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新验证光谱光度测量的方法估计Clobazam纯和配方

乌玛Maheswar K¹Rami Reddy青年志愿²和Rambabu C^1*

¹生物学系、基础科学研究所大不里士大学大不里士,伊朗

²S.V.大学化学系Tirupati,美联社,印度

*通信:: Rambabu C大学化学系,科学,Acharya Nagarjuna大学Nagarjunanagar,尔,美联社,印度,电话:966333585;电子邮件: (电子邮件保护)

收到:2016年10月16日;接受:2016年11月5日;发表:2016年11月12日

引用:乌玛Maheswar K Rami Reddy青年志愿Rambabu c新验证光谱光度测量的方法估计Clobazam纯和配方。肛门化学印第安纳j . 2016; 16 (15): 110。

文摘

三个简单、灵敏、经济的光度测定方法开发和验证clobazam制药配方。方法是基于彩色clobazam之间复杂的形成和显色试剂如茜素红S,氯冉酸和Woolfast蓝色黑色。彩色的复杂的吸光度测量的最大波长使用试剂空白。这些方法显示在不同浓度线性范围(6.0μg /毫升21.0μg / mL, 24.0μg /毫升84.0μg /毫升28.0和8.0μg /毫升μg /毫升)相关系数为0.9990,0.9996和0.9992分别在可接受的范围内按照我的指导方针。乐动KENO快乐彩统计分析证明该方法重现性好、选择性的估计Clobazam散装药品和制药配方。

关键字

Clobazam;分光光度法;茜素红S;氯冉酸和Woolfast蓝色黑色;验证

介绍

Clobazam(卡马西平)是1,5-benzodiazepine,抗焦虑和抗惊厥的,用于治疗各种癫痫发作类型和癫痫(1]。卡马西平化学被称为7-chloro-1-methyl-5-phenyl-1 5-benzodiazepine-2 4 (3 h-dione)和它的分子结构是由图1。卡马西平可以以口头形式根据品牌Frisium, Urbanol Onfi。

analytical-chemistry-Chemical-Structure-Clobazam

图1:Clobazam的化学结构。

在文献调查,发现很少有像高效液相色谱方法2- - - - - -4),紫外和可见分光光度法(5,6)是迄今为止报道的决心clobazam在不同生物体液(7,8和制药配方9]随着一些同时测定方法10,11]。我们现在报告三个新的、简单和经济的分光光度测定方法的药物。

实验

仪表

中西卡2301双光束分光光度计(日立)是用来进行光谱分析和数据记录由日立软件。

化学药品和试剂:制定平板电脑从一家当地的药店,购买Clobazam的参考标准是由Reyan分公司提供。所有的试剂使用像氯冉酸,ARS和WFBBL分析品位和购买从默克公司专业分公司,孟买。

准备工作的标准药物解决方案

标准的卡马西平(100毫克)是重准确,转移至容量瓶(100毫升)。正常溶解和稀释到马克与甲醇获得最终的浓度1000μg /毫升(原液)。10毫升股票解决我与甲醇稀释至100毫升(原液II, 200μg /毫升)和最终的解决方案是作为工作标准的解决方案。

样品溶液的制备

细碎的小平板粉的量相当于100毫克的卡马西平(Frisium-20毫克)准确称重成校准瓶100毫升、60.0毫升的甲醇添加和动摇了20分钟。然后,体积是由马克与水,混合好,过滤使用Whatmann 42-filter纸。第10.0毫升的一部分滤液被丢弃和合适的整除的后续部分(1000μg毫升¹卡马西平)是获得合适的浓度稀释适当提出的分析方法

方法开发

优化方法开发条件确定通过不同的路径通过改变浓度等参数的标准之一,试剂的体积,颜色开发并保持其他温度和时间常数,和优化的过程。

ARS方法(M1):在125毫升分液漏斗整除的药物溶液,6.0毫升1 n HCl溶液和2.0毫升的0.2% ARS解决方案被先后和水相的体积是15.0毫升双蒸馏水,然后10.0毫升氯仿添加的内容彻底动摇了2分钟。两个阶段被允许单独收集和氯仿层及其吸收对试剂空白扫描从400纳米到800纳米和最大吸光度被发现在502海里。发色团的光谱扫描解决方案提出了(图2)。

图2:扫描spectrum-ARS方法(M1)。

氯冉酸方法(M2):整除的标准药物解决方案在一个10.0毫升刻度管,2.0毫升的0.1% methonolic解决方案添加氯冉酸和5分钟然后保持原状的内容是由甲醇。最终解决方案与试剂空白的吸光度扫描400纳米至800纳米和最大吸光度被发现在550海里。扫描光谱如下所示(图3)。

analytical-chemistry-Scanning-spectrum-Chloranilic

图3:扫描spectrum-Chloranilic酸方法(M2)。

WFBBL方法(M3):中的整除的药物溶液125毫升分液漏斗与6.0毫升1 n盐酸酸化,它添加2.0毫升的染料溶液和体积为15.0毫升蒸馏水和10.0毫升氯仿是添加的内容也动摇了2分钟。然后两个阶段被允许定居和有机层的吸光度扫描一个类似试剂空白从400纳米到800纳米和最大吸光度是发现在487海里。下面是记录扫描光谱(图4)。

analytical-chemistry-Scanning-spectrum-WFBBL

图4:扫描spectrum-WFBBL方法(M3)。

方法验证

提出的三个光谱光度测量的方法验证通过确定的线性范围,精度、准确性、强度和灵敏度根据我的指导方针。乐动KENO快乐彩光学参数的方法给出了表1和观察到的吸光度发达色彩中给出了在线性范围内表2。校准曲线所示(图5)。

analytical-chemistry-Calibration-curves-proposed

图5:校准曲线的方法。

S.No。	光学参数	ARS方法(M1)	CA方法(平方米)	WFBBL方法(M3)
1。	波长最大值	502海里	550海里	487海里
2。	摩尔吸光系数(摩尔¹厘米¹)	1.1�10⁴	2.6�10³	1.0�10⁴
3所示。	Sandell的敏感性(μg厘米¹)	2.732�10²	1.121�10³	2.979�10²
4所示。	线性范围(μg /毫升)	6.0 - -21.0	24.0 - -84.0	8.0 - -28.0

