日;接受日期:2018年4月6日;发表日期:2018年4月09日
引用:马哈茂德·奥，穆罕默德·阿，瓦利德·伊。溴化剂和甲基橙分光光度法测定片剂中阿莫曲坦的含量含量均匀度测量的应用。ChemXpress。2017; 11(1): 133。
摘要
以原位生成溴为氧化剂，在酸性介质中，甲基橙为显色剂，建立了一种简单、灵敏、特异、快速、准确的测定纯制剂和药物制剂中苹果酸阿莫曲坦(ALM)的分光光度法。苹果酸阿莫曲坦与已知量的溴反应，剩余未反应的溴通过与甲基橙反应，然后在509 nm处测定吸光度。反应的溴含量与药物的用量相对应。啤酒的法律浓度范围为3- 17 μg/ml。LOD为0.59 ug/mL, LOQ为1.78 ug/mL。该法已较好地应用于原料药、制剂及含量均匀性的检测。结果与对照法进行了统计学比较。
关键字
Almotriptan;剂型;原位生成溴;氧化剂;甲基橙;分光光度法
简介
偏头痛发作会导致严重的疼痛持续数小时到数天，而且可能严重到疼痛是禁用的。先兆症状可能在头痛之前或伴随头痛出现。这些症状包括闪光、盲点或一侧面部、手臂或腿部的刺痛感。苹果酸阿莫曲坦(ALM)，化学名称为1-[({3-[2(二甲氨基)乙基]吲哚-5-基}甲基)磺酰基]苹果酸吡咯烷(图1),是5 -羟色胺受体激动剂。适用于急性多发性硬化症的治疗偏头痛攻击(1］．不同的分析方法被报道用于检测引用药物。这些方法包括荧光分光光度法、高效液相色谱法和薄层色谱法。本研究采用分光光度法，建立了简单、灵敏、特异的检测纯制剂和制剂中ALM的方法。方法利用原位生成了溴作为氧化剂和甲基橙，成功地应用于许多生物活性物质的灵敏分光光度法检测[2-4］．该方法简便、准确、精密度高。
图1:阿莫曲坦的化学结构。
建议的测定方法已根据ICH指南完全验证;乐动KENO快乐彩此外，通过USP指南将其应用于引用药物制剂的含量均匀性测量[乐动KENO快乐彩5-7］．
实验的细节
装置
岛津UV-1601 PC紫外可见分光光度计(日本东京)，1厘米石英电池，超声波分析仪，用于测试和标准溶液的均质模型使用350 (eu)和pH计(葡萄牙)进行pH调整。实验室离心机转速为18,659 g-forces (Bremsen ECCO，德国)。数字分析天平(AG 29, Meltter Toledo, Glattbrugg，瑞士)。德国MLW型恒温控制水浴。所有计算和统计均使用GraphPad InStat 3.05版进行®软件
材料和试剂
制药化合物
•苹果酸almo曲坦(ALM, 99.5%))由欧洲埃及公司为埃及亚历山大制药工业公司提供
制药配方
•Almotrip的强项®标签含有17.5毫克苹果酸阿莫曲坦/片，等于12.5毫克阿莫曲坦碱(批次# 3083001A)，欧洲埃及制药公司，Alex，埃及的产品。
化学品和试剂
•盐酸(El-Nasr Chemicals，埃及)通过将45 mL浓盐酸(36%)添加到100 mL蒸馏水(5 M HCl)中形成。
•甲基橙(万能精细化学品，印度)将10mg染料溶解在双重蒸馏水中，形成100 μg/mL染料溶液。
•稀释至100ml在校准烧瓶中。将其稀释至所需浓度(50 ug/mL)，至少稳定2周。
•溴酸盐/溴化物，A股票将100mg溴酸钾(El-Nasr chemical co.， Abu Zaabal, Egypt.)和1.0 g KBr (El-Nasr chemical co.， Abu Zaabal, Egypt.)溶解在双重蒸馏水中，在校准烧瓶中用蒸馏水稀释至100ml，即可形成1000 μg/mL溴酸钾溶液，其中含有过量的KBr。用双蒸馏水稀释上述溶液，得到10ug /mL KBrO3供使用。
•甲醇、乙醇和乙腈(El-Nasr chemical co.， Abu Zaabal，埃及)。
标准药物溶液
取苹果酸阿莫曲坦10mg，转移到100ml容量瓶中。将药物溶解在双重蒸馏水中，用蒸馏水稀释至标记处，达到a股票溶液100 ug/ml。
一般分析程序
将精确测量的苹果酸阿莫曲坦转移到一系列10.0 mL校准烧瓶中，使最终浓度在(3-17 ug/mL)范围内。向每个烧瓶中加入1ml 5 M HCl，然后加入1.3 mL溴酸溴化物混合物。内容已经混合得很好，烧瓶已经放在一边20分钟，用力摇晃。最后，向每个烧瓶中加入2毫升甲基橙，用双重蒸馏水完成每个烧瓶，并在509 nm处测量吸光度。
适用于片剂剂型
