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汉衍生品的合成及其抗肿瘤的活动

*通讯作者:

Zheng-Bao Z、药物化学、医药科学、山西医科大学、太原030001,中国,电话:+ 86 - 13513649162;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

癌症是危害人类生命和健康最严重的疾病。目前,中国的传统医学显示良好的广泛应用前景肿瘤治疗。在这项研究中,十四小说bisbenzylisoquinoline衍生品设计和合成了Suzuki-Miyaura 5-bromotetrandrine反应与各种arylboronic酸。这些新的化合物的抗肿瘤活动对人类肺癌症细胞(A549)和小鼠白血病细胞(P388)被使用CCK-8方法评估。细胞凋亡和细胞周期通过流式细胞仪检测。这些化合物表现出比汉本身对A549细胞更好的活动。其中,化合物1表现出最重要的细胞毒性效应。初步的研究表明,化合物1的蚂蚁增殖效果是由它的诱导细胞凋亡和细胞周期逮捕的年代和G2阶段。14个新汉衍生物体外合成的抗肿瘤和测试活动。所有化合物显示较强的细胞毒性效应比母体化合物汉A549细胞株。这些发现将有助于未来的设计更有效的抗肿瘤药物肺癌症治疗。

关键字

汉;Suzuki-Miyaura耦合;A549;抗肿瘤活性;细胞凋亡;细胞周期

介绍

癌症是危害人类生命和健康最严重的疾病。目前,大多数抗肿瘤药物表现出各种不良的副作用,包括免疫抑制(1,2]。因此,寻找新的抗肿瘤药物和减少副作用和治疗方法改善的生活质量对病人长期以来一直是医学研究中相当兴趣的话题。由于它的丰富的资源,低成本和低副作用的发生率,传统的中国人医学具有良好的广泛应用前景肿瘤治疗。因此毫不奇怪,寻找新的抗肿瘤药物从天然产物和进一步优化他们的活动通过结构性修改已经成为一个完善的战略发展的新化疗药物。

汉(春节),bisbenzylisoquinoline (BBIQ)生物碱分离的根源野生抚育美国摩尔,已被证明具有多种药理作用,包括抗高血压和心血管系统(heart-protective3,4),anti-silicosis anti-pulmonary高血压在呼吸系统5,6在消化[],以及活动7,8)和免疫系统(9,10),等春节的抗肿瘤效果,尤其被广泛报道(11- - - - - -14]。研究表明,其抗肿瘤机制包括直接细胞毒性,诱导细胞凋亡,耐药性的逆转,正常组织辐射防护,anti-distant转移和抗血管生成15,16]。其中,诱导细胞凋亡春节的各种报道肿瘤细胞,包括人类白血病细胞,肺癌症细胞、肝癌症结肠细胞,癌症细胞淋巴瘤细胞,人类乳房癌症细胞等。17- - - - - -20.]。

最近的研究表明,在汉的c - 5位置替换可以提高其抗肿瘤活性(21,22]。在这项研究中,首次derivatized汉在c - 5位置由溴化低温度和结果5-bromotetrandrine作为一个共同的中间合成的一系列新汉衍生品通过Suzuki-Miyaura交叉耦合反应。新合成的生物活性汉使用A549和P388细胞衍生品进行评估。化合物1的抗肿瘤机制也是通过流式细胞术进行初步的研究。

实验

材料

熔点测定在数显显微熔点测定仪(x 4、北京科技仪器有限公司)。¹H核磁共振和¹³C核磁共振光谱被记录在力量- 400或力量- 600核磁共振光谱仪与四甲基硅烷(TMS)作为内部标准和CDCl₃或DMSO-d₆作为溶剂。质进行水域ZQ 2000仪器。列色谱法进行硅胶(200 - 300目,青岛海洋化工工厂,中国)。反应的进步被薄层监控色谱法(硅胶GF254、青岛海洋化工工厂,中国)与可视化紫外线照射下(ZF-I、上海气唐电子有限公司有限公司)在254海里。大多数试剂购买从商业来源和使用前未经纯化。P388细胞A549细胞上海药物学研究所提供的是中国科学院。

中间产品的一般程序

汉(3.00克,4.82更易)溶解在三氟乙酸和水的混合物(30毫升,2:1)。由此产生的混合物冷却到-15°C和溴在醋酸溶液(6.0 5.0 mL, 1.2 mol / L,更易)添加了明智的下降。由此产生的混合物搅拌在-15°C 4.5 h。反应就熄了的冰水(50毫升)和pH值调整与水氢氧化铵。10。由此产生的混合物提取与以(2×100毫升)和合并后的有机层是用盐水洗净(3×30毫升),干过无水硫酸钠和集中在减少压力。残留是结晶从无水乙醚(200毫升)和晶体受到列色谱法(dichloromethane-methanol 45:1, v / v)负担5-bromotetrandrine(3.15克,4.50更易,93%)。

