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研究
数量:15 (1)DOI: 10.37532 / 0974 - 7532.15.1.149

评价生物属性、健康福利和保护作用的酸乳酒对细胞毒性和基因毒性引起的丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)体内

*通信:
Ibtissem本·阿马拉
酶工程和微生物学实验室、国家工程学院在斯法克斯,距今1173年,斯法克斯大学3038斯法克斯,突尼斯,电话:+ 216-74274-600;电子邮件: (电子邮件保护)

收到:2020年1月23日;接受:2020年2月12日;发表:2020年2月17日

引用:本阿玛拉我,本Saad H, Cherif B, et al .评价的生物属性,健康福利和酸乳酒对细胞毒性和保护作用基因毒性由丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)在活的有机体内。Res Biosci牧师。2020;15 (1):149

文摘

酸乳酒制成的饮料牛奶和作为益生菌由于其抗氧化和消炎作用。本研究旨在探索发酵酸乳酒的能力改善Butylatedhydroxytoluene引起的不良反应(二叔丁基对甲酚)在血液里,老鼠的肝脏和肾脏组织。成年老鼠暴露在21天要么二叔丁基对甲酚,酸乳酒和二叔丁基对甲酚。二叔丁基对甲酚治疗导致血液参数的影响。事实上,基因毒性对白细胞的影响细胞证明了微核频率显著增加和减少细胞可行性以及显著改变等离子体生化参数。我们的研究结果也证明重要的改变在肝脏和肾脏的表达水平的促炎症细胞因子和氧化应激。这些修改数据被组织病理学证实。有趣的是,发酵酸乳酒恢复附近控制这些参数值。

关键字

酸乳酒;丁羟甲苯;肿瘤坏死factor-α;抗氧化活性;组织学研究

缩写

abt:联胺盐;二叔丁基对甲酚:丁羟甲苯;钙:钙;Cd:镉;克雷格:铬;DPPH: 1、1-Diphenyl - Picrylhydrazyl;铁:铁;Gpx:谷胱甘肽过氧化物酶;谷胱甘肽,谷胱甘肽;过氧化氢:过氧化氢:Hb:血红蛋白; Ht: Hematocrit; IL-6: Interleukin-6; IP: Injected Intraperitoneally; LAB: Lactic Acid Bacteria; MCH: Mean Corpuscular Hemoglobin; MCHC: MCH Concentration; MCV: Mean Corpuscular Volume; MDA: Malondialdehyde; Mg: Magnesium; MN: Micronucleus; Na: Sodium; NADPH: Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Reduced Form; NF-Kb: Nuclear Factor Kappa B; Ni: Nickel; OD: Optical Density; Pb: Lead; PBS: Phosphate Buffered Saline; RBCs: Red Blood Cells; ROS: Reactive Oxygen Species; RT-PCR: Reverse Transcript Polymerase Chain Reaction; SOD: Superoxide Dismutase; TB: Total Bilirubin; TBA: Thiobarbituricacid; TEAC: Trolox Equivalent Antioxidant Capacity; TLC: Thin-Layer Chromatography; TNF-α:肿瘤坏死因子α;TVC:全面可行的;UHT:超热处理;白细胞:白细胞;锌:锌

介绍

丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)是一种烷基酚广泛用作合成抗氧化剂和食品防腐剂(1]。尽管它的抗氧化活性,其政府在高剂量可能产生助氧化剂对目标生物的影响。事实上,其每日耐受摄入量是经常超过由于过食,主要在个人与极高的热量摄入,从而导致其积累(2]。此外,剩余二叔丁基对甲酚的衰落后的组织持续喂养需要很长时间。因此,这些残留积累,特别是在脂肪组织和排毒器官3]。细节血液、肝脏和肾脏抗氧化能力在使用二叔丁基对甲酚在食物中毒是未知的。这可能是通过活性氧产生物种(ROS)与高水平的丙二醛(MDA),导致脂质过氧化(4]。ROS也常常负责核转录因子k B (NF-κB)激活,从而增加促炎症生物标记物的表达等肿瘤坏死Factoralpha (TNF-α)和白细胞介素- 6 (il - 6)。

研究动物和人类都有显示,一些饮食的消费组件,如纤维、植物甾醇、多酚、生物活性肽,和益生菌,可以调节新陈代谢混乱和有助于减少氧化应激相关疾病(5]。的营养来源益生菌发酵酸奶,奶酪、泡菜、生香肠,面包,啤酒,葡萄酒,木村和酸乳酒使用吗乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌、链球菌(6]。事实上,据报道,酸乳酒是一种益生菌由于其健康福利和疾病预防属性。作为一个传统的饮料,它是获得通过牛奶发酵“克非尔谷物”,这是复杂的混合物的细菌,酵母多糖产生的微生物区系。由于他们促进健康的属性,酸乳酒谷物被广泛使用在中国和世界各地5]。酸乳酒的主要梯度乳酸菌buchneri,乳酸菌kefiranofaciens吗,乳酸菌helveticus(6]。然而,其微生物成分可能会改变由于生长条件和底物用于谷物和谷物起源扩散。此外,饮料包括乳酸、二氧化碳、乙醛、乙醇和维生素B (6]。尽管研究仍然稀缺和矛盾的,范围广泛的生物活性已报告在酸乳酒,包括抗炎、抗真菌抗生素活动对酵母菌和醋酸菌在肠道微生物区系6]。

