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墨鱼的效果(灰officinalis)纯墨水和胆固醇水平的肌肉提取威斯特老鼠食用高脂肪的饮食:生物技术的应用程序

*通信:

Benchegra-Rabhia K,水产养殖生物技术和生物修复实验室(AQUABIOR)部门,奥兰大学艾哈迈德调查报告,奥兰,阿尔及利亚,电话:+ 213 797 08年56 02;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

渔业副产品在一些自然生物活性成分相对较高。提出研究试图探讨在自然纯粹的墨水和肌肉的影响提取的墨鱼(灰officinalis)胆固醇水平Wistar鼠食用高脂肪的饮食。营养摄入的影响脂质丰富的高胆固醇血症是由一个30天的实验中,在24个雄性老鼠的纯种菌株,年龄在六周,体重约200克。观察大鼠分为4同质组六(没有:6);一组在整个实验中接收一个商业标准饮食;其他03组进行一个为期十天的适应阶段标准商业饮食补充脂质(30%动物脂肪)(高脂肪饮食:R-HL)。经过一段时间的30天的实验中,一组仍然消耗相同的饮食R-HL,第二个观察组消耗HM R-HL补充250毫克/公斤的肌肉水解墨鱼,和第三EP组消耗R-HL补充250毫克/公斤纯墨鱼的墨水。30日日期的实验,结果表明,补充R-HL HM和EP没有影响的内容总脂质在四组大鼠血清和肝脏。然而,它修改其内容在不同的血脂(总胆固醇、甘油三酯、磷脂)。他们也导致血清蛋白质的水平增加了20%在HM组相比HL组。 Furthermore, assessment of lipid peroxidation by measuring the TBARS in serum and liver reveal a reduction of 50% in the HM group compared to the HL group. It is observed that some of bioactive components in muscle hydrolysates and pure ink of the cuttlefish (PUFA and bioactive peptides) studied possess considerable metabolic activities (anti-inflammatory and antioxidant). In conclusion, the study claims that the effect of Muscle Hydrolisate Supplementation (MHS) and natural pure ink of the cuttlefish (Sepia officinalis) have a significant effects on lowering Cholestrol level, which will be interesting for an industrial development, for their role in prevention against cardiovascular complications associated with hypercholesterolemia.

关键字

乌贼;副产品;墨鱼肌肉hydrlostate;纯粹的墨水;老鼠西星;高脂肪饮食

介绍

的钓鱼部门最重要的一个部门根据粮农组织粮食生产的1]。墨鱼,提供了开发一个机会评估,结果产生超过60%的副产品相对丰富的某些化合物生物活性:至关重要的蛋白质,氨基酸,多不饱和脂肪酸、酶、生物聚合物生物材料(2]。看起来有趣的采取的策略恢复这些物质,是否可以测试他们实验并将它们引入到人类或动物食品补充剂或食物补充。目前科学家们寻找解决方案的最常见的疾病之一,是高脂血症或高水平的血清三酰甘油和胆固醇是一个风险因素的过早动脉粥样硬化和冠状动脉疾病(冠心病)听到。强有力的证据已经被各种调查人员提出自由基的参与生产和脂质过氧化反应在动脉粥样硬化的发病3]。

在阿尔及利亚,超过58%的死亡是这种疾病。专家声称,超过半数死亡欠心血管疾病,阿尔及利亚的死亡负责四每年超过40000人的死亡记录。

近年来许多流行病学研究已经清楚地演示了之间的联系压力和许多疾病的发展过程和4]。抗氧化剂很重要的方面健康维护基于他们的体内抗氧化过程的调制5]。喂养抗氧化剂减弱粥样硬化过程在动物模型中,主要是由于他们的自由基清除能力(6]。

鱼是健康饮食的一个主要组成部分,许多流行病学研究和临床试验显示其有利影响冠状动脉疾病的发病率,减少冠心病(冠心病)的死亡风险。

许多研究从不同的国家也报道,海鲜消费预防与生活方式有关的疾病。许多流行病学研究已经检查海洋产品和饮食之间的关系心血管疾病(CVD) (7]。在一个报告中,人食用富含脂肪的鱼类减少34% CVD three-cohort研究[8),35克/天鱼的消费导致减少心血管疾病的死亡率(9]。一个荟萃分析显示,那些每周吃鱼的心血管疾病死亡的风险降低了15%相比,个人消费没有鱼(10]。先前的研究表明饮食鱼蛋白通过抑制胆固醇降低血清胆固醇。