一般春节衍生物的合成过程

解决5-bromotetrandrine(70毫克,0.10更易)在甲苯和水(25毫升,5:1,v / v)添加碳酸钠溶液(5毫升,1 M)和混合脱气超声在室温下30分钟。在氮气氛下,Pd(产后大出血₃)₄0.0300(34.6毫克,更易与),TBAB(64.4毫克,0.200更易)和arylboronic酸衍生物(0.200更易)被添加到解决方案。混合物加热在90°C 24 h,冷却到室温和淬火的冰水(5毫升)。乙酸乙酯的混合物提取(2×15毫升)和合并后的有机层与饱和盐水洗(3×30毫升),干过无水硫酸钠和集中在减少压力。产品被制备薄层分离色谱法淋洗与dichloromethane-methanol (20:1, v / v)。

表征化合物的数据

汉

白色粉末;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ7.34 (dd, J = 8.2, 2.2赫兹,1 h), 7.14 (dd, J = 8.1, 2.6赫兹,1 h), 6.89 (d J = 8.9赫兹,1 h), 6.87(年代,1 h), 6.80 (dd, J = 8.3, 2.6赫兹,1 h), 6.54 (d J = 1.8赫兹,1 h), 6.51(年代,1 h), 6.30 (dd, J = 7.3, 3.1赫兹,2 h), 5.99(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.88 (dd, J = 10.8, 5.5赫兹,1 h), 3.75 (s, 4 h), 3.56 - 3.48 (m, 1 h), 3.47 - 3.40 (m, 1 h), 3.37(年代,3 h), 3.26 (dd, J = 12.2, 5.3赫兹,1 h), 3.18(年代,3 h), 2.98 - 2.85 (m, 4 h), 2.82 - 2.77 (m, 1 h), 2.76 - 2.68 (m, 2 h), 2.62(年代,3 h), 2.52 (d J = 14.0赫兹,1 h), 2.47 - 2.40 (m, 2 h), 2.34(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ:153.32,150.95,148.92,148.16,148.04,146.60,143.35,137.41,134.83,134.57,132.28,129.75,127.67,127.66,127.55,122.49,122.38,121.52,121.46,119.76,115.83,112.25,111.12,105.33,63.44,61.00,59.82,55.68,55.37,55.32,44.85,43.68,42.24,41.88,41.58,37.68,24.91,21.54。质m / z:623.5 (M + H)⁺计算值(C₃₈H₄₂N₂O₆):m / z:622.3。

5-Bromotetrandrine

白色粉末;收益率:93%;一下。141.8 - -143.5°C(点燃。23142.3 - -144.1°C);¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ7.36 (dd, J = 8.1, 1.6赫兹,1 h), 7.16 (dd, J = 8.1, 2.2赫兹,1 h), 6.87 (d J = 6.5赫兹,2 h), 6.80 (dd, J = 8.3, 2.4赫兹,1 h), 6.54(年代,1 h), 6.51(年代,1 h), 6.30 (dd, J = 8.3, 1.9赫兹,1 h), 6.04(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.79 (dd, J = 13.1, 4.9赫兹,1 h), 3.74(年代,3 h), 3.54 (d J = 11.0赫兹,2 h), 3.39 (s, 4 h), 3.23(年代,1 h), 3.21(年代,3 h), 3.01 (s, 4 h), 2.82 (t, J = 11.8赫兹,2 h), 2.71(年代,5 h), 2.48 (d J = 12.6赫兹,1 h), 2.31(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz CDCl₃)δ153.71,149.25,148.65,148.23,147.71,147.04,143.27,142.72,134.83,134.25,132.56,130.05,128.02,127.99,127.87,127.72,122.75,121.92,121.88,120.24,116.08,112.57,112.10,111.41,63.67,61.49,60.40,60.29,56.03,55.37,45.05,43.61,42.48,42.02,41.32,37.73,25.17,22.60;质m / z:701.3 (M + H)⁺计算值(C₃₈H₄₁BrN₂O₆):m / z:700.4。

(5)- 3-Quinolinyl汉(1)

