研究

，卷:15(2)DOI: 10.37532/0974-7435.2019.15(2).182

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紫外分光光度法测定制剂中柠檬酸西地那非片含量的方法建立及验证

*通信:

Alrasheed AW Mohammed，苏丹喀土穆大学Shambat校区中央实验室，电子邮件: (电子邮件保护)

摘要

本文介绍了分光光度法测定枸橼酸西地那非中枸橼酸盐含量的优化、验证及应用制药配方(平板电脑)。本文建立了一种简便、快速、准确、灵敏的分光光度法，并进行了验证。该方法是以柠檬酸西地那非在稀释盐酸中解冻为基础的直接分光光度法。测定柠檬酸西地那非的最大吸收波长为295 nm。在此优化条件下，啤酒的性能得到了提高法律浓度范围为5.0 ~ 40.0 μg/ml;

简介

西地那非(SC)是吡唑啉-嘧啶酰-甲基哌嗪类化合物。它是5-[2-乙氧基-5-(4-甲基
哌嗪^－1-基磺基苯基^－1-Methyl-3-propyl^－1， 6-二氢- 7hpyrazolo [4,3-d]嘧啶-7-酮，具有经验性
公式C₂₂H_30.N₆O₄S和分子量661.71 [1］．柠檬酸西地那非为白色至灰白色结晶粉末[2］．它不仅用于勃起功能障碍也可以治疗肺动脉高血压［3.］．

在健康的志愿者中，西地那非被广泛吸收;然而，快速的首过代谢将绝对生物利用度限制在约40%。Cmax在30以内^－1空腹口服20分钟，终末半衰期约4小时[4］．

枸橼酸西地那非最常见的副作用是头痛、面部潮红和胃部不适。［5］．

其结构公式为图1．

柠檬酸西地那非，一种特异性磷酸二酯酶-5抑制剂[6，被越来越多地用于肺动脉高压怀孕期间[7］．柠檬酸西地那非也正在成为治疗子宫内生长迟缓和早产的潜在候选药物[8］．其在胎儿胎盘循环中的作用尚不清楚[9］．我们的目的是确定磷酸二酯酶-5是否存在于人类胎儿胎盘循环中，并表征柠檬酸西地那非在这种循环中的作用和作用机制[10，11］．

验证被定义为发现或测试某事的真实性。验证分析方法的目的是证明该方法适合其预期目的[12］．

分析方法在以下情况下需要验证、验证或重新验证:

•在常规测试中初次使用前

•调到其他实验室时

•当该方法验证的条件或方法参数发生变化时(例如，具有不同特性的仪器或具有不同矩阵的样品)，且该变化超出了该方法的原始范围[12］

材料与方法

样本的收集

所有制药配方样本取自当地市场。

试剂和溶液

所有使用的化学品都是分析级(AG)和光谱有机溶剂。用去离子水配制溶液。柠檬酸西地那非工作标准品，(纯度99.57%)购自Rakshit药物私人有限公司。盐酸(SDFCL，印度)，sp.gr:1.18 g/ml，百分比:37.5%

仪表

在这项工作的过程中使用了下列仪器、设备或仪器。

紫外可见分光光度计模型紫外线^－1800 (SHIMADZU, KYOTO, JAPAN)配有1 cm石英样品，用于定量分析，在1 cm石英中记录被试溶液和参比溶液的吸收光谱细胞在许多λ max。傅立叶变换红外分光光度计，(岛津，京都，日本)，模型红外光谱- 8400 s。电子灵敏天平(岛津，京都，日本)，A × 120型，容量120克，可读性0.1毫克。

0.1M盐酸溶液的制备

准确取8.0 ml浓盐酸，转移到1000 ml容瓶中，容瓶中约有300 ml去离子水，混合均匀，冷却，用相同稀释剂混合，完成容积至标记。

紫外分光光度法测定柠檬酸西地那非溶解度研究SIL在(28±2)°C下测定溶解度。将过量的药物装入25 ml容积瓶中，每个瓶中分别装有不同浓度的稀释盐酸，如(0.01,0.1,0.5,1.0)M，根据药物的溶解度和药物的高强度(吸光度)选择合适的柠檬酸西地那非(SIL)溶剂(0.1 M HCl)。