将20.0片苹果酸阿莫曲坦精确称重，然后在研钵中研磨并混合均匀。将精确称重的片剂(相当于10毫克苹果酸阿莫曲坦)转移到100毫升校准烧瓶中，并加入约80.0毫升的双蒸馏水。烧瓶中的内容物已超声20.0分钟，用双重蒸馏水完成，然后过滤。滤液的第一部分被排除。这些溶液的等分被转移到一系列10.0 mL校准烧瓶中，以达到样品(3-17ug)，并按照前面提到的程序进行。
结果与讨论
建议的方法是间接测定ALM，这取决于对过量溴的检测(原位在允许(ALM)和测量量的溴发生反应后生成)。通过与甲基橙反应，测定了溴的残留量。该方法主要依靠溴对甲基橙的漂白作用，即染料氧化引起的漂白作用。当添加过量的ALM到确定的量原位产生的溴，按比例消耗后者，从而导致溴量的减少。当一定量的甲基橙加入到减少量的溴中时，甲基橙的浓度随之增加，因此在各自λ处的吸光度成比例地增加马克斯=509 nm随着ALM浓度的增加而增加。因此，我们的目标是利用ALM的吸收带，探索一种新的方法来分析其片剂。对影响ALM吸光强度的诸多实验因素进行了优化。这些条件单独改变，而其他条件保持不变。
吸收光谱
在200 ~ 800 nm范围内观察了检测ALM的吸收光谱。苹果酸阿莫曲坦和部分染料用溴氧化后，多余的未氧化量染料在509 nm处被吸收(图2)．
图2:吸收光谱为5 μg mL－12.3 μg mL存在甲基橙－1溴氧化后的ALM。
不同因素优化
不同酸的种类:不同的酸已经被检查作为介质的溴产生，包括H2SO4, HCl, HNO3.和H3.阿宝4．盐酸被认为是最合适的助剂，能给出最准确的结果。因此，5M盐酸已通过程序使用(图3)．
图3:溴酸盐-溴化物混合物对甲基橙(5 μg ml－1)，以5 M HCL的固定量。
盐酸体积:(ALM)与溴(原位)在使用0.9-1.2 mL 5M HCl时不受影响。因此，应用1.0 mL 5M盐酸进行该程序。在较低的盐酸浓度下，ALM与溴的定量反应需要较长的时间(原位)，随着HCl体积的增加，吸收强度(图4)．
图4:溴酸盐-溴化物混合物对甲基橙(5 μg mL－13 μg mL－1)，以5 M HCL的固定量。
溴酸盐-溴化物混合物体积:人们发现，1.3毫升溴就足以使其变色。染料作用50 ug/mL (图5)．
图5:时间对ALM (3.0 μg mL－1)和溴(原位)．
甲基橙体积:进行了初步实验，以确定溴的线性范围(原位)在最佳实验条件下使用甲基橙。实验用1.0 mL 5M盐酸和1.3 mL溴酸溴化物混合物进行。10 μg .mL时，吸光度在1.3处呈线性下降－150 μg .mL, 2 mL－1甲基橙。
反应时间:ALM和原位在室温下(25±5℃)20分钟内完成溴的反应。第二步未反应的溴与甲基橙的反应时间跨度为2 ~ 5分钟，吸光度最大。25分钟LD乐动体育官网或20分钟的接触时间不是关键，在该试验中任何延迟到30.0分钟对吸光度没有影响。用该方法测得的颜色即使在反应产物存在的情况下也保持了两个小时Scheeme 1．
方案1:提出了该方法的反应机理。
不同物质量的推荐酸的影响:采用不同物质量的酸(1M、2M、3M、4M、5M、6M)，研究了不同物质量的盐酸对ALM吸光度的影响。研究发现，增加酸的量浓度，ALM的吸光度性能在4 m时成比例增加。因此，为了获得更精确的读数，以5M为最佳体积进行进一步的实验。
溶解溶剂:已经测试了不同的稀释溶剂;水，甲醇，乙醇和乙腈。水被认为是最合适的稀释溶剂。
测定了ALM和的化学计量原位溴:ALM和的摩尔比原位溴的检测采用连续变化法，也称为约伯法[8］．该程序显示溴和ALM的比例为1:1。从图中可以明显看出ALM和KBrO的结合摩尔比3.是1:1。
建议检测方法的验证:通过实验室研究来验证分析测定法的有效性，以证明该测定法的性能特征符合预期分析应用的要求[9］．
范围和线性度:线性被定义为其引出测试结果的能力与药物浓度成正比。在优化条件下，通过对8个浓度的ALM进行分析，取每个浓度的3次测定值的平均值，绘制吸光度随浓度的变化曲线，构建被测药物的标准校准图，然后用最小二乘法计算回归方程，对检测结果进行统计学处理[10］．在这项工作中，研究了该被引用药物的浓度范围为3.0 - 17.0 μg/mL，并在该范围内进行了整套验证实验，以确保所建议的测定方法的有效性(表1)．
| 参数 | 价值 |
|---|---|
| λ马克斯,纳米 | 509 |