黄色粉末;收益率:88%;一下。197.5 - -199.3°C;¹H核磁共振(400 MHz, CDCl₃)δ8.89 - 8.70 (m, 1 h), 8.15 (d J = 8.4赫兹,1 h), 8.11 - 7.98 (m, 1 h), 7.84 (d J = 8.0赫兹,1 h), 7.77 - 7.70 (m, 1 h), 7.57 (t, J = 7.5赫兹,1 h), 7.38 (dd, J = 8.2, 2.0赫兹,1 h), 7.17 (dd, J = 8.2, 2.5赫兹,1 h), 6.96 - 6.81 (m, 3 h), 6.58 (s, 2小时),6.35 (d J = 7.1赫兹,1 h), 6.07(年代,1 h), 3.99 - 3.95 (m, 1 h), 3.93(年代,3 h), 3.91 - 3.86 (m, 1 h), 3.48(年代,3 h), 3.46(年代,3 h), 3.44 - 3.37 (m, 2 h), 3.33 (dd, J = 12.0, 5.5赫兹,1 h), 3.27(年代,3 h), 3.10 - 2.89 (m, 3 h), 2.87 - 2.73 (m, 4 h), 2.67(年代,3 h), 2.67 - 2.59 (m, 2 h), 2.33(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ153.86,152.34,149.73,149.55,148.57,148.49,147.24,147.02,143.68,142.07,136.70,135.17,134.62,132.74,130.31,130.19,129.44,129.29,128.32,128.13,127.97,126.81,126.64,125.67,122.96,122.16,122.12,120.47,120.28,116.11,112.66,111.61,105.85,63.92,61.89,61.58,60.85,60.38,56.23,55.86,50.77,45.21,42.64,37.91,29.80,25.38,21.80。质m / z:750.5 (M + H)⁺计算值(C₄₇H₄₇N₃O₆):m / z:749.6。

(5)- 5-Indolyl汉(2)

白色粉末;收益率:92%;一下。189.7 - -191.3°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ8.75 - 8.64 (m, 1 h), 7.45 - 7.40 (m, 2 h), 7.38 (dd, J = 8.2, 1.8赫兹,1 h), 7.22(年代,1 h), 7.14 (dd, J = 8.2, 2.4赫兹,1 h), 7.03 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.95 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.90 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.83 (dd, J = 8.3, 2.4赫兹,1 h), 6.59(年代,1 h), 6.57(年代,1 h), 6.55 - 6.50 (m, 1 h), 6.33 (dd, J = 8.3, 2.0赫兹,1 h), 6.07(年代,1 h), 3.92 (s, 4 h), 3.61 (dd, J = 15.8, 10.7赫兹,2 h), 3.47(年代,3 h), 3.46(年代,1 h), 3.39(年代,3 h), 3.24(年代,3 h), 3.14 - 3.02 (m, 4 h), 2.91 (dd, J = 14.8, 5.8赫兹,1 h), 2.85 (d J = 11.8赫兹,1 h), 2.83 - 2.76 (m, 3 h), 2.74(年代,3 h), 2.59(年代,1 h), 2.46(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ153.80,150.30,149.46,148.91,147.72,146.55,143.88,142.18,135.04,133.74,132.52,131.21,130.38,127.86,127.77,126.82,124.78,124.74,123.89,123.74,123.66,122.06,122.00,121.78,121.54,120.47,115.38,112.46,111.71,111.03,110.89,102.19,63.79,60.64,60.25,56.00,55.70,44.83,43.46,41.86,41.68,37.96,29.62,29.28,24.25,22.78。质m / z:728.4 (M + H)⁺计算值(C₄₆H₄₇N₃O₆):m / z:727.6。

(5)- 4-Isoquinolinyl汉(3)

灰色粉;收益率:65%;一下。147.6 - -149.5°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ9.27(年代,1 h), 8.30(年代,1 h), 8.04 (d J = 8.1赫兹,1 h), 7.68 (t, J = 7.3赫兹,1 h), 7.63 (t, J = 7.3赫兹,1 h), 7.48 (d J = 8.3赫兹,1 h), 7.44 (dd, J = 8.4, 1.9赫兹,1 h), 7.19 (dd, J = 8.2, 2.4赫兹,1 h), 7.13 (dd, J = 8.2, 2.2赫兹,1 h), 6.90 (d J = 8.1赫兹,1 h), 6.86 (dd, J = 8.3, 2.4赫兹,1 h), 6.64(年代,1 h), 6.54(年代,1 h), 6.38 - 6.35 (m, 1 h), 6.10(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.92(年代,1 h), 3.76 (s, 2小时),3.54(年代,3 h), 3.45(年代,1 h), 3.35(年代,3 h), 3.29(年代,3 h), 3.19(年代,1 h), 3.09 - 2.99 (m, 4 h), 2.88 (t, J = 12.0赫兹,2 h), 2.85 (s, 4 h), 2.82(年代,1 h), 2.54(年代,1 h), 2.42(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ154.42,154.41,152.35,149.72,149.43,147.88,147.56,144.01,143.34,142.40,135.10,132.60,132.50,132.09,131.93,131.22,130.57,130.52,129.85,128.53,128.35,128.09,127.54,124.24,124.17,122.41,122.33,120.37,120.26,116.58,112.21,112.16,111.85,64.16,60.98,60.41,60.35,56.04,55.86,55.76,44.64,43.28,41.22,41.06,29.66,27.17,22.65。质m / z:750.3 (M + H)⁺计算值(C₄₇H₄₇N₃O₆):m / z:749.6。