测定最大吸收量

柠檬酸西地那非最大吸收波长(λ max)的测定:准确称量枸橼酸西地那非工作标准品10 mg，转移到100 ml容量瓶中，在量瓶中加入5.0 ml 0.1N HCl，超声溶解2分钟。将溶液放在一边冷却，用相同的溶剂完成标记，取100 μg/ml股票适当稀释后可得到(0.6、1.0、10.0、25.0和50.0)μg/ml的SILC。该溶液在200-800 nm的光谱模式下进行扫描。从得到的药物光谱中，SIL的λ max在295 nm处测定。

枸橼酸西地那非安慰剂最大吸收波长(λ max)的测定:从片剂安慰剂PLC组合物的总重量274.83 mg中准确称出10.0 mg PLC枸橼酸西地那非安慰剂片组合物的重量，转到100 ml容积瓶中，在PLC的重量上加入最小量(约5.0 ml) 0.1N HCl，超声溶解2.0分钟，溶解，室温冷却，用相同的溶剂完成至标记，给予100 μg/ml股票经适当稀释后可得到(5.0、10.0、25.0、50)μg/ml的PLC。该溶液在200-800 nm的光谱模式下进行扫描。从PLC组成的光谱中，在271 nm的柠檬酸西地那非药物λ max (图2）.

0.1N盐酸(柠檬酸西地那非溶剂)最大吸收波长(λ max)的测定:3.5 ml 0.1N HCl在200-800 nm范围内用紫外分光光度计扫描，发现稀释酸的最大吸收波长为208 nm (图3）.

标准的制定股票柠檬酸西地那非溶液用于紫外分光光度计分析

取枸橼酸西地那非工作标准品(纯度为99.57%)50 mg精确称量，溶于0.1M HCl中，超声60秒溶解，定量转移至50 ml容积瓶中，用相同溶剂完成容积至标记，混合均匀，取1.0 ml该溶液转移至100 ml容积瓶中，用0.1M HCl完成容积至标记，得到(15,20,25,30,35,40,105)μg/ml，在295 nm处测定吸光度。

紫外分光光度计分析用柠檬酸西地那非样品溶液的制备

相当于50毫克的柠檬酸西地那非从20片精细粉末柠檬酸西地那非片药物称量后，用0.1M HCl溶解，超声60秒溶解，定量转移到100ml容量瓶中，用相同溶剂量至标记处，混合均匀后用Whatman 41号滤纸过滤。取1 ml溶液倒入100 ml容量瓶中，用0.1M HCl稀释至标记处，取5.0 μg/ml，在295 nm处测定吸光度。

结果

方法开发

该方法是以柠檬酸西地那非在稀释盐酸中解冻为基础的直接分光光度法。

枸橼酸西地那非STD的鉴别

以下柠檬酸西地那非的光谱在3240 cm处表现出特征吸收带^－1， 1627厘米^－1， 1620厘米^－1， 1180厘米^－1， 1100厘米^－1， 3600厘米^－1， 828厘米^－1，分别为柠檬酸西地那非的N-H、C=O、C=C、C-O、C- n、O- h和芳香取代带。

SIL片剂的红外吸收光谱由spectrum 100傅立叶变换红外衰减全反射光谱仪(SHIMADZU 8400s)生成。在波数4000-418 cm范围内获得的光谱^－1分辨率为4厘米^－1描述在图4．所得光谱的波段分配总结在表1(以下13］．

表1:少报欺凌经历在学生中的分布情况?人口变量。

方法

对于分析方法的验证，人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH)的指南建议完成准确性测乐动KENO快乐彩试、精密度、特异性和方法的线性度。人用药品注册技术要求(ICH) Q2B, 1996，分析程序和方法的验证[12］．

测定最大吸收量

药物溶剂(0.1N HCl)最大吸收光谱:SILC溶剂(0.1 N HCl)的吸收光谱如图所示图5在λ=208 nm处的最大吸光度为0.1 N HCl，该最大吸光度表明，在扫描光谱峰区，药物辅料与被研究药物有效成分之间没有任何干扰，而稀释盐酸(0.1 N)的吸收光谱显示无吸收。λ=208 nm处的峰被选为溶剂的最大λ，因为它具有最高的吸收强度，由ε值(表2）.