| 啤酒法律限(μg mL)－1） | 0.8 - 3.0 |
| LOD (μg mL－1） | 0.041 |
| LOQ (μg mL－1） | 0.125 |
| 斜率(b) | 0.2247 |
| 拦截(a) | 0.0347 |
| 相关系数(r) | 0.9998 |
| 相关系数(r2） | 0.9997 |
| 截距标准差(Sa) | 0.00281 |
| 残差标准差(Sy.x) | 0.00317 |
LOD:检测极限。LOQ:定量限度。
表1。溴量法分析所研究药物的分析参数。
精度和精密度:表2结果表明，该方法与实测值吻合较好，具有较好的精度。采用3个浓度，每个浓度重复6次，评估日内和日间精密度。计算出的相对标准偏差值低于2%，这是非常小的，表明所提方法具有良好的重复性和可靠性(表3)．
| 样品没有。 | Almotriptan | ||
|---|---|---|---|
| 取(µg mL－1） | Found*(µg mL－1） | %的复苏 | |
| 1 | 1．0 | 0.990 | 99.0 |
| 2 | 1．2 | 1.189 | 99.1 |
| 3. | 1．4 | 1.381 | 98.7 |
| 4 | 2.1 | 2.075 | 98.8 |
| 5 | 2．3 | 2.288 | 99.5 |
| 6 | 3．0 | 3．0 | One hundred. |
| 的意思是 | 99.20 | ||
| SD | 0.49 | ||
| 标准偏差 | 0.49 | ||
*三次重复测量的平均值。SD:标准偏差。RSD:相对标准偏差。
表2。对所提溴量法准确度的评价。
| 参数 | 阿莫曲坦(发现百分比)* | |||
|---|---|---|---|---|
| 取(µg mL－1） | 1．2 | 2．3 | 3．0 | |
| 盘中的分析显示 | 1 | 99.50 | 100.00 | 100.00 |
| 2 | 100.00 | 99.00 | 99.20 | |
| 3. | 99.50 | 98.80 | 99.70 | |
| 的意思是 | 99.70 | 99.30 | 99.60 | |
| SD | 0.30 | 0.64 | 0.40 | |
| 标准偏差 | 0.30 | 0.64 | 0.40 | |
| Inter-day 分析 |
1 | 99.00 | 100.00 | 100.00 |
| 2 | 100.00 | 99 | 99.6 | |
| 3. | 99.3 | 99.5 | 99 | |
| 的意思是 | 99.4 | 99.5 | 99.5 | |
| SD | 0．5 | 0．5 | 0．5 | |
| 标准偏差 | 0．5 | 0．5 | 0．5 | |
*三次测定的平均值。
表3。溴量法的日内和日间精度评价。
检测限(LOD)和定量限(LOQ):根据ICH Q2建议，通过以下公式计算:-
LOD = 3.3 × Sa /b, LOQ = 10 × Sa /b， (表1) [11-13］．
所建议测定方法的稳健性:对酸的体积(1±0.1 mL)、溴酸盐-溴化物混合物的体积(1.3±0.2)、染料的体积(2±0.2 mL)和染料加入前的时间(20±5 min)等实验因素的微小变化进行了检验。在这些实验中，改变一个实验参数，保持其他参数不变，每次计算回收率。所获得的回收率和标准偏差表明，这些变量中的任何一个的微小变化都不会显著影响所提出的程序的结果(表4)．
| 药品剂型 | %回收率±SD一个 | t值b | ||
|---|---|---|---|---|
| 该方法 | 报道的方法 | f值b | ||
| Almotrip的强项®12.5毫克 | 98.1±0.2 | 98.0±0.1 | 1．4 | 4.0 |
一个三种决定的平均值。
b95%置信限下的表值为t=2.306, F=6.338
表4。所提出的方法与已报道的方法在其药物剂型中测定ALM的比较。
应用于药物制剂:所得结果已与报道的方法进行比较，使用学生t检验和方差比f检验在95%置信水平。两种方法所得结果无显著差异(表5)．这一发现表明，在其药物制剂中检测所引用药物具有较高的准确性和精密度[14-16］．
| 剂型号 | Almotrip的强项®12.5毫克 |
|---|---|
| 标签索赔百分比 | |
| 1 | 98.30 |
