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生化分析的血淋巴Antheraea mylitta

*通信:

快乐联合国开发Sharma Hanjabam、生物科学、可爱的职业大学,旁遮普,印度,电话:1800 102 4431;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

本研究的目的在“生化分析Tasar蚕血淋巴的”是搜索基线方法和手段提高丝性能属性生成需要的农村生计外国收入的就业和收入。Antheraea mylitta特鲁里街与鸡蛋是一种完全变态的昆虫,幼虫、蛹茧,成虫在它的生命周期阶段。有五个幼虫龄为主要宿主植物像Arjun(榄仁树属阿诸那),峨山(Terminaliatomentosa),萨尔(Shorearobusta)分开的寄主植物次要的。幼虫狼吞虎咽地吃它们的寄主植物的叶子和5日龄幼虫旋转周围的丝绸和形式的茧柞蚕丝是步履蹒跚。蚕被用作生产bio-factory有用的丝蛋白是天然的聚合物和可生物降解,反应性官能团,开放可能性连接与其他作物聚合物用于控制输送系统。

关键字

血淋巴;柞蚕丝;SDS;Trehaelose;蛋白质;幼虫;蚕

介绍

丝绸是传统的农业产品的主要供应商和亚洲地区丝绸在世界市场。在所有的丝绸生产国,中国丝绸出口的大部分占世界。然而,亚洲地区的丝绸生产国正经历重大的变化在他们的生产模式。国家地区的先进的养蚕,等日本和韩国,经历了一个明显的不可逆的丝绸产出水平下降。与此同时,其他国家已经意识到养蚕的潜在好处,如提高外汇通过就业收益以及减轻农村贫困和收入产生的活动。许多发展中国家的地区,因此正在密集的努力恢复他们的丝绸行业,虽然一些最近首次在养蚕。

像其他常见的生物医学纺织品如聚酯、丝绸包含各种极性官能团可能增强抗生素的吸收。丝绸是环保,可降解聚合物具有优良的吸水和deabsorbing属性。丝胶和蚕丝蛋白两种蛋白质共同使丝纤维,进而由血淋巴中可溶性蛋白质。血淋巴的仓库是许多生化药剂成分作为原料的合成丝胶和蚕丝蛋白。丝胶和蚕丝蛋白最近领域的探索药物输送系统。

蚕丝蛋白被用于生物医学应用和具有良好伤口愈合属性。丝胶涂粉用作化妆品皮炎抑制剂作为伤口保护膜,指甲化妆品和嚼口香糖。丝蛋白是一个与抗凝血生物材料的属性。丝素蛋白是一种用于人工生物材料皮肤和其他医疗应用程序。因此,丝蛋白分泌Tasar蚕被用于生物医学应用以来,人类很长时间。因此,柞蚕丝在纺织行业有很大作用,环境保护,野生动物管理、生物医学应用、制药和收入外汇收入。考虑这些蚕的意义,本研究在“Tasar蚕血淋巴的生化分析”。丝绸是一种天然蛋白质纤维,某些形式的可编织成纺织品。丝绸的蛋白质纤维生产的主要是由蚕丝蛋白和某些昆虫幼虫形成茧。最著名的丝绸从家蚕幼虫的茧家蚕在人工饲养驯化饲养。丝绸的闪闪发光的出现是由于三角支持丝纤维的结构,它允许丝绸折射射入光线在不同的角度,因此,生产不同的颜色。丝绸是由一些其他昆虫,但通常只蛾毛虫的丝绸被用于纺织制造业。有一些研究其他丝绸,在分子水平上不同。丝绸是低密度比棉花、羊毛或尼龙,是高度水分吸收剂,能吸收高达三分之一的自身重量的水分没有感觉潮湿。

丝绸生产

丝是一个连续长丝纤维蚕丝蛋白组成的蛋白质,从两个唾液腺分泌每个幼虫的头部,和一个叫丝胶的胶,水泥两丝在一起。丝胶被放置的蚕茧热水,从而使丝纤维和决心摇摇欲坠。

丝绸的特性

丝绸是一种流行的服装面料由于其独特的性质。丝绸是最奢华的面料,最舒适的面料,最吸水的布料(等于羊毛),最好的织物褶皱,最好的面料颜色,能够最大的光泽,有最好的“手”等。这些因素,使织物更受欢迎。面料在夏天凉爽,冬天温暖。