在体外研究和动物模型显示抗氧化,抗高血压、抗血栓和生物活性肽鱼(11- - - - - -13]。这项研究的目的是展示的影响水解的墨水和肌肉建立在预防高胆固醇水平,纯种食用高脂肪的饮食

材料和方法

墨鱼的准备样品

墨鱼(灰officinalis)获得鱼市场在城市奥兰,阿尔及利亚。样本用聚乙烯袋包装,放置在冰和运送到了研究实验室。抵达后,用水洗了两次,消除浪费。墨鱼副产品分离收集,只有墨鱼肌肉和墨水,然后储存在密封的塑料袋在-20°C到用于提取。

制备的冻干墨水墨鱼:乌贼墨冻干法由lyophilizator寒冷干燥过程。很长一段保护,脱水方法保留了产品的营养品质和生物分子的性质。在冻干前油墨从墨preleved仔细腺。

酶法水解墨鱼肌肉:100 g的墨鱼肌肉使溶解在200毫升蒸馏水均质在10分钟,期间获得的匀浆搅拌下加热20分钟在90°C。然后蛋白酶添加到混合物(3 U /毫克的蛋白质)和维护在搅拌下6小时,在37°C和氢氧化钠溶液的pH值7.5 4 n。之后,匀浆然后加热在80°C 20分钟停止酶反应,混合然后离心机在5000 g 20分钟和墨鱼的可溶性部分蛋白质水解冻干,它是存储在环境温度直到进一步使用14]。

动物和饮食

雄性Wistar鼠(巴斯德研究所、阿尔及尔、阿尔及利亚)(n = 24)重200±15克被安置在不锈钢笼子里的温度24°C, 12小时光/暗周期和相对湿度为60%。所有的老鼠收到一个标准的饮食含有动物脂肪的30%,为10天。适应阶段后,胆醇血症价值更大,hypercholesterolemic老鼠被分成4组(n = 6):一组使用相同的饮食R-HL,第二个观察组消耗HM R-HL补充250毫克/公斤的肌肉水解墨鱼,和第三EP组消耗R-HL补充250毫克/公斤纯墨鱼的墨水。。随意提供食物和自来水。食品消费和体重增加每周测量一次。所有动物程序都严格按照美国国立卫生研究院(1985年85号——23日修订)指导实验室动物保健和使用的,所有实验都被我们的机构核准的动物保健和使用委员会(大华银行314/2012)。

血液和组织样本

经过4周的实验和隔夜空腹,犀牛和三氯乙醛(60毫克/公斤体重),与过量安乐死。血液收集从腹主动脉进入干燥管和离心机在4°C, 1000克15分钟。血清拍摄和守恒的0、1% EDTA溶液,分离细胞然后洗共产党连续暂停在0.9%氯化钠溶液离心分离和重复。的洗细胞在同等体积的冷水和细胞溶解混合彻底。肝脏、肌肉迅速切除在冰冷的生理盐水中,涂抹在滤纸和体重。血清和组织样本存储在-70°C到使用。

血清LDL-HDL隔离和表征₁,HDLM₂和高密度脂蛋白₃

血清LDL-HDL₁被孤立的沉淀用MgCl吗₂和磷钨酸(σ化学公司、法国)的方法Burstein et al。15]。HDL2和高密度脂蛋白₂是由微分硫酸葡聚糖氯化镁降水根据Burstein et al。16]。估计这个方法的有效性,超速离心法进行根据哈维尔等。血清总胆固醇(TC)和每个分数是由酶比色法(kit人力、GmbH是一家德国威斯巴登)(17]。

胆固醇测定血清和肝组织

总胆固醇是由比色测量酶方法(Zoug工具包Chronolab瑞士,瑞士)。

在血清和肝组织甘油三酯测定

甘油三酯是由比色酶方法(Zoug工具包Chronolab瑞士,瑞士)。目前TG在样例给酶法水解和氧化后,一个可量化的颜色复杂的分光光度法。

磷脂在血清和肝组织的决心

磷脂是由比色方法基于彩色之间复杂的形成磷脂和ferrothiocyanate铵。

脂质过氧化作用

硫代巴比土酸活性物质(TBARS)血浆脂蛋白的浓度测定。一毫升的脂蛋白分数加入2毫升的硫代巴比土酸(稍后通知)(0.017最终浓度,更易/ L),加上丁羟甲苯(浓度、3.36µmol / L)和孵化15分钟在100°C。冷却和离心后,上清液的吸光度测定为535海里。