(5)- 5-Isoquinolinyl汉(4)

黄色粉末;收益率:65%;一下。131.4 - -132.9°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ9.30(年代,1 h), 8.46 (d J = 5.6赫兹,1 h), 7.99 (d J = 8.1赫兹,1 h), 7.66 (t, J = 7.6赫兹,1 h), 7.49 (d J = 6.8赫兹,1 h), 7.41 (d J = 8.0赫兹,1 h), 7.29 (d J = 5.7赫兹,1 h), 7.17 (d J = 8.0赫兹,1 h), 6.95 (d J = 2.9赫兹,1 h), 6.88 - 6.83 (m, 2 h), 6.61(年代,1 h), 6.57(年代,1 h), 6.35 (d J = 7.9赫兹,1 h), 6.09(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.64(年代,1 h), 3.50(年代,3 h), 3.37 - 3.33 (m, 3 h), 3.31(年代,3 h), 3.27(年代,3 h), 3.12 - 3.05 (m, 2 h), 2.97 - 2.82 (m, 4 h), 2.76 - -2.70 (m, 6 h), 2.45(年代,1 h), 2.35(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ154.05,152.80,149.87,149.32,148.99,147.88,147.32,143.87,143.37,141.99,135.03,133.84,133.63,133.62,132.56,131.73,130.28,129.84,129.82,128.76,127.32,127.20,126.84,126.76,126.74,125.85,123.10,122.11,120.26,118.14,115.85,112.37,111.57,63.92,61.79,60.74,60.22,56.04,55.64,44.86,42.58,41.87,38.08,29.62,27.14,24.06,22.61。质m / z:750.4 (M + H)⁺计算值(C₄₇H₄₇N₃O₆):m / z:749.6。

(5)- 4-Carbamoylphenyl汉(5)

深灰色粉末;收益率:64%;一下。203.4 - -204.5°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ7.87 (d J = 3.5赫兹,2 h), 7.49 - 7.33 (m, 4 h), 7.16 (d J = 6.8赫兹,2 h), 6.89 (d J = 8.1赫兹,2 h), 6.84 (d J = 7.2赫兹,1 h), 6.59(年代,1 h), 6.55(年代,1 h), 6.34 (d J = 7.8赫兹,1 h), 6.07(年代,1 h), 3.94(年代,3 h), 3.75(年代,1 h), 3.61(年代,1 h), 3.47(年代,3 h), 3.43(年代,3 h), 3.25(年代,3 h), 3.07 (d J = 6.6赫兹,3 h), 2.93 (s, 2小时),2.87 - 2.80 (m, 2 h), 2.75(年代,5 h), 2.70 - 2.65 (m, 1 h), 2.51 (s, 2小时),2.39(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ169.12,153.92,150.88,149.38,148.94,144.72,143.73,142.45,142.01,132.65,132.54,132.08,130.87,130.39,130.24,130.12,128.77,127.34,123.39,123.21,122.80,122.66,122.17,122.13,120.62,120.26,119.68,115.70,112.25,112.08,111.58,63.84,60.72,60.45,60.24,56.00,55.63,55.54,44.75,41.94,41.67,36.49,29.62,27.12,22.61。质m / z:742.4 (M + H)⁺计算值(C₄₅H₄₇N₃O₇):m / z:741.6。

(5)- 8-Quinolinyl汉(6)

白色粉末;收益率:67%;一下。197.5 - -199.0°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ8.88 (d J = 2.7赫兹,1 h), 8.22 (dd, J = 8.2, 1.1赫兹,1 h), 7.87 (d J = 8.0赫兹,1 h), 7.59 (t, J = 7.6赫兹,1 h), 7.48 (d J = 6.8赫兹,1 h), 7.42 (dd, J = 8.2, 4.1赫兹,2 h), 7.17 (d J = 6.8赫兹,2 h), 6.91 (d J = 8.1赫兹,1 h), 6.85 (d J = 7.2赫兹,1 h), 6.63(年代,1 h), 6.58(年代,1 h), 6.34 (d J = 7.9赫兹,1 h), 6.09(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.79 - 3.65 (m, 3 h), 3.54(年代,3 h), 3.50(年代,1 h), 3.38 - 3.34 (m, 1 h), 3.32(年代,3 h), 3.26(年代,3 h), 3.23 - 3.07 (m, 4 h), 3.06 - 2.93 (m, 3 h), 2.90 - 2.85 (m, 2 h), 2.83(年代,3 h), 2.51(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ154.12,150.54,150.47,149.39,149.34,147.90,147.25,146.52,144.16,142.20,136.46,135.47,132.77,132.48,131.72,131.43,130.43,128.56,128.11,128.09,126.25,126.18,126.16,123.82,123.80,122.44,122.13,122.07,121.18,120.60,115.49,112.35,111.74,63.88,60.53,60.16,58.95,56.02,55.70,44.79,42.81,41.52,38.24,29.61,29.23,24.07,23.57。质m / z:750.3 (M + H)⁺计算值(C₄₇H₄₇N₃O₆):m / z:749.6。