物理性质

丝绸纤维主要是由蚕丝蛋白的80%,蛋白质的性质和丝胶的20%,否则称为丝绸口香糖。丝纤维,具有良好的抗拉强度,它可以承受巨大的压力。丝绸是最强的天然纤维,温和的耐磨性。扔纱线的强度主要是由于连续纤维的长度。绢纱虽然强是弱于丝长丝。丝绸纤维是一种弹性纤维,可以从1/7延伸到前原长度的1/5。它会返回到原来的大小,但逐渐失去了它的弹性。这就意味着织物会减少下垂和绑定导致穿舒适。丝绸有责任和柔韧性,得益于它的弹性和韧性,使它出色的耐久性。丝绸是一种蛋白质纤维和羊毛的非导体的热量类似。 This makes silk suitable for winter apparel. Silk fabrics being protein in nature have good absorbency. The absorptive capacity of the silk fabric makes comfortable apparel even for warmer atmosphere. Fabrics made from silk are comfortable in the summer and warm in the winter. Silk fiber can generally absorb about 11 percent of its weight in moisture, but the range varies from 10 percent to as much as 30 percent. This property is also a major factor in silk’s ability to be printed and dyed easily. Silk fabric does not attract dirt because of its smooth surface. The dirt, which gathers can be easily removed by washing or dry cleaning. It is often recommended for the silk garments to be dry-cleaned. Silk fabrics should always be washed with a mild soap and strong agitation in washing machine should be avoided. Silk water – spot easily, but subsequent washing or dry cleaning will restore the appearance of the fabric. Silk fabrics are subjected only to normal shrinkage which can be restored by ironing. Crepe effect fabrics shrink considerably in washing, but careful ironing with a moderately hot iron will restore the fabric to its original size. Silk is sensitive to heat and begins to decompose at 330°F (165°C). The丝绸面料因此必须解决当潮湿。丝绸织物接触日光减弱。生丝绸比脱胶丝耐光。丝绸不会发霉,除非了些时间,在一个潮湿的状态或在极端条件下的热带潮湿。丝可能受到甲虫幼虫或穿飞蛾或地毯。汗水和阳光减弱和黄色丝绸面料。丝绸本身恶化和颜色影响导致染色。旁边的衣服穿皮肤每次穿后应清洗或清洗。

化学性质

如羊毛,丝绸是恶化与氯漂白剂如次氯酸钠。然而,温和的漂白剂的过氧化氢或硼酸钠/可用于丝绸。丝绸是碱金属不如羊毛敏感,但它可以被破坏,如果浓度和温度很高。温和的肥皂或洗涤剂的温水是明智的。浓无机酸溶解丝速度比羊毛。有机酸不伤害丝绸。吸丝具有良好的性能,因此对染料具有良好的亲和力。染丝绸颜色很快在大多数情况下,但其耐光不令人满意。

蛋白质主要存在于丝绸

蚕丝蛋白

蚕丝蛋白的蛋白质层由反平行的β表。其主要的结构主要由氨基酸序列(Gly-Ser-Gly-Ala-Gly-Ala)复发_n。高甘氨酸(在较小程度上,丙氨酸)内容允许紧床单的包装,导致丝绸的刚性结构,不能拉伸(抗拉强度)。刚度和韧性的组合使它成为一个材料应用在多个领域,包括生物医学和纺织生产。蚕丝蛋白被安排在三个结构,称为丝绸I, II, III。丝我是蚕丝蛋白的自然形式,从家蚕丝腺释放。丝二世是指在绢蚕丝蛋白分子的排列,有更大的力量和通常用于各种商业应用。丝绸III是一种新发现的蚕丝蛋白的结构。丝绸三世蚕丝蛋白的形成主要是解决一个接口(即空气界面,油水界面,等等)。

丝胶

丝胶是精致从蚕的身体(绢丝腺)、豆荚(豆荚壳、瓦丝)和丝绸。有18种氨基酸在丝胶其中丝氨酸和天冬氨酸含量最高。除此之外,它还有其他人体所需的氨基酸。这是一个很好的蛋白质。因为在丝胶,氨基酸有亲水侧组80%左右,约1/3的丝氨酸的吸水率比甘油高50倍。丝胶,化妆品的原料,具有良好的吸湿性和防腐能力。丝胶蛋白能表面形成一层薄膜皮肤和头发的水皮肤可以保存,然后伤害皮肤角质是可以避免的。丝胶的水分保存,因为它含有丝氨酸,NMF的最重要的氨基酸之一。也有效地控制活性氧的发生、因素分解的保护皮肤的表面,以及酪氨酸酶,导致皮肤雀斑。因为它是温和的皮肤,是一种很好的保湿剂,保护者和美白,吸引注意力皮肤保健成分。