这一调查旨在验证在体外在活的有机体内酸乳酒的影响:首先,测试其矿物和细菌成分以及其反激进主义的活动在体外通过1、1-diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH)和联胺盐abt•+ -自由基清除化验。其次,研究其对BHT-induced氧化损伤的保护作用在活的有机体内通过评估基因表达促炎症生物标记的抗氧化状态,血浆生化肝脏和肾脏标记和组织病理学变化。同时,为了对BHT-induced测试它的保护能力基因毒性外周血,微核和可行性测试进行了量化基因损伤。本研究动物模型被用于处理缓解的目的,为了探索酸乳酒的行动机制。

材料和方法

化学药品和试剂

选中的烷基酚丁羟甲苯(二叔丁基对甲酚)所需的生化检测,获得了从西格玛化工有限公司(圣路易斯,法国)。等化合物1,1 - diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH) Azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)联胺盐(abt)、谷胱甘肽(氧化和减少),减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)形式,盘中的-dithio-bis-2-nitrobenzoic酸(DTNB)和thiobarbituricacid(稍后通知)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。从其他供应商获得的其他化合物。

实验的程序

酸乳酒的生产和制备:使用成分如下:商业Ultraheat (UHT)消毒半脱脂处理牛奶(包含:每100克蛋白质= 3.2克;碳水化合物= 4.5克;脂质≈1.5 g{丁酸= 0.0611 g,己酸= 0.0376 g,辛酸= 0.0188 g,癸酸= 0.047 g,月桂酸= 0.065 g,肉豆蔻酸= 0.17 g,棕榈酸= 0.437 g,硬脂酸= 0.164 g,单不饱和脂肪酸= 0.425克,多不饱和脂肪酸= 0.0558 g, Omega - 3 = 0.00987 g,亚麻酸= 0.00987 gω6 = 0.033克,亚油酸= 0033 g,欧米加9 = 0.326 g,油酸= 0326克}酸乳酒谷物微生物区系(非转基因)来自西藏,中国,和组成的凝胶状的,形状不规则的颗粒由酵母和醋酸的共生组合乳酸菌(5,7]。矩阵准备在以下方式进行:激活谷物(30 g)接种在商业UHT脱脂牛奶(1.000毫升)和静态孵化24小时25ºC。饮料(1毫升)无菌采集样本每6 h。一旦达成期望的pH值为4.6,发酵在冰浴冷却停止了烧瓶和储存在冷藏4ºC,直到使用。酸乳酒准备如上所述,一周一次,从而确保新鲜。

发酵酸乳酒的DPPH自由基清除实验:样品的自由基清除活性测定的方法Brand-Williams et al。8),少量修改Takebayashi et al。9]。整除的绝对乙醇溶液(0.1毫升)包含不同样品浓度(1:2连环从初始样本稀释)添加到3.9毫升的DPPH解决方案在乙醇(0.06毫米)。获得的混合物被漩涡大力和孵化在室温(25ºC)为60分钟,在黑暗中,吸光度是阅读在517纳米乙醇空白使用分光光度计(光XT5紫外线指数)。IC50值表示的浓度所需的测试化合物清除DPPH自由基的50%。相应的抑制百分比计算根据以下方程:

自由基清除活性(%)= ((空白——一个样本)/空白]×100

一个空白的吸光度控制(准备以同样的方式没有测试化合物),和一个吗样本的吸光度测试化合物。抗坏血酸和二叔丁基对甲酚作为一个标准的控制。给出的值为一式三份分析的手段。

测量Trolox等效抗氧化能力(问题):自由基清除活性决定根据再保险et al。10)和激进的阳离子是由反应abt水溶液(7毫米)和过硫酸钾(2.45毫米,最终浓度)蒙在鼓里25ºC 12犯h。获得的解决方案是在乙醇稀释0.70(±0.020)的吸光度在使用前在734海里。卷10μL Trolox或样品的乙醇混合990μL稀释溶液的吸光度是决定在734 nm和30ºC, 6分钟后初始混合。适当的溶剂空白运行在每个试验中,和脱色程度估计通过监控吸光度降低在734海里。根据化合物的抗氧化活性测定和计算相对相当于Trolox浓度。抗氧化活性决定在三个浓度,Trolox的剂量反应曲线的范围之内。表达的自由基清除活性Trolox的问题定义为毫米。

