研究

数量:14 (1)DOI: 10.37532 / 0974 - 7532.2019.14 (1) .146

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增加表达Notch3肺动脉高压引起的小鼠肺组织的香烟

*通信:

戴博士Ai-Guo呼吸道疾病、医学院、湖南中医药大学、300 #会路,长沙,410208年,湖南省,中国,电话:+ 86-731-88458000;传真:+ 86-731-88458111;电子邮件:daiaiguo2003@163.com

文摘

肺高血压(多环芳烃)的老鼠模型建立了吸烟的方法。C68B7J小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只老鼠。对照组不做任何治疗。的模型组对待香烟一天两次,2小时,10 / h, 6天/周为6个月。右心室压力(RVSP)的老鼠被BIOPAC测量系统(MP150)。肺小动脉被沾染了胶原纤维(Van-Gieson方法)和分析图像专业+软件。肺小动脉的中间层的厚度和肺小动脉的直径测量,和肺小动脉的厚度进行了计算。Notch3蛋白的表达肺组织是由免疫印迹检测方法。结果表明:1。与对照组相比,右心室的压力模型组显著增加,肺小动脉变得更厚,内腔狭窄,和右心室的比例体重显著增加;2。与对照组相比,Notch3蛋白质的表达肺组织的模型组显著增加。

关键字

肺动脉高压;吸烟;Notch3

介绍

肺高血压是一种难治性疾病,表现为肺吗血管收缩和血管重建。其5年生存率仅为25% (1]。它的病因和病理过程一直非常关注,但仍没有完全阐明。许多临床和实验数据证实,吸烟是许多的主要病因之一肺疾病、心肺脑血管疾病和肺恶性肿瘤。香烟烟雾和颗粒物含有许多有害成分(2]。这些有害物质进入人体肺烟的形式,破坏平衡的氧化/抗氧化作用[3),导致肺损伤,如慢性支气管炎(4),肺气肿,最终导致肺动脉压力和甚至死亡5]。Notch3缺氧是密切相关的一个重要因素在活的有机体内。转录因子(6,7]。研究表明,Notch3表达与肺的程度呈正相关炎症并可能参与了肺动脉高压的发展。然而,这个角色和表达的Notch3肺等疾病肺动脉高压尚不清楚。在这项研究中,一只老鼠模型的肺动脉高压建立了香烟烟雾和观察。观察到的变化Notch3表达式在肺动脉高压的过程中,我们希望帮助理解的作用Notch3在肺动脉高压的发生和发展。

材料和方法

材料和试剂

男性C68B7J老鼠:6 - 8周,g,第21到26所有由湖南省实验动物中心提供。动物已经被动物研究所的管理认证(AAALAC,国际实验动物管理的评价和认证协会)。这个实验遵守实验室动物福利的道德原则。动物处理程序所认证的第一临床医学院伦理委员会湖南师范大学。Notch3和beta-Tubulin抗体购买(从abcam)。

模型制备和实验方法

1。C68B7J小鼠随机分为对照组和模型组每组10只老鼠。的老鼠模型组放置在一个白手起家的吸烟对被动吸烟盒(香烟:芙蓉,由湖南中研工业股份有限公司,有限公司)。香烟是一天两次,一次在早上,一次下午2小时(每小时5 - 10分钟),3 - 4个小时之间的下午,下午,10 / h,连续6天6天/周/月。正常对照组小鼠没有治疗。在实验中,小鼠的体重变化每周记录。

2。右心室压力(RVSP)麻醉小鼠由右心室压力试验机测量(BIOPAC系统,MP150)。

3所示。后杀死老鼠,右心室与剪刀剪除,然后右心室是降低房室隔,称重和右心室质量比身体质量计算。

4所示。组织病理学观察和肺动脉观察形态学变化。肺组织和4%多聚甲醛固定,4%蔗糖溶液为24小时。PBS洗后,石蜡是嵌入式和部分沾着他。胶原纤维染色与Van-Gieson方法肺小动脉直径小于50 - 100嗯。图像专业+软件被用来分析图像。方法如下:根据公式太% = MT / ED×100%用于计算中间厚度的百分比的肺小动脉管腔直径,它反映肺小动脉厚度的变化和计算的意思。