回顾文献

研究热带蚕血淋巴的生化研究Antheraea mylitta研究了(1]。丝腺的形态变化,结构和功能进行了研究和报道2,3]。后部丝腺的大鼠细胞和液体在印度Tasar桑蚕丝绸Antheraea mylitta特鲁里街已报告(4- - - - - -6]。研究生化、生理和电泳淌度函数Tasar蚕血淋巴的发展阶段,结构和秘书活动的热带蚕指出7- - - - - -10]。各种生化研究显示周期性变化的总浓度血淋巴中氨基酸和蛋白质变形在昆虫11- - - - - -15]。海藻糖是主要和新陈代谢活跃,非还二糖在昆虫血16- - - - - -21]。的报告说,昆虫血液或血淋巴的仓库各种蛋白质和酶(22- - - - - -25]。由于经济和商业意义,丝绸产量已刺激工人调查丝绸生产机制,参照丝腺(途径)。在印度,各个方面包括non-mulberry丝绸文化的技术进行了研究和分类29日- - - - - -41]。印度次大陆是non-mulberry蚕和他们的家庭抚养,因为极端的气候条件变动。在non-mulberry丝绸,Tasar蚕饲养养蚕活动是最重要的。丝腺的结构和功能细胞和热带的semi-domestication Tasar蚕是真实的领域的贡献Tasar养蚕(42,43]。可溶性蛋白质的定量和定性变化的各种组织包括热带蚕血淋巴的的发展阶段答:Mylitta也解释(44- - - - - -47]。一些贡献的定量和定性变化蛋白质的各种组织的热带蚕,Antheraea mylitta是(48- - - - - -50]。蓖麻蚕蛋白质和总糖含量的变化,Philosomiaricini在5^th龄发展评估。在血淋巴蛋白质的电泳研究发展概况,脂肪体和卵巢的红色棉Dysdercus cengulatus(51- - - - - -56)进行了讨论。众所周知,在昆虫血淋巴细胞外液唯一拥有不同的功能(57]。这是大多数的生化成分的水库几乎每一个生理活动所需的昆虫。因此,血淋巴的构成的变化反映了inorphogenic和生物化学变化发生在昆虫组织。电泳研究发展概况的报告在血淋巴蛋白质,脂肪体和卵巢的红色棉虫Dysdercus koenigii也检查了。丝腺的不同方面已经被工人数量(好了58]。昆虫血淋巴执行几个生理功能如免疫、运输、存储等。59]。昆虫需要作为主要的碳水化合物燃料为他们的成长和发展被剥夺主要从饮食。的Tasar蚕Antheraea mylitta保存足够的数量能源储备在幼虫阶段利用蛹化和成人阶段。上的先锋作品主题进行了的出现生物技术和现代主题像DNA重组技术使让蚕杂交或自适应不断变化的环境条件。生物技术工具和技术的应用是生产或丝绸和喂养的幼虫龄的增加。少年激素模拟(JHA)是已知的昆虫的幼虫持续时间延长,这些都是用于提高蚕丝绸生产家蚕。可用的文学上的“生化分析Tasar蚕血淋巴的”只有21的第一个十年^圣世纪。在进一步调查叶可溶性蛋白质含量不同的年龄组t·阿诸那的主要寄主植物,Tasar蚕(突出显示60]。血淋巴的内生20-hydroyeedysome水平non-dispense滞育和滞育是注定一代又一代的Tasar蚕,Antheraea mylitta。的净化特性和immunolization一部小说蛋白酶从Tasar蚕血淋巴的抑制剂Antheraea mylitta突出显示研究[61年]。类似性质的工作一直在进行的各种调查柞蚕丝虫。可溶的蛋白质含量叶子的榄仁树属阿诸那的主要寄主植物柞蚕丝蠕虫进行了分析和比较各种环境因素(61年]。一系列有价值的作品在中国Tasar蚕与环境因素可能是第一个真实的知识Tasar文化(62年- - - - - -67年]。的筛选相关文献显示,Tasar蚕饲养技术及其意义已经意识到本世纪的开始。文献调查显示Tasar蚕的环境因素。一个完整的回顾进化节肢动物的丝绸。利用电泳和抗原抗体沉淀方法很多,不同分数的蛋白质数量已确定,这些取决于昆虫发展阶段以及其淹灌。主要的血淋巴蛋白质迄今为止特征包括存储蛋白质,脂蛋白,卵巢蛋白,抗菌蛋白,收蛋白酶抑制剂,不同的酶,色蛋白质,蛋白质和金属绑定激素载体蛋白。最引人注目的特性之一的发展holo-metabolous昆虫是定量重要的一类多肽的合成称为贮藏蛋白质。这些蛋白质组成的多肽在幼虫血淋巴占总数的80%左右的血淋巴蛋白质特征的异常高的芳香族氨基酸含量即酪氨酸和苯基胺。昆虫通常存储蛋白质高分子量五个一,化合物分子70 kDa的子团结90 kDa。存储蛋白质似乎螺旋适应昆虫蜕皮蜕变和繁殖。脂肪体和心包细胞导致血淋巴蛋白池。相当大的工作已经完成对可溶性蛋白在昆虫的估计,但文学与柞蚕丝虫的血淋巴蛋白质的分析是稀疏的工作除外燃料生物化学家(图。1- - - - - -8)。