矿物发酵酸乳酒的内容:镁铁(Fe)的浓度(毫克),钙(Ca)、锌(锌),钠(Na)、铅(Pb)、镉(Cd)、铬(Cr)和镍(镍)根据法测定酸乳酒的请愿11),之后每氯硝基矿化(2/1 V / V)原子吸收光谱学3000年(模型热电电子冰,舍伍德科学有限公司,剑桥,英国)。波长用来量化分析元素的第一个设备上的定义:Mg(285.2海里),Ca(422.7海里),Cd (766.5 nm), Na(589海里),铁(248.3海里)、锌(213.9海里)、Cr(324.8海里)、镍(232 nm)和Pb(283.3海里)。

微生物发酵酸乳酒的分析:各种微生物群落的生长监测的决心完全可行的计数(TVC),乳酸菌(实验室),沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和酵母。金额of0.1毫升稀释酸乳酒(1:10,氯化钠0.9%)琼脂板表面传播。TVC计算使用平板计数琼脂(PCA;默克公司,达姆施塔特,德国)3天后孵化30ºC,和实验室测定德曼Rogosa andSharpe介质(夫人)(美国Difco、底特律、MI)厌氧培养48 h后30ºC。所需的厌氧条件确保通过使用Anaeropack GENbox罐结合Pack-Anaero氧气吸收器(三菱瓦斯化学公司、东京、日本)。沙门氏菌枚举是进行木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基(XLD琼脂)(b - 2440 Geel Ciplastraat 3日,比利时)孵化24 h后37ºC。Baird帕克琼脂(La Forja 9 - 28850 Torrejon de Ardoz -马德里,西班牙)是用于金黄色葡萄球菌枚举(24小时37ºC),而酵母进行Sabouraud琼脂培养基(10 g / l蛋白胨,20 g / l葡萄糖,15 g / l琼脂,pH值6)在25ºC孵化后48 h。25 - 250年殖民地板选择和计算,和CFU ml-1平均数计算。所有板块都是视觉检查为典型的殖民地类型和形态特征与每个生长介质相关联。除此之外,每个媒体选择性例行检查涂片革兰氏染色和显微镜检查的准备从殖民地随机选择媒体。

薄层色谱法发酵酸乳酒(TLC)分析:一卷10μl稀释酸乳酒是用于薄层色谱。迁移进行了两次硅胶薄层色谱板(20厘米×20厘米)的使用正丁醇,乙醇和水(2:1:1,v / v)。可视化的碳水化合物是由加热后的薄层色谱板喷洒5% (v / v)硫酸乙醇。乳糖(1 g / l)作为标准单糖和商业牛奶作为参考。

动物的准备:所有应用实验过程进行了根据一般指南的使用动物生活在伦理委员会批准的科学调查斯法克斯的科学教师。乐动KENO快乐彩成人Wistar鼠(重180 g - 200 g),从中央药房(SIPHAT、突尼斯、突尼斯),被安置在一个22ºC±2ºC温度,湿度45%±5%和12 h明暗周期和提供每天的饮食标准颗粒和水随意。

慢性二叔丁基对甲酚诱导治疗炎症和合并施打酸乳酒:二十四(24)男性成年老鼠被随机分为三组,每组八:

1。第一组收到车辆(玉米油)和构成了控制

2。第二组是腹腔内注射(IP) 150毫克剂量的二叔丁基对甲酚/公斤的体重(合著),其次是3周注射200毫克/公斤。这协议因为采用初始剂量200毫克/公斤被证明是致命的;在最初的150毫克/公斤b.w.剂量,老鼠容忍成功注射200毫克/公斤。所有注射接种10点之前因为生理影响二叔丁基对甲酚pneumotoxic功效[12]。

3所示。第三组酸乳酒日常(150毫克的剂量二叔丁基对甲酚和二叔丁基对甲酚/公斤合著。注射,紧随其后的是每周200毫克/公斤)。管理的发酵酸乳酒是由填喂法的剂量根据文献[1.8毫升/天13]。

准备、测量和分析方法:整个实验阶段,食物和水的摄入量是提交日常监测。年底这段时间内,所有的动物颈被斩首,以避免压力条件。

一些血液样本被收集在肝素管和一些其他EDTA,而附加的样本立即用于血液参数测定。

肝素管离心机在2200 xg 15分钟和sediment-containing红细胞是悬浮在phosphatebuffered生理盐水(0.9%氯化钠0.01磷酸盐缓冲剂,pH值7.4)和离心机Sinha报道(14]。

EDTA收集血液样本用于白细胞的决心细胞(白细胞),红色的血液细胞(红血球)、红细胞比容(Ht)、血红蛋白(Hb)、意思是微粒的体积(MCV),意思是微粒血红蛋白(妇幼保健),血小板数量和妇幼保健浓度(MCHC)电子自动化Coulter MAXM(贝克曼库尔特公司,富勒顿,CA)。

在外周血微核(MN)分析:准备的幻灯片是根据标准的血细胞发生红细胞Hayashi的方法(15]。外周血的数量直接拍摄,然后风干让后来的涂片固定在甲醇20分钟。固定之后,幻灯片在吖啶橙染色(σ)1 - 3分钟。幻灯片被拍到在油浸在1000 x放大使用奥林巴斯BX50(日本东京)荧光显微镜。