| 2 | 98.60 |
| 3. | 99.50 |
| 4 | 98.50 |
| 5 | 98.00 |
| 6 | 99.50 |
| 7 | 97.80 |
| 8 | 98.50 |
| 9 | 98.50 |
| 10 | 98.20 |
| 的意思是 | 98.54 |
| SD | 0.56 |
| 标准偏差 | 0.57 |
| 验收值(AV) | 1.34 |
| Max。允许AV (L1) | 15.00 |
接受值[17]= 2.4 × SD。
表5所示。采用该方法对ALM片进行含量均匀性检测的结果。
含量均匀性测定:10.0片的含量测定方法与苹果酸阿莫曲坦含量测定方法相同。已使用美国药典指南进行含量均匀性测试[乐动KENO快乐彩17-19］．已计算验收值(AV)，发现AV小于最大允许验收值(L1)。
结论
本文采用分光光度法测定苹果酸阿莫曲坦纯片和片剂的含量原位生成溴为氧化剂，甲基橙为显色剂。根据ICH指南进行检测。乐动KENO快乐彩建议的测定可在室温下进行。因此，该方法对于药品中被引用药物的质量控制和常规分析非常有用，因为在商业配方中没有可能发现的辅料的干扰。
参考文献
- 斯威特曼，马丁戴尔，P。“完整的药物参考资料”。2007年:第32版;医药出版社:伦敦，英国，电子版。
- 张志强，李志强，张志强，等。高灵敏度荧光光谱法测定两种抗偏头痛药物药物在药片和生物液中应用于含量均匀性测试。《肛交方法》2014;6(8): 2621 - 7。
- Ramzia IE, Nashwah GM, Heba AN。荧光法和比色法测定一些抗偏头痛药物。J Chem Pharm Res. 2011;3:304-14。
- 普拉萨德UV，巴布MS, Ramu BK.苹果酸阿莫曲坦的可见分光光度法分析。《国际科学技术研究》2012;1(5): 86 - 91。
- 孙妮莎A，桑德尔b。新的简单紫外分光光度法估计苹果酸阿莫曲坦在散装和药品剂型。化学学报，2010;3(1): 142 - 4。
- 利用醌类显色剂定量测定苹果酸阿莫曲坦的新可见分光光度法的发展。化学科学学报，2012;1(2): 297 - 302。
- 普拉萨德UV，巴布MS, Ramu BK.新可见分光光度法定量测定配方中有效药物成分苹果酸阿莫曲坦。Int J Drug Dev & res 2012;4(2): 369 - 74。
- Satyanarayan KG, Khadabadi S. Almotriptan malat方法开发使用官方溶解介质。药学与药学杂志2015;4(6): 1525 - 33所示
- Lavudu P, Rani AP, Sekaran CB。高效液相色谱法测定苹果酸阿莫曲坦块状和片剂剂型含量的建立和验证。发展。2015;5(2): 459 - 66。
- 苏妮瑟A，夏玛b。建立了高效液相色谱法测定苹果酸阿莫曲坦制剂含量的方法。中国化学学会杂志。2010;57(5): 1067 - 70。
- El-Bagary RI, Mohammed NG, Nasr HA。两种色谱法测定一些抗偏头痛药物的含量。分析化学见解。2012;13。
- 李志强，李志强，李志强，等。散装和片剂苹果酸阿莫曲坦的高效液相色谱分析。先进医药简报。2013;3(1): 183。
- 杨晓明，杨晓明。HPTLC法测定苹果酸阿莫曲坦片剂含量的研究。印度药学杂志。2010;72(5): 629。
- El-Didamony AM, Erfan EA.溴化剂氧化反应光度法测定卡托普利。分子与生物分子光谱。2010;75(3): 1138 - 45。
- Agarwal SP, Walash MI, Blake MI.溴酸盐分光光度法测定磺胺类药物?溴化解决方案。药物科学杂志。1972;61(5): 779 - 81。
- IHT指南，分析程序的验证:文本和方法”。2005;Q2 (r1)， 2005。
- 药典，2012,TUS，美国药典。: XXVIIII及NF XXV;美国医药协会:美国华盛顿特区，2007年;电子版本。
- Chaudhari BG, Parmar HR。分光光度法测定片剂中草酸艾司西酞普兰的含量。国际药品质量保证杂志，2010;2(1): 9 - 12。
- Miller JN, Miller JC。《分析化学的统计和化学计量学》，第5版，皮尔逊教育，哈洛，英国，2005年。