(5)- 5-Methyl-2-thienyl汉(7)

灰色粉;收益率:62%;一下。151.5 - -152.9°C;¹H核磁共振(600 MHz, CDCl₃)δ7.38 (d J = 7.5赫兹,1 h), 7.14 (d J = 6.9赫兹,1 h), 7.08(年代,1 h), 6.88 (d J = 7.8赫兹,1 h), 6.82 (d J = 7.1赫兹,1 h), 6.73(年代,1 h), 6.69 (d J = 2.6赫兹,1 h), 6.57(年代,1 h), 6.53(年代,1 h), 6.33 (d J = 7.6赫兹,1 h), 6.04(年代,1 h), 3.93(年代,3 h), 3.73(年代,1 h), 3.56(年代,3 h), 3.44(年代,3 h), 3.39(年代,1 h), 3.34 - 3.29 (m, 1 h), 3.21(年代,3 h), 3.11 - 2.98 (m, 3 h), 2.94 - 2.77 (m, 5 h), 2.72 (s, 4 h), 2.65(年代,1 h), 2.62(年代,1 h), 2.50(年代,3 h), 2.37(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ153.97,149.41,148.99,147.70,147.51,143.79,141.97,140.28,133.63,132.53,130.35,128.53,128.41,128.31,127.74,126.85,124.98,123.43,123.41,123.40,122.45,122.16,122.09,120.38,115.60,112.28,111.65,111.57,63.89,61.03,60.16,58.96,56.05,55.65,44.81,43.15,41.83,41.77,38.15,29.65,24.09,22.64,15.26。质m / z:719.4 (M + H)⁺计算值(C₄₃H₄₆N₂O₆年代):m / z:718.6。

(5)- 3 4 5-Trimethoxyphenyl汉(8)

淡黄色粉末;收益率:90%;一下。144.3 - -145.8°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.48 (d J = 7.9赫兹,1 h), 7.10 (dd, J = 8.1, 1.7赫兹,1 h), 6.91 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.79 - 6.70 (m, 2 h), 6.68(年代,1 h), 6.50(年代,1 h), 6.38(年代,3 h), 5.95(年代,1 h), 3.81(年代,3 h), 3.76(年代,6 h), 3.69(年代,3 h), 3.62 (d J = 11.9赫兹,1 h), 3.46(年代,3 h), 3.38(年代,3 h), 3.36 - -3.26 (m, 4 h), 3.20 (dd, J = 12.2, 5.2赫兹,1 h), 3.14(年代,3 h), 2.95 - 2.63 (m, 7 h), 2.53(年代,3 h), 2.37 (d J = 13.2赫兹,1 h), 2.15(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ152.89,152.55,149.00,148.70,147.83,147.81,147.04,146.65,142.83,141.36,136.26,135.62,134.06,132.57,132.20,130.58,130.57,129.27,128.20,126.91,125.38,122.98,121.61,121.36,119.26,115.11,113.10,111.97,107.12,105.88,62.81,61.43,60.57,60.00,59.79,56.02,55.97,55.90,55.66,44.71,43.72,42.30,42.18,41.62,36.43,25.01,20.47。质m / z:789.6 (M + H)⁺计算值(C₄₇H₅₂N₂O₉):m / z:788.4。

(5)- 2-Methoxypyridin-3-yl汉(9)

黄色粉末;收益率:57%;一下。139.4 - -140.9°C;¹H核磁共振(400 MHz, CDCl₃)δ8.58(年代,1 h), 7.87 (d J = 6.6赫兹,1 h), 7.83 - 7.69 (m, 2 h), 7.66(年代,1 h), 7.56(年代,1 h), 7.40 - 7.32 (m, 1 h), 7.22(年代,1 h), 6.99 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.95(年代,1 h), 6.73 (t, J = 8.6赫兹,1 h), 6.44 (d J = 10.8赫兹,1 h), 4.32(年代,6 h), 4.24(年代,3 h), 3.87(年代,3 h), 3.79 (d J = 10.1赫兹,3 h), 3.69(年代,3 h), 3.62(年代,1 h), 3.45 - 3.26 (m, 3 h), 3.25 - 3.11 (m, 5 h), 3.05(年代,5 h), 2.70(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, CDCl₃)δ160.51,152.78,148.60,148.35,147.39,146.10,145.95,144.89,142.94,140.78,139.20,138.73,135.52,133.97,131.64,129.15,128.29,125.67,124.55,123.26,121.84,120.91,118.87,115.64,114.98,112.18,111.61,111.53,110.49,62.85,59.72,59.58,59.38,59.24,59.06,55.10,54.74,54.63,52.31,44.14,41.56,36.88,28.68,24.26。质m / z:730.6 (M + H)⁺计算值(C₄₄H₄₇N₃O₇):m / z:729.3。