白细胞通过密度梯度离心法分离:外周白细胞分数被聚蔗糖后获得分离。新鲜血液样本调整为1毫升与磷酸缓冲盐溶液(PBS), pH值7.4和400毫升的聚蔗糖(σref f4375 - 100 g),然后在2500 xg离心20分钟。白色的血液细胞提取的聚蔗糖梯度。

WBC可行性:测定细胞生存能力是通过台盼蓝排斥技术如前所述[16]。纯化样品进行了测定。白血细胞计算使用Malassez细胞比例和生存能力得分。

在等离子体生化标记评估:分离血浆,血液在肝素化管和离心收集2000 xg 10分钟。血浆转氨酶活动(AST、ALT)、总胆红素(TB)含量化验spectrophotometrically根据标准程序使用商用诊断包(Biomaghreb、阿、突尼斯,裁判20012;20043;20047)。尿素、尿酸和血浆肌酐水平估计spectrophotometrically使用商业诊断包(参考:20151年、20143年和20091年)从Biomaghreb购买(阿,突尼斯)。

分析抗氧化生物标志物在肝脏和肾脏匀浆:肾脏和肝脏丙二醛(MDA)浓度,脂质过氧化反应指数,测定spectrophotometrically根据德雷伯和哈德利的方法17]。MDA值计算使用1,1,3,3-tetraethoxypropane作为标准,并表示nanomoles丙二醛/毫克的蛋白质。

过氧化氢(H2O2)是根据亚铁离子氧化二甲酚橙(FOX1)方法描述你和沃尔夫(18]。H的数量2O2在上层清液由分光光度计在560海里。值表示为μmoles /毫克的蛋白质。

肾脏和肝脏中谷胱甘肽(GSH)含量测定Ellman的方法(19由Jollow[],修改20.)基于一个黄色5的发展,5-dithiobis-2硝基苯甲酸是添加到含巯基化合物组。10分钟后吸光度测量在412纳米。总谷胱甘肽含量减少表示为毫克/毫克的蛋白质。

超氧化物歧化酶(SOD)活性估计根据波和Fridovich [21)及其单位被表示为所需的酶抑制电视台减少了50%。单位/毫克蛋白表达的活动。

谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性测定根据Flohe Gunzler [22)和吸光度下降340海里。谷胱甘肽氧化的酶活性被表示为nmol /分钟/毫克的蛋白质。

维生素C是确定被Jacques-Silva et al。23]。抗坏血酸的数据被表示为更易与每毫克的蛋白质。

肝脏和肾脏的总RNA提取:几个肝脏和肾脏样本收集控制和治疗的老鼠。总mRNA隔绝100毫克的这些器官(RNA提取前储存在-80ºC)使用工具从英杰公司购买(纯链接RNA ref 12183018)根据制造商的建议。准备的RNA被检查电泳对其完整性和通过光学密度(OD)测定其纯度。所有样品260/280 OD值1.7和1.9之间的不同比例。

互补脱氧核糖核酸合成和rt - pcr:通过反向转录聚合酶链反应信使rna (rt - pcr)扩增,肿瘤坏死因子α的转录丰度,摘要意思和白细胞介素6基因测定从几个样本。总总mrna的互补脱氧核糖核酸得到逆转录过程。第一链的互补是准备使用heat-denatured(5分钟在70ºC)总mrna(10毫克)作为模板,200 U MMLV逆转录酶(表达载体),20每个deoxynucleosideμmol三磷酸,20μmol每个引物。反应总额20μl在室温下5分钟和60分钟42ºC是用来进行反转录。互补dna / RNA heteroduplex当时变性在70ºC,持续15分钟,在冰上冷却。大量的引物对设计产生重叠的碎片。

基因名字正向引物(5 ' 3 ')反向引物(5 ' 3 ')

β-Actin TCCTCCTGAGCGCAAGTACTCT GCTCAGTAACAGTCCGCCTAGAA

il - 1 TCTTCGAGGCACAAGGCA CAGAGGTCCAGGTCCTGGAA

il - 6 CAGCTATGAAGTTTCTCTCCGCA CAGAATTGCCATTGCACAACTC

TNF-αGGTGATCGGTCCCAACAAGG CACGCTGGCTCAGCCACTC

组织病理学研究:部分肝脏和肾脏组织缓冲福尔马林固定48 h 10%解决方案,在一个提升分级系列脱水乙醇,清除在甲苯和嵌入在石蜡。5 - 6μm厚部分是通过旋转切片机然后用苏木精和伊红染色(H和E)显微观察。六张幻灯片准备从每个肾脏和肝脏。六张幻灯片准备从每个肝脏。所有部分)方法进行了对肾脏和肝脏损伤的程度。