脂质过氧化作用在组织由丙二醛之间形成复杂的评估和硫代巴比土酸(稍后通知)。短暂、肝、主动脉组织(0.5 g)均质4.5毫升的氯化钾(1.15%)。匀浆(100µL)和0.1毫升dodecylsulfate钠(SDS)(8.1%), 750年µL醋酸(20%)和750年µL稍后通知试剂(0.8%)。反应混合物加热在85°C加热30分钟。之后,管的冷却和2.5毫升n-butanol-pyridine(15:1)补充道。在4000克混合和离心后10分钟,上层阶段被测量在532海里(18]。

统计分析

统计分析软件SPSS 17.0实现的Windows (SPSSInc。、芝加哥、III。,美国)。定量测量都表示为意味着±标准差(SD)六大鼠/组。数据分析使用图基测试(P 0 05)。

Chi-2测试被用来证明显著的统计学差异(P 0 05)组之间的动物。

结果

体重(BW)和相对器官重量

经过4周的实验,发现类似的体重在4组大鼠。没有观察到显著性差异进化四组之间的食品采取动物。

血浆和组织脂质浓度

血浆和肝总脂质水平显示了四组无显著差异,但在等离子体水平与对照组相比总胆固醇(CT)显著减少61%和43% G-EP G-HM,

最后这两个团体和g t之间的区别并不重要。CT显著增加了56%的G-HL g t。在肝级别明显降低(28%)提到的内容在CT G-EP G-HM和19%之间没有显著差异时指出这两个最后的组和g t。然而显著增加18%,CT观察到G-HL g t。

在血清磷脂水平显著地降低G-HM和G-EP关于(与之相比)G-HL这个减少代表超过20%的G-HM G-EP,虽然没有显著差异指出GT和G-HM G-EP之间。之间的一个重要区别是指出g t和G-HL G-HL翻译增加了22%。肝水平降低50%和26%之间指出G-HL G-EP和G-HM分别和G-HM和G-EP之间的显著差异,g t是如此指出显著增加在G-HL指出关于GT(与之相比)。

等离子体磷脂水平显著地降低G-HM和G-EP相比G-HL这个减少代表超过20%的G-HM G-EP,虽然没有显著差异指出GT和G-HM G-EP之间。之间的一个重要区别是指出g t和G-HL G-HL增加(22%)。肝水平降低50%和26%之间指出G-HL G-EP和G-HM分别和G-HM和G-EP之间的显著差异,g t也因此指出显著增加与GT相比G-HL而著称。

血浆甘油三酯(TG)明显降低38% G-HL和G-HM之间,没有显著下降17% G-EP而著称。两处理之间的差异G-HL礼物没有显著差异,而TG G-EP相比,显著提高了GT然而TG显著增加41%的速度相比,G-HL GT。在肝级别明显降低TG的订单的14%和18%分别G-HM和G-EP关于G-HL和增加最后一组g t和27%相比,TG的速度明显高于在G-HM相比GT, GT和G-EP之间的差异不显著(图1)。

甘油三酯和总胆固醇脂质中重新分配分数

结果表明,等离子体TG分布以类似的方式之间的团体霍奇金淋巴瘤,HM EP,和超过40%的等离子体TG是由低密度脂蛋白,然而各种分数的比例之间的差异不显著的脂蛋白组t .血浆CT观察到主要由VLDL和低密度脂蛋白四组,4组之间没有显著差异指出CT的比例重新分配的脂蛋白的水平(图2)。