表1:测定BKB制药配方(n = 5, t_0.05,4= 2.78)。

S.No。	ARS方法(M1)		CA方法(平方米)		WFBBL方法(M3)
S.No。	浓度 (μg /毫升)	吸光度	浓度 (μg /毫升)	吸光度	浓度 (μg /毫升)	吸光度
1。	6.0	0.248	24	0.226	8.0	0.264
2。	9.0	0.352	36	0.318	12.0	0.397
3所示。	12.0	0.462	48	0.426	16.0	0.534
4所示。	15.0	0.551	60	0.534	20.0	0.672
5。	18.0	0.667	72年	0.643	24.0	0.786
6。	21.0	0.789	84年	0.735	28.0	0.894
坡:0.03			0.008		0.032
拦截:0.013			0.005		0.0079
答:0.999			0.9996		0.9992

表2:线性方法的结果。

纯药物浓度在线性范围内的解决方案进行了分析和重复六次在相同和不同天,提出方法的精度评估。两个内部的相对标准偏差和国米天分析显示,所有提出的三个方法精度高。给出了细节表3。

美国没有。	盘中精度			国米天精密
方法	农业研究所	CA	WFBBL	农业研究所	CA	WFBBL
浓度	15.0μg /毫升	48.0μg /毫升	16.0μg /毫升	15.0μg /毫升	48.0μg /毫升	16.0μg /毫升
1	0.549	0.428	0.537	0.558	0.432	0.528
2	0.548	0.425	0.536	0.555	0.431	0.521
3	0.552	0.427	0.533	0.557	0.429	0.524
4	0.550	0.423	0.535	0.554	0.43	0.526
5	0.546	0.422	0.532	0.556	0.433	0.525
6	0.547	0.424	0.531	0.553	0.436	0.527
%相对标准偏差	0.39	0.54	0.44	0.33	0.57	0.47

表3:精度提出的设计方法的研究结果。

通过进行恢复测试已知数量的药物添加到pre-analyzed样本,提出的方法是检查的准确性和平均采收率可接受的范围内(98.0 - -102.0)确保了提出的方法是准确的。ARS方法的比例平均回收率为100.96,与CA和WFBBL方法分别为100.70和100.63,表明这些方法不够准确采用clobazam的常规分析。亲密的结果显示出相当不错的100%精度的方法。这项研究的结果发表在表4,

方法	浓度在μg /毫升	量中发现μg /毫升	%的复苏	平均回收率
农业研究所方法	9.0	9.11	101.13	100.96
	12.0	12.11	100.93
	15.0	15.12	100.84
CA 方法	36.0	36.37	101.04	100.70
	48.0	48.22	100.46
	60.0	60.35	100.60
WFBBL 方法	12.0	12.11	100.92	100.63
	16.0	16.12	100.77
	20.0	20.05	100.23

*平均五决定

表4:该方法恢复的结果。

通过比较复苏的研究这些方法的结果,它是发现,f值(2.51,1.83,1.62 ARS, CA和WFBBL方法分别)比理论值低(2.59),表明没有显著差异之间的精度提出方法和参考方法(5]。计算t值1.18,1.24,1.16以上三种方法比文献值较低(1.63 95%信心)表明之间没有显著差异发现提出的方法和参考方法在95%置信水平。这表明提出的相似之处和药物的测定的参考方法。因此,该方法精密,准确。

量化值的检测极限,并限制对提议的方法赋予ARS方法比WFBBL更敏感和CA方法相对敏感比早些时候报道的方法。拟议的ARS方法适用于精确量化clobazam 1.5μg /毫升,WFBBL方法2.0μg /毫升和CA方法量化一个clobazam 6.0μg /毫升的量。这些结果表明,分析被执行在一个地区高于量化极限值。下面的灵敏度方法给出的结果表5。

方法	�农业研究所	CA	WFBBL
LOD(μg /毫升)	0.45	1.8	0.6
定量限(μg /毫升)	1.5	6.0	2.0

表5:灵敏度的方法。

应用商业样品的分析

来验证提出方法的有效性,制定销售(Frisium) clobazam被选中和卡马西平的确定,并给出结果表6。从样品溶液(配方),三个不同的集中解决方案准备基于不同线性浓度范围。ARS方法15μg /毫升的解决方案,对CA方法48μg /毫升和WFBBL 16μg /毫升解决方案准备。在所有三个报告方法,分析被发现超过99.0%。的结果,很明显,有一个很好的协议的结果提出了方法和商业样品的标签数量。

S.No。	方法	配方	准备的数量 μg /毫升	发现数量 μg /毫升	%化验
1	农业研究所	Frisium	15	14.96	99.7
2	CA	Frisium	48	47.95	99.8
3	WFBBL	Frisium	16	15.84	99.0

表6:%商业样本化验。

结论

拟议的方法测定的clobazam发现简单,敏感,精确、准确、健壮的、粗犷的、线性在合适的范围内。拟议的广泛适用性的光度方法由于不再形成有色配合物的稳定性。平板电脑成功剂型进行了分析和化验很简单,快速和首选的范围内。因此,报道方法可以申请clobazam配方的质量分析。

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