统计分析

每个参数的值表示为平均值±标准偏差(x±SD)。邓肯的多个范围测试提供的意思是比较的统计学意义p < 0.05。使用SPSS统计分析为Windows(版本17.0)。

结果

在体外研究

评价酸乳酒的反激进主义的活动用DPPH和abt•+彻底清除活动:abt和DPPH•+是相对稳定的自由基的特征颜色消失时熄灭。abt和DPPH•+自由基清除活性酸乳酒的相比,目前的研究和测定与标准的抗氧化剂。DPPH清除活动显示的酸乳酒,维生素E浓度低于一半,允许减少自由基浓度(IC50)是0.68毫克/毫升,而这个值是0.3毫克/毫升维生素E .当使用abt•+清除测试来评估抗氧化能力,酸乳酒表现出较高的清除能力以来半数需要减少自由基的浓度(IC50)相媲美,维生素E(42毫克/毫升)和低于维生素C(73毫克/毫升)。

单糖发酵酸乳酒的成分:单糖组成酸乳酒是由薄层色谱法(TLC)。结果提出了图1显示一个插头的外观单糖的保留因子为0.28。酸乳酒的水解导致出现插头有保留因子0.28对应相同的保留因子的乳糖(用作标准P3)。的水解酸乳酒并不是总因为插头的一部分对应于克非尔坚持(RF = 0.28)。插头对应于葡萄糖的出现表明,酸乳酒产品含有乳糖分子的homo多糖组成的链(图2)。

biosciences-vitamin

图1所示。abt和DPPH自由基清除活性酸乳酒相比,维生素E作为标准。

biosciences-Monosaccharide

图2。单糖发酵酸乳酒的成分。商业牛奶(莱恩1);酸乳酒(巷2)和乳糖(巷3)。

矿物含量的发酵酸乳酒:我们的数据表明,发酵酸乳酒是富含钠(162.2±8.34 mg / L), Ca (18±3.65 mg / L)和mg (2.6±0.023 mg / L),含有少量的铁和锌(分别为0.02±0.001,0.04±0.01)。相反,有一个没有完整的Cd,铬、铅、镍(表1)。

矿物含量(毫克/升) Na + Ca + + Mg + + 锌+ C d Pb Cr
酸乳酒 162.2 18.08 2.63 0.04 0 0 0 0

表1。酸乳酒的矿物成分。

微生物增长:传统的微生物进行枚举在24小时牛奶发酵(酸乳酒谷物3%)30ºC。假定实验室在12 h数显著增加,达到最大值(10.46日志单位)在24 h和TVC(4.8日志单位)。酵母数量增加到12 h,在约4.36日志单位保持不变发酵时期。微生物也列举在酸乳酒储存在4ºC 48 h。在此期间,酵母(大约4.36日志单元)和实验室组数量(约10个对数单位)保持不变,直到结束的存储期(表2)。

应变 CMI(毫克/毫升) 招商银行(毫克/毫升)
鼠伤寒沙门氏菌 - - - - - - 15 > 15
Klebsielle肺炎 - - - - - - 15 > 15
肠杆菌属下水道 - - - - - - 7.5 > 15
Escherchia杆菌 - - - - - - 7.5 > 15
葡萄球菌epidermidis + - - - - - - - - - - - -
蜡样芽胞杆菌 + - - - - - - - - - - - -
枯草芽孢杆菌 + - - - - - - - - - - - -

表2。最低抑制浓度和最低杀菌浓度的酸乳酒的细菌。

血液参数:与对照组相比,红细胞,Hb内容和血小板数量降低了29% (p = 0.05);23% (p = 0.06)和25% (p = 0.09)分别在大鼠暴露于二叔丁基对甲酚(表3)。在公司没有变化,妇幼保健,MCHC指出。有趣的是,与酸乳酒co-treatment改善上面引用的参数达到控制值。

参数和治疗 控制 二叔丁基对甲酚 二叔丁基对甲酚+酸乳酒 F P
加拿大皇家银行(106/µL) 8.33±0.47一个 6.46±1.01b 7.72±0.63ab 4.99 0.053
乙肝(g / 100毫升) 14.24±0.67一个 11.55±1.61b 13.71±0.86ab 4.83 0.056
Ht(%) 42.58±2.38一个 34.06±5.17b 40.18±2.40ab 4.55 0.063
妇幼保健(pg /红细胞) 17.12±0.32一个 18.03±4.02一个 17.73±1.16一个 0.11 0.898
MCHC(g / 100毫升) 33.46±0.53一个 34.71±7.41一个 34.05±1.71一个 0.061 0.942
(毫米3/红细胞) 51.12±0.16一个 52.71±1.17一个 52.05±1.58一个 1.47 0.301
血小板(103/毫米3) 728±129.16一个 321±70.10一个 659.32±312.14一个 3.59 0.094