脂质peroxydation水平

在等离子体级别TBARS内容明显降低在HM集团与其他群体相比,然而在肝组织TBARS组显著的高于HL GT(相比图3和图4)。

HM集团TBARS明显减少,并不代表GT的显著差异。但是没有显著减少指出集团EP与霍奇金淋巴瘤。

讨论

本实验研究的目的是突出墨鱼hydrolysat肌肉的力量和纯墨水减少胆固醇鼠报高脂肪的饮食。J30后实验结果表明HM和EP效果在把食物和动物的重量。肝脏的相对重量也没有影响。这些结果是在协议与Hosomi et al。19),观察动物的体重没有区别,把食物或相对体重的肝脏和脂肪组织通过比较两个制服团体,一个包含10%的阿拉斯加鳕鱼肽和10%的酪蛋白,另20%的酪蛋白。

血浆胆固醇的速率是心血管疾病的主要危险因素。的崛起的胆固醇是唯一一个能够导致动脉粥样化板的发展,即使没有其他风险因素。修改血浆脂质可以影响利率的组成、内容和血浆脂蛋白的子类的分布。我们的结果没有显示的积累和血浆总脂质在肝脏组织。

然而内容在HM组肝脏总胆固醇降低,尤其是在EP组。这些减少的速度CT可以归因于生物活性肽。

类似的研究表明,胆固醇代谢的鱼hydrolysat作为监管机构,研究Hosomi et al (19),减少肝脏和血浆CT观察到的内容在老鼠受到四个星期的饮食阿拉斯加鳕鱼hydrolysat,最近同一作者(19)指出,贡献是thihydrolysat降低血清和肝脏CT的内容鼠纯种消费hypercholesterolemic饮食。此外,Wergedahl et al。20.)报告说,吃鲑鱼hydrolysat后12天的鼠纯种降低胆固醇水平与对照组相比。

四个星期后高水平的甘油三酯指出在HL组与组相比,由于建立饮食中的脂肪(30%)。30天后补充在HM和EP,等离子TG的值降低,接近那些GT。这些结果的协议与本哈立德et al。14)和Liaset et al。21]。

在这项研究中,等离子体肝磷脂的含量相比减少了HM组和EP。这种减少的PL的结果减少浓度在PL的VLDL和HDL3可能欠他们的低由肝脏合成。

我们的结果表明,等离子体,减少肌肉hydrolisate和总胆固醇的内容主要是由于纯粹的墨水低在C-VLDL和C-LDL内容。这些结果加入本哈立德的et al。14]]和Hosomi et al。19)指出减少分数低密度脂蛋白的胆固醇。在这项研究中,减少C-VLDL和C-LDL在回答治疗EP和HM主要反映部分低肝脏胆固醇的浓度。

肝脏是参与VLDL的新陈代谢。减少或增加的内容在肝甘油三酯在TG生成贫困VLDL或丰富。TG-VLDL让显示的内容相似,同样的肝脏TG合成或脂肪酸的分解代谢。

我们的结果关于TBARS等离子体在协议与Durak et al。22)指出,过度的贡献在胆固醇似乎并没有影响到抗氧化活性主要抗氧化酵素由超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的异常活动paraoxonase却降低了。

同时肝水平结果加入Anilla和Vijiyalakshmi [23),他指出,富含胆固醇的饮食影响抗氧化系统的动物进一步增加peroxydation脂质和自由基的形成。

Erdmann等的研究。11]Shahidi中表明,蛋白质hydrolysats可以作为螯合剂的金属,或脂质peroxyation的抑制剂。

本哈立德et al。14]]在工作中注意到adipeptide (Met-Tyr)源于蛋白质的hydrolyase沙丁鱼刺激两种抗氧化蛋白的表达细胞有什么后果的防止氧化多不饱和脂肪酸的袭击负责。

抗氧化活性的生物活性肽也会授予根据Erdmann et al。11]Shahidi,钟在疏水性氨基酸可以作为捐赠者的质子函数羟化的情况下大部分的抗氧化剂。

如果许多作品研究的影响的鱼类的蛋白质或其hydrolysat在大鼠脂质peroxydation消费hyperlipid饮食没有研究关注纯墨鱼的墨水。

结论

鉴于其结果,墨鱼的合并肌肉hydrolysat和纯墨水在饮食计划可以有效的预防战略,甚至改善血脂异常和限制radicalaire攻击,将允许什么来防止心血管并发症hypercholesterol水平。

所以hydrolysat肌肉和墨水的墨鱼应该重视其营养和治疗显著的兴趣。还需要进一步的临床研究来阐明这一假设。

引用

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