(5)- 3 5-Dimethoxyphenyl汉(10)

淡黄色粉末;收益率:88%;一下。134.2 - -135.8°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.48 (d J = 8.1赫兹,1 h), 7.10 (dd, J = 7.9, 1.5赫兹,1 h), 6.91 (d J = 8.2赫兹,1 h), 6.77 - 6.69 (m, 2 h), 6.66(年代,1 h), 6.47(年代,1 h), 6.37 (d J = 8.5赫兹,3 h), 6.22(年代,1 h), 5.94(年代,1 h), 3.81(年代,3 h), 3.74(年代,6 h), 3.72 (d J = 3.0赫兹,1 h), 3.60 (d J = 9.9赫兹,1 h), 3.42(年代,3 h), 3.35 (s, 4 h), 3.32 (s, 2小时),3.23 - 3.17 (m, 1 h), 3.16(年代,3 h), 2.93 - 2.64 (m, 7 h), 2.53(年代,3 h), 2.37 (d J = 13.4赫兹,1 h), 2.13(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ160.22,160.08,155.38,152.90,148.99,148.51,147.71,147.20,146.67,143.48,142.86,141.42,138.70,135.63,134.07,132.61,130.58,129.24,128.20,126.57,125.49,123.01,121.63,121.38,119.21,115.10,113.11,111.92,107.43,98.62,62.77,61.44,60.57,59.85,55.78,55.64,55.17,54.92,44.69,43.50,42.21,42.15,41.56,36.33,25.09,20.20。质m / z:759.5 (M + H)⁺计算值(C₄₆H₅₀N₂O₈):m / z:758.4。

(5)- 6-methoxynaphthalen-2-yl汉(11)

白色粉末;收益率:92%;一下。186.4 - -188.1°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.83 (d J = 8.0赫兹,2 h), 7.62(年代,1 h), 7.48 (d J = 8.2赫兹,1 h), 7.34(年代,1 h), 7.24 (d J = 8.2赫兹,1 h), 7.16 (d J = 8.8赫兹,1 h), 7.11 (d J = 8.1赫兹,1 h), 6.91 (d J = 8.1赫兹,1 h), 6.77 - 6.71 (m, 2 h), 6.68(年代,1 h), 6.41(年代,1 h), 6.37 (d J = 8.4赫兹,1 h), 5.97(年代,1 h), 3.89(年代,3 h), 3.81(年代,3 h), 3.63 (d J = 9.9赫兹,1 h), 3.38 (d J = 5.3赫兹,3 h), 3.34(年代,7 h), 3.18 (s, 4 h), 2.93 - 2.62 (m, 7 h), 2.53(年代,3 h), 2.41 (d J = 13.4赫兹,1 h), 2.15(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ157.27,152.92,149.00,147.74,147.25,146.68,142.92,141.51,135.64,134.08,133.13,132.62,131.62,130.58,129.29,129.22,128.81,128.64,128.39,128.18,128.10,126.88,126.24,125.58,123.15,123.01,121.62,121.36,119.26,118.54,115.16,113.10,111.94,105.76,62.77,61.49,60.34,59.90,55.80,55.64,55.21,54.91,44.70,42.20,42.10,41.62,36.37,25.10,20.58。质m / z:779.5 (M + H)⁺计算值(C₄₉H₅₀N₂O₇):m / z:778.4。

(5)- 4-Methoxy-2-methylphenyl汉(12)

灰色绿色粉末;收益率:65%;一下。139.3 - -141.2°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.48 (d J = 7.9赫兹,1 h), 7.10 (d J = 5.4赫兹,1 h), 6.91 (d J = 8.1赫兹,2 h), 6.86(年代,1 h), 6.82 - 6.68 (m, 3 h), 6.65(年代,1 h), 6.41 - 6.34 (m, 2 h), 5.94 (d J = 6.8赫兹,1 h), 3.80 (s, 4 h), 3.76(年代,3 h), 3.59 (d J = 9.8赫兹,1 h), 3.34(年代,6 h), 3.30(年代,3 h), 3.29 (s, 2小时),3.19(年代,3 h), 3.17(年代,1 h), 2.94 - 2.82 (m, 2 h), 2.81 - 2.63 (m, 6 h), 2.52(年代,3 h), 2.40 (d J = 13.6赫兹,1 h), 2.12(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ158.64,153.29,149.41,149.02,148.10,147.72,147.40,147.06,143.25,142.00,141.92,137.67,136.14,134.46,133.01,130.98,128.95,128.48,127.30,126.15,125.97,123.37,122.02,121.78,119.37,115.50,115.38,113.55,112.35,111.44,63.25,61.82,60.48,60.26,56.17,56.05,55.33,55.28,45.13,42.67,42.45,42.28,36.67,29.43,25.58,20.34。质m / z:743.6 (M + H)⁺计算值(C₄₆H₅₀N₂O₇):m / z:742.4。