表3。小白鼠血液参数的控制和二叔丁基对甲酚和酸乳酒有关。

锰测定外周血中:图3显示控件的白细胞形态的核和二叔丁基对甲酚,治疗组治疗后时期。核被认为是正常的表型当发光明亮和组织。凋亡细胞核可以被压缩染色质聚集在核膜或总支离破碎的边缘形态的核。在对照组,细胞没有任何核分裂。然而,有一个特征核分裂BHT-group白细胞核(图3)。的凋亡细胞显示减少的特征尺寸,强烈的荧光核染色质浓缩。合并施打酸乳酒二叔丁基对甲酚之前表现出显著的改善白细胞的形态,而老鼠只有二叔丁基对甲酚。

biosciences-row

图3。(一):MN测试控制和治疗有二叔丁基对甲酚单独或与酸乳酒的老鼠。图像核白细胞;图像凋亡细胞;图像坏死细胞;二叔丁基对甲酚(B):影响单独或与酸乳酒的白细胞数量和viabilitya有关。一不共享相同的字母(a - c)在一个行明显不同(p < 0.05)。数据意味着±标准差值。

白细胞的数量和可行性:台盼蓝排斥法显示细胞对照组(100%的可行性图3 b)。结果清楚地显示重要的DNA损伤,证明了降低(p < 0.05)和活力的白细胞数量,二叔丁基对甲酚组相比的控件(图3 b)。重要的二叔丁基对甲酚治疗后观察DNA损伤相比,控制。补充的酸乳酒BHT-treated组改善BHT-group WBC生存能力相比。描述的实验重复了三次。

等离子体生物标志物水平:比控制、胆红素、AST和ALT水平BHT-treated组是等离子体的成年老鼠增加了20% (p < 0.5), 74% (p = 0.05)和11% (p = 0.06),分别表示二叔丁基对甲酚诱导肝毒性(表4)。

参数和治疗 控制 二叔丁基对甲酚 二叔丁基对甲酚+酸乳酒 F P
ASAT (U / I) 222.7±69.44b 387.5±92.60一个 240.25±38.44b 4.83 0.056
ALAT (U / I) 67.6±12.19b 75.4±7.66一个 54±7.11b 4.09 0.06
胆红素(毫克/升) 25.8±8.76一个 30.87±9.26一个 22.53±9.59一个 0.625 0.567
肌酐(更易/ L) 17.71±2.30一个 22.75±3.73一个 20.26±3.29一个 1.903 0.229
尿素(更易/ L) 5.78±0.45b 7.14±0.57一个 6.92±0.22一个 8.33 0.019
尿酸(毫克/升) 43.66±12.57b 82.51±13.76一个 35.88±8.12b 13.59 0.006

表4。小白鼠血液参数的控制和二叔丁基对甲酚和酸乳酒有关。

我们的研究结果还显示一个星座肾功能障碍的二叔丁基对甲酚的治疗组。肌酐、尿酸和尿素水平BHT-treated老鼠高28% (p = 0.2), 89% (p = 0.006)和23% (p = 0.01)分别在等离子体的控制。补充的酸乳酒BHT-treated组改善上面引用的所有参数与BHT-group (表4)。

MDA和过氧化氢水平的评估:我们的结果显示增加的脂质过氧化和活性氧产量水平的肝脏和肾脏BHT-treated集团就是明证增强MDA 91%和49% (p < 0.001)和H2O2相比(p < 0.001)水平控件(表5)。克非尔联合政府大大提高了MDA和H2O2BHT-treated相比,老鼠。

参数和治疗 控制 二叔丁基对甲酚 二叔丁基对甲酚+酸乳酒 F p
MDA (MDA nmol / g组织) 115.65±18.81c 221.55±19.04一个 153.79±13.10b 29.16 0.001
GPx (µmol /分钟/毫克蛋白) 4.92±0.50b 7.04±0.50一个 5.80±0.87ab 8.12 0.02
谷胱甘肽(毫克/毫克蛋白) 486.91±34.5b 392.03±25.72一个 426.99±19.68b 9.25 0.015
维生素C(更易毫克蛋白) 2.52±0.11一个 1.43±0.10c 1.94±0.18b 49.12 < 0.001
SOD(单位/毫克蛋白) 72.81±7.26b 123.32±25.43一个 105.94±18.56ab 5.68 0.041
H2O2(μmoles /毫克的蛋白质) 0.05±0.007c 0.10±0.008一个 0.08±0.001b 43.36 < 0.001
肾脏
MDA (MDA nmol / g组织) 202.82±14.83c 303.44±15.30一个 240.51±17.67b 30.35 0.001
GPx (µmol /分钟/毫克蛋白) 4.56±0.69一个 5.60±0.67一个 5.12±0.50一个 2.79 0.139
谷胱甘肽(毫克/毫克蛋白) 620.35±46.56一个 489.38±27.82b 557.08±27.56ab 10.43 0.011
维生素C(更易毫克蛋白) 1.97±0.09一个 1.02±0.22c 1.56±0.17b 23.97 0.001
SOD(单位/毫克proein) 58.16±13.89b 120.94±14.68一个 93.65±14.68ab 14.31 0.005
H2O2(μmoles /毫克的蛋白质) 0.11±0.009一个 0.21±0.03一个 0.16±0.01一个 3.13 0.117