5。Notch3的表达肺组织与PBS的老鼠被4℃3次。每个样本加上1毫升准备细胞溶解产物和细胞溶解在冰上30分钟。溶菌产物产品收集。上层清液离心机在4°C 15分钟在12000 rpm,冻结在-80℃。Notch3蛋白质的内容肺组织是由免疫印迹检测。

统计分析

所有数据被x±s表示。t分析方法被用来比较对照组的意思模型组。差异具有统计学意义,p < 0.05。

结果

1。变化的右心室收缩压(RVSP)

经过6个月的吸烟,RVSP对照组小鼠(6.78 + 0.11)毫米汞柱,老鼠和吸烟的RVSP组显著高于对照组小鼠(11.22 + 0.29)毫米汞柱,p < 0.01 (图1所示。)。

2。肺的变化组织病理学和肺动脉厚度熏老鼠

与正常小鼠相比,肺组织病理学结果显示肺小动脉模型组显著较厚和窄(图2),表明血管重建的发生。VG染色结果显示,烟熏老鼠太% 25.40(+ 0.69)显著高于控制老鼠,8.16 (+ 0.12),p < 0.01 (图3),这表明肺小动脉发生了变化。

3所示。右心室肥大的变化

6个月后吸烟,右心室的比例在熏老鼠体重是79年0.000(+ 0.00002),明显高于控制老鼠(0.000 58 (02)+ 0.000),p < 0.01 (图4)。

4所示。Notch3的表达肺组织的老鼠

在对照组,Notch3蛋白表达很低,而在多环芳烃模型集团Notch3蛋白质水平显著增加(图5),这表明长期吸烟可能导致肺部的老鼠相对缺氧的环境,促进Notch3表达式。

讨论和结论

流行病学调查显示肺动脉高压(PAH)是很常见的在诊所,高度恶性肿瘤。人群中多环芳烃的发病率仅次于高血压和冠心病,5年生存率仅为25%。血管收缩和血管重建是肺动脉高压的主要病理基础:血管收缩是一个功能的改变,从而导致高血压;和血管重建。织质量的变化最终将导致右心室肥大,甚至肺衰竭(8]。

研究表明,多环芳烃的发生与吸烟密切相关。长期吸入各种有害的烟草会导致组件和尘埃粒子肺伤害,如慢性支气管炎和肺气肿,最终导致肺动脉压力和甚至死亡9]。鉴于吸烟和多环芳烃之间的相关性,建立吸烟引起的多环芳烃的动物模型研究多环芳烃的发生和发展。这个过程的一个重要方法。

在这项研究中,多环芳烃模型建立了小鼠的长期吸烟。结果表明,右心室压力,肺动脉壁和右心室肥厚小鼠显著增加6个月后吸烟与对照组相比,这表明多环芳烃模型吸烟引起的成功。

Notch3是一个重要的转录因子与缺氧有关在活的有机体内。它广泛存在于哺乳动物和人类。它是最受欢迎的分子研究缺氧疾病(10- - - - - -12]。研究表明,Notch3的表达呈正相关的程度炎症在肺组织,可能参与气道重塑肺动脉高压(13]。然而,对于Notch3和肺疾病,Notch3的表达呈正相关的程度炎症在肺组织。Notch3之间的关系和慢性炎症等疾病肺动脉高压尚不清楚。在这项研究中,等级3的表达中检测出小鼠的肺组织肺高血压。结果表明,缺口3蛋白的表达非常低在对照组显著增加多环芳烃模型组,表明切口3中扮演一个重要的角色在肺动脉高压等慢性炎症性疾病。

长期吸烟后,老鼠Notch3显著增加。这是推测Notch3的发展发挥了重要作用肺动脉高压由吸烟引起的。一方面,长期吸烟可能导致肺部相对缺氧的环境,导致Notch3表达的异常增加,导致血管壁厚和压力增加;另一方面,长期吸烟会严重损害身体。抗氧化系统,但是Notch3通路的特定角色的发展肺动脉高压还有待进一步研究。

的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突与这篇文章的内容。

确认

本研究部分由湖南省自然科学基金(2017号jj2158)。

引用

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