5 - (4 - (Methylthio)苯基)汉(13)

淡黄色粉末;收益率:93%;一下。157.1 - -158.5°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.47 (dd, J = 8.3, 2.1赫兹,1 h), 7.28 (d J = 8.8赫兹,2 h), 7.15 (br年代,1 h), 7.11 (br年代,1 h), 7.10 (dd, J = 8.2, 2.6赫兹,1 h), 6.91 (d J = 8.3赫兹,1 h), 6.75 (dd, J = 8.2, 1.8赫兹,1 h), 6.71 (dd, J = 8.3, 2.6赫兹,1 h), 6.66(年代,1 h), 6.39 (d J = 1.8赫兹,1 h), 6.36 (dd, J = 8.3, 2.1赫兹,1 h), 5.95(年代,1 h), 3.81(年代,3 h), 3.61 (d J = 10.4赫兹,1 h), 3.36(年代,3 h), 3.34(年代,3 h), 3.33 - 3.26 (m, 4 h), 3.22 - 3.18 (m, 1 h), 3.16(年代,3 h), 2.93 - 2.63 (m, 7 h), 2.53(年代,3 h), 2.50(年代,3 h), 2.38 (d J = 13.2赫兹,1 h), 2.13(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ152.90,148.97,148.70,147.68,147.25,146.67,142.87,141.45,136.37,135.58,134.05,132.96,132.58,130.54,130.37,128.61,128.21,128.15,126.70,125.60,125.43,122.97,121.57,121.37,121.31,119.26,119.21,115.14,113.09,111.96,62.76,61.44,60.32,59.84,55.73,55.65,44.70,43.54,42.18,42.10,41.57,36.34,25.06,20.53,14.55。质m / z:745.6 (M + H)⁺计算值(C₄₅H₄₈N₂O₆年代):m / z:744.3。

(5)- 5-Acetyl-2-thienyl汉(14)

黄棕色的粉末;收益率:89%;一下。223.4 - -224.9°C;¹H核磁共振(400 MHz, DMSO)δ7.92 (d J = 3.8赫兹,1 h), 7.47 (dd, J = 8.3, 2.0赫兹,1 h), 7.12 (d J = 3.8赫兹,1 h), 7.10 (dd, J = 8.2, 2.6赫兹,1 h), 6.92 (d J = 8.3赫兹,1 h), 6.76 (dd, J = 8.2, 1.8赫兹,1 h), 6.72 (dd, J = 8.3, 2.6赫兹,1 h), 6.67(年代,1 h), 6.37 (dd, J = 8.3, 2.0赫兹,2 h), 5.95(年代,1 h), 3.81(年代,3 h), 3.60 (d J = 10.2赫兹,1 h), 3.49(年代,3 h), 3.35(年代,3 h), 3.34 - 3.25 (m, 4 h), 3.19 (dd, J = 11.1, 4.1赫兹,1 h), 3.15(年代,3 h), 2.93 - 2.67 (m, 7 h), 2.55(年代,3 h), 2.52(年代,3 h), 2.36 (d J = 13.2赫兹,1 h), 2.14(年代,3 h)。¹³C核磁共振(101 MHz, DMSO)δ190.55,152.88,149.60,149.00,148.65,147.61,146.69,145.34,143.90,142.47,141.49,135.66,133.86,133.71,132.57,130.56,129.70,128.73,128.55,128.07,125.94,122.98,121.61,121.34,120.21,119.17,115.08,112.89,111.98,62.80,61.33,60.87,59.95,55.70,55.64,44.67,43.34,42.20,42.11,41.40,36.42,26.43,25.09,20.31。质m / z:747.5 (M + H)⁺计算值(C₄₄H₄₆N₂O₇年代):m / z:746.3。

生物评价

CCK-8化验

CCK-8化验测试的抑制活性进行了14个新汉衍生品对A549和P388细胞系。A549和P388细胞在DMEM培养基培养(美国HyClone)补充10%胎牛血清(美国Gibco), 100 U /毫升青霉素和链霉素80μg /毫升。

的细胞在对数生长阶段收获,用胰蛋白酶消化(0.25%)为单个细胞悬液,然后播种在96 -孔板的密度4.0×10吗⁴细胞/毫升和90μL /。播种后24小时,细胞处理系列化合物的浓度1来14分别,而积极的和空白对照组设置。随后,细胞孵化在37°C和5%的二氧化碳72 h。最后,10μL CCK-8被添加到每个盘子是进一步培养4 h。OD值为每个被解读的波长450 nm标决定细胞生存能力。每个实验进行了三次。细胞生存能力计算如下:

细胞凋亡检测

的细胞在对数生长阶段收获和播种6-well板密度为4.0×10⁴细胞/毫升。细胞密度达到80%后,化合物1被添加到每个与系列浓度(0、5、10和15μmol / L)和培养充分湿润吗大气在37°C公司为5%₂孵化后h。72年,细胞在PBS然后resuspended洗吗细胞被添加到绑定缓冲(100 x,μL) AnnexinV-PE(5μL)和7-AAD(10μL)。盘子被孵化在黑暗中在室温和流式细胞仪探测到在2 h。

细胞周期检测

在对数生长期细胞收获和播种6-well板密度为4.0×10⁴细胞/毫升。在细胞密度增加到80%,化合物1(0和10μmol / L)被添加到每个好,培养一个完全湿润大气在37°C和5%的二氧化碳72 h。孵化后,细胞在PBS和固定在冰75%乙醇洗一夜之间,然后在PBS去除乙醇洗。到resuspended细胞添加核糖核酸酶(2.5μL, 10毫克/毫升)和混合是在37°C的环境在黑暗中30分钟,然后用PI染色和流式细胞仪检查在2 h。

统计分析

多组比较的方式是由单向方差分析(方差分析)测试由Student-Newman-Keuls事后对比测试。所有测试的统计学意义P < 0.05。

结果与讨论

化学

14个新汉衍生品,我们所知,还没有在文献中报道,合成使用Suzuki-Miyaura交叉耦合反应(方案1)。新化合物的特点是女士,¹H核磁共振和¹³C核磁共振光谱学。

生物评价

抗肿瘤活动CCK-8方法:汉衍生品的抗肿瘤活动进行评估对P388和A549细胞株CCK-8化验使用汉作为积极的控制。结果进行了总结表1。

表1:产量和IC50值1 - 14对P388和A549细胞株的生长。

所有化合物(包括汉)表现出(IC强有力的抗肿瘤活性₅₀< 10μM)对P388细胞,和化合物抗肿瘤活性1,6和7明显高于铅化合物的汉。在这些化合物中,喹啉衍生物1和6有更好的比异喹啉衍生物生物活性3和4,表明氮原子的位置的重要性。的三个含硫化合物(7、13和14),噻吩导数7表现出增强的活动。关于对A549细胞活性,化合物1- - - - - -14都比汉发现更活跃。在P388细胞的情况下,喹啉衍生物1(集成电路₅₀= 2.07μM)对A549细胞最活跃。异喹啉衍生物3(集成电路₅₀= 2.07μM)的活动同样高的1和比regioisomer更活跃4(集成电路₅₀= 13.74μM)。吲哚的衍生物2(集成电路₅₀= 2.95μM)对A549细胞也展示了令人印象深刻的活动。与他们的活动对P388细胞,所有三个含硫化合物(7,13和14)被发现比汉对A549细胞更活跃。

化合物1诱发细胞凋亡在A549细胞:进一步了解化合物的抗肿瘤作用机制1的膜联蛋白V-PE / 7-AAD细胞凋亡检测工具被用来确定化合物1抑制肿瘤细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡或坏死。所示图1、复合1表现出明显的诱导细胞凋亡对A549细胞在某种程度上,表现出浓度依赖性。Propidium碘(PI)染色法是用于确定化合物的影响1在细胞凋亡A549细胞。所示图2,当A549细胞治疗10μM溶液的化合物1,G1期的内容细胞周期从53.2%降低到44.9%,但年代的内容(20.8%比23.9%)和G2(26.0%比31.2%)阶段的细胞周期显著升高,表明复合1有一定的影响细胞周期逮捕A549细胞在S期和G2阶段。

结论

总之,14个新汉为抗肿瘤衍生物合成和测试活动在体外。这些化合物的抗肿瘤活动对P388和A549细胞株用CCK-8化验测定。所有化合物显示较强的细胞毒性效应比母体化合物汉A549细胞株。相比于汉,化合物1和3表现出一个大于10倍增强对A549 anti-proliferative活动细胞与集成电路₅₀μM值约为2。此外,这项工作的结果表明,化合物1诱导的细胞凋亡A549的细胞被挡住了细胞周期浓度的方式,周期是年代和G2阶段。

尽管仍有足够的证据来讨论化合物的结构与活性关系,进一步的结构修饰和首选的化合物的活性筛选可能揭示汉衍生物的构效关系的抗肿瘤活性。因此有必要进一步探索首选化合物的抗肿瘤活性机制在分子和基因水平。

的利益冲突

本文作者确认内容没有利益冲突。

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金资助(NO.31700306)。

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