表2:药物溶剂(0.1 N HCl)的多波长吸光度值显示出许多不同的吸光度值。

药物辅料(安慰剂)的最大吸收光谱

SIL辅料(安慰剂)的最大吸收光谱图6最大吸光度λ=271 nm，该最大吸光度表明在扫描光谱峰区域，药物辅料与被研究药物有效成分之间没有任何干扰，而安慰剂的吸收光谱显示没有吸收。λ=271 nm的峰被选为安慰剂的最大λ，因为它具有最高的吸收强度，如ε值所示(表3）

表3:SIL药物辅料(安慰剂)的吸光度值。

药物标准溶液的最大吸收光谱

SIL标准品在0.1 N HCl溶剂中的吸收光谱(图7-9)在λ=295 nm处表现出最大吸光度，不同浓度(25、33.3和50)μg/ml时的最大吸光度，而SIL的吸收光谱在扫描光谱区无吸收峰。选择λ=295 nm处的峰是因为它具有最高的吸收强度，由ε值(表4 - 6）.

表4:SIL前药的多波长吸光度值为25 μ g/ml, 295 nm，作为纯SIL的最大吸光度，因为它具有最高的吸收强度。

表5:SIL的多波长吸光度值为33.33 μ g/ml, 295 nm被选为纯SIL的最大吸光度，因为它具有最高的吸收强度。

表6:SIL前药的多波长吸光度值为50 μ g/ml, 295 nm为纯SIL的最大吸光度值，因为它具有最高的吸收强度。

特异性和选择性

特异性:特异性是指在样品基质中可能存在的成分的情况下，明确评估分析物的能力，以证明药物配方方法的特异性[14］．不同配方产品中使用的辅料均不干扰药物峰，因此，该方法是特异性柠檬酸西地那非。为了进一步证实该方法的特异性，我们在200 ~ 400 nm范围内对加标药物进行了紫外扫描，对比纯药和加标药物在药物分析波长处的吸光度，没有发现明显变化。

灵敏度:根据ICH Q2 (R1)基于信噪比方法的建议，确定了检测极限(LOD)，其中信号高噪比为3，对于定量极限(LOQ)，信号高噪比为10。

线性，LOD, LOQ和范围

线性:分析方法的线性性是指其选择测试结果的能力，该测试结果直接或通过定义良好的数学变换，与给定范围内样品中分析物的浓度成正比。在预期浓度范围内观察到该方法的线性，证明其适合于分析。在所有情况下，相关系数(r2)为0.999，截距值小于100%测试浓度响应的40，表明分析物吸光度浓度与样品吸光度之间存在函数线性关系(图10）.

LOD:检测限(LOD)是在规定的实验条件下，样品中可检测到的分析物的最低量，但不一定是定量的。它可以表示为给出吸光度值的浓度。枸橼酸西地那非在对照品、制剂中检出下限为2.40 μg/ml，检测下限为1.60 μg/ml [15］．

定量限:定量限(LOQ)是在规定的实验条件下，以可接受的精度和准确度测定样品中分析物的最低量。吸光度值可作为该方法的LOQ [15］．LOQ < 2.0 μg/ml。

**检测限和定量限通过计算确定[16］

**LOD=(响应的SD /斜率)× 3.3

**LOQ=(响应的标准差/斜率)× 10

准确性:分析方法的准确性是指用该方法得到的测试结果与真实值的接近程度。在配方产品中对药物进行测定的情况下，准确度可以通过将分析方法应用于在方法范围内添加了已知量分析物的药品组分来确定。如果不可能获得所有药品成分的样品，则向药品中添加已知数量的分析物(即加入峰刺)可能是可以接受的。在我们的研究中，采用了后一种技术，在药品中加入了柠檬酸西地那非。

精度:精密度是指分析方法在正常操作条件下的再现性或可重复性的程度。该方法通过了6次重复测量在100%测试浓度下吸光度值的%RSD测定的重复性试验。

强度:为了确定所提出方法的坚固性，在同一实验室由两名分析人员对测试样品溶液进行了6次重复分析，比较了测量结果的%RSD。

鲁棒性:通过改变溶剂、温度和氧化剂对吸光度的影响来测试稳健性(表7）.

表7:本研究综述。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

参考文献

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