表5所示。肝脏和肾脏氧化压力参数的控制和治疗组。

酶和non-enzymatic抗氧化状态:肝脏GPx和SOD活动显著增加(43%;p = 0.02和69%,p = 0.04)和肾脏(24%;p < 0.1和108%;二叔丁基对甲酚的分别为p < 0.005)治疗组相比,那些控件(表5)。

显著减少谷胱甘肽和维生素C值(24%;p = 0.01和76%;分别为p < 0.001)在肝脏和肾脏(26%;p = 0.01和93%;分别为p = 0.001)明显BHT-treated组相比,控制(表2)。Co-treatment与酸乳酒显著提高肾脏和肝脏组织的抗氧化状态而BHT-treated组。

二叔丁基对甲酚和开菲尔对炎症介质的表达:酸乳酒的效果与二叔丁基对甲酚测量了促炎基因表达il - 1β,il - 6和TNFαmRNA积累通过rt - pcr (图4)。结果显示相应显著增加IL和TNFαmRNA BHT-treated老鼠的肝脏和肾脏。重要的是,酸乳酒co-treatment抑制促炎细胞因子的增加减少。

biosciences-Kefir

图4。摘要意思,酸乳酒理气二叔丁基对甲酚诱导白细胞介素6、TNFα在肝脏和肾脏表达式通过rt - pcr分析。

组织病理学研究:BHT-treated老鼠,肝脏和肾脏组织学数据显示大量异常(图56)。光显微镜检查显示肝脏正常结构控制,显示明显的肝细胞正常的细胞结构,正弦空间和中央静脉。虽然二叔丁基对甲酚治疗,严重的组织病理学观察变化。二叔丁基对甲酚引起坏死,出血,炎症白细胞的浸润细胞和肝细胞液泡化。

biosciences-Liver

图5。(一):成年老鼠的肝脏组织学部分:控制;(B1和B2): BHT-Treated老鼠;(C):二叔丁基对甲酚+ kefir-Treated老鼠;(D, E, F):组织学的肝脏组织。一个意味着不共享相同的字母(a - c)在一个行明显不同(p < 0.05)。箭头表示:图像白细胞浸润,图像脂肪变性图像液泡化,图像有丝分裂细胞。

biosciences-Kidney

图6。(一):成年老鼠的肾脏组织学部分:控制;(B1和B2):二叔丁基对甲酚;(C):二叔丁基对甲酚+酸乳酒;(D, E, F):肾组织的组织学得分。一个意味着不共享相同的字母(a - c)在一个行明显不同(p < 0.05)。箭头表示:图像Intra-glomeruli出血,图像白细胞浸润,图像液泡化,图像坏死。

肾脏还表现出一些异常,如肾小球内血管充血和小管之间。淋巴细胞和多核的渗透细胞之间观察到小管坏死和液泡化发生尤其是在小管BHT-treated老鼠。在集团co-treated酸乳酒与二叔丁基对甲酚,明显改善肝和肾组织病理学观察外观,但仍与减少大量肾小球坏死的病灶部位和退化细胞而二叔丁基对甲酚。特别是,我们注意到,在美联储(二叔丁基对甲酚+酸乳酒)组,有丝分裂细胞的增加,表明在细胞再生酸乳酒的重要作用

讨论

在目前的工作、GPx SOD,谷胱甘肽、维生素C、H2O2和MDA被选为相关指标来评估BHT-induced酸乳酒的影响肝毒性和肾毒性在活的有机体内。肝脏和肾脏损害也评估促炎细胞因子的表达水平,包括肿瘤坏死factor-α(TNF-α)interleukin-1β(IL-1β)和白细胞介素- 6 (il - 6)。除此之外,其他指标血浆样本评估提供额外的证据支持我们的结果。

在当前的研究中,二叔丁基对甲酚治疗带来显著增加MDA和H2O2在成年老鼠的肝脏和肾脏。MDA是一个指标的自由基损伤引起膜脂质过氧化作用可以改变细胞膜完整性,导致膜运输功能和损伤破坏细胞体内平衡(24]。因此,BHT-induced细胞毒性,一部分是因为ROS生产。二叔丁基对甲酚的分子机制导致活性氧产量尚未阐明,但我们的数据表明,氧化压力是负责任的,至少在某种程度上,其毒性。自由基可能直接源自二叔丁基对甲酚或在其新陈代谢的P450年细胞色素。事实上,氧化压力导致超氧化物自由基的形成,进而转换为羟基自由基通过H2O2或ONOO [25]。这些自由基导致细胞膜脂质过氧化反应,导致磷脂退化。在目前的研究中,MDA水平,增加肝脏和肾脏脂质过氧化的产物,提高SOD、GPx活动和伴随的维生素C和减少谷胱甘肽水平,主要对氧化损害的防御代理,二叔丁基对甲酚注射后,建议其hepato——和nephro-toxicities这可能是由于氧化损伤。肝损害细胞通常会导致血浆转氨酶升高,细胞坏死的指标(26]。增加inplasma AST和ALT酶二叔丁基对甲酚组注明氧化损伤和肝细胞坏死肝细胞细胞膜的渗透性的增加。此外,二叔丁基对甲酚肝毒性证明了胆红素水平的增加产生的溶血或减少肝脏吸收接合。另一方面,增加血浆肌酐、尿酸、尿素水平表示肾小球滤过率下降,因此,肾脏功能障碍。事实上,生化结果经组织学数据标记白细胞浸润在肝脏和肾脏组织,从而确认BHT-treatment的炎症反应。同时,肾损伤的特点是鲍曼空间和血管充血肿大,肝损伤时,液泡化,表明坏死一步的开始。值得注意的是,二叔丁基对甲酚的酸乳酒的补充治疗大鼠诱导显著复苏的组织病理学变化。与此同时,发酵酸乳酒消除脂质过氧化作用和改善肝脏和肾脏功能障碍。这suggests that kefir evoked an antioxidant effect and, consequently, protected organs from oxidative damage and dysfunction. Besides, Kefir could eliminate oxides such as lipid peroxides via its antiradical and antioxidant proprieties demonstrated by our在体外研究。根据先前的发现,底层酸乳酒的保护作用机制可能是由于其生物活性成分,如exopolyssacharides肽,抗氧化剂并通过免疫调节特性27]。酸乳酒的积极作用在细胞再生也可能通过提供高质量的营养摄入的维护和再生的身体被认为是至关重要的细胞(28]。

先进的肝脏和肾脏的过度ROS针对症状可能是由炎症激活细胞(29日]。因此,炎症反应引起相关基因(白细胞介素6、IL-1β和TNF-α),进一步刺激白细胞浸润,BHT-treated组中观察到我们的结果。此外,促炎细胞因子TNF-α施加显著增加影响组织炎症反应,导致严重的肝脏和肾脏氧化损伤(30.]。我们的调查证明,发酵酸乳酒补充生化标记和显著的影响免疫反应(细胞因子摘要意思、白细胞介素6、TNFα)。事实上,严格监管细胞因子似乎是至关重要的维持有益的功能,可以对炎性疾病提供新的治疗策略。事实上,酸乳酒能够激活调节性T细胞(亚)的功能是维护体内平衡Th1-Th2响应。通过细胞因子产品,这些细胞有能力抑制炎症反应和细胞凋亡。因此,我们的研究表明,酸乳酒作用机理在于降低等离子体肝脏和肾脏生物标志物和促炎细胞因子,以及减少随后自由基和脂质过氧化作用的影响。减少过氧化,积极分子影响下的分泌细胞因子(摘要意思,白细胞介素6)如果结构性破坏和肝和肾的功能细胞是不可避免的。

血液参数等重要的生物反应,提供了一个良好的基础为审判有关疾病,组织损伤的程度,国防抗氧化剂的反应机制,诊断为贫血,并且可以指数健康状态描述(31日]。我们的数据显示,一些血细胞异常参数BHT-treated老鼠,就是显著减少红细胞数量以及在Ht和Hb浓度二叔丁基对甲酚注入。这可能是由于氧化压力可能产生的二叔丁基对甲酚也干扰治疗大鼠的免疫功能。白细胞减少发生的二叔丁基对甲酚可能导致免疫系统故障和/或从白细胞坏死或细胞凋亡增加。证实了这一假说的微核(MN)和白细胞可行性测试化验在目前的研究。这些方法被广泛用于基因损伤诊断,看到测试样品的可用性缓解来自动物和人类。MN来自DNA断裂,导致无着丝粒染色体碎片或滞后染色体间期,确认致癌性和基因毒性测试产品(32]。二叔丁基对甲酚基因毒性对白细胞的影响细胞证明了微核频率显著增加,降低细胞生存能力,而克非尔co-treated老鼠总白细胞计数,改善细胞生存能力和微核频率可能通过其抗氧化和消炎作用。事实上,发酵酸乳酒拥有健康成分由于其复杂的混合物的细菌和多糖,证明了我们的结果。这印证了先前的研究结果表明,酸乳酒改善蛋白质的生物价值和消化率,并加强免疫系统下的规范化细胞因子(33]。

结论

它可以与酸乳酒认为co-treatment提供保护BHT-induced细胞毒性和基因毒性,调节基因表达和DNA修复。它还展示伟大的抗氧化能力证明了其余的SOD、GPx活动。此外,,确认了其抗氧化活性的关键中间体外,与abt•+和DPPH的反应,证明其活性氧清除能力。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

目前的工作是由总局支持技术和科研、突尼斯。部高教育和科学研究,突尼斯。酶工程和微生物学实验室、国家工程学院在斯法克斯,距今1173年,斯法克斯大学3038斯法克斯,突尼斯。

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