总可溶性蛋白估计

可再生的试验的孵化时间是非常关键的。反应也依赖于酸碱和工作范围9.0 - 10.5是至关重要的。寄主植物的叶子在蚕的主要蛋白质来源(表1- - - - - -8)。这些昆虫的蛋白质的质量和数量取决于年轻,semi-mature和成熟的寄主植物的叶子。消化后,氨基酸和蛋白质存在于叶进入血淋巴。在昆虫血淋巴,唯一的细胞外液浆血细胞的暂停。等离子体,有不同的功能,如免疫,运输和沐浴的所有组织构成5%到40%的总存储产品所需细胞昆虫体重和包含许多有机物质,调节新陈代谢。因此,生化有机/无机成分的变化在血淋巴控制监管职能。血淋巴的构成反映了昆虫的形态发生变化,几乎所有的无机成分如电解质或离子,在体内生物化学变化对昆虫的磷酸盐和有机成分像自由氨基周围环境。高温影响近酸、蛋白质、脂类、碳水化合物、尿酸等。所有生物过程包括蛋白质的结构取决于食物来自寄主植物的蚕。寄主植物Arjun /峨山叶子是蛋白质和其他必需营养素的来源Tasar蚕。是相关知道可溶性蛋白存在于不同发育的血淋巴的柞蚕丝虫龄预测的质量和数量丝绸纤维合成。 The objective of the present study is to quantify the soluble protein present in the haemolymph of the pupal stage of theAntheraea mylitta。考虑这样的目标,目前的研究已经进行评估和不同浓度的蛋白质。比较血淋巴的生化分析确定另一个类似的工作蛋白质含量寄主植物的叶子榄仁树属阿诸那,Tasar蚕的主要寄主植物也分析和比较各种环境因素。分析后的总蛋白质含量、糖含量(trahelose)现在是进一步研究和讨论。因此,不同的方法被用来分析不同生物组件出现在血淋巴的Antheraea mylitta。

表1:标准曲线的制备的蛋白质。

表2:显示了OD和血淋巴蛋白浓度(示例)。

表3:未知的蛋白质的分子量。

表4:显示相对前面(mm)的标准蛋白质和示例。

表5:显示的结果样例的相对分子量的蛋白质。

表6:蒽酮试剂的数量的估计方法。

表7:表格显示糖含量的总量。

原则:酚组酪氨酸和色氨酸残基在蛋白质(氨基酸)将产生一个蓝色紫色颜色复杂,与最大吸收波长660纳米的地区,与Folin-Ciocalteau试剂由钨酸钠、钼酸盐和磷酸盐。因此,色彩的强度取决于这些芳香族氨基酸的数量,因此,改变不同的蛋白质。大多数蛋白质估算技术使用牛血清白蛋白(BSA)普遍作为标准蛋白,因为它的低成本、高纯度和可用性。该方法敏感性下降到10μg /毫升和可能是最广泛使用的蛋白质测定尽管它只是一个相对的方法,从三羟甲基氨基甲烷缓冲液受到干扰,EDTA、非离子和阳离子去污剂,碳水化合物。

方法

确定可溶性蛋白质含量血淋巴中

血淋巴中收集pre-chilled包含几个试管的硫脲晶体通过减少幼虫的第一腹足。血淋巴是条件。血淋巴离心机在3000 rpm 10分钟在4°C和浮在表面的蛋白质被用于蛋白质估计。蛋白质估计是洛瑞方法的帮助下完成的。以下试剂所需的总可溶性蛋白的评估:

1。(BSA)解决方案(1毫克/毫升)。2。分析试剂:50毫升2%的碳酸钠与50毫升0.1 N氢氧化钠混合解决方案。CuSO 10毫升的1.56%₄混合着草皮10毫升的2.37%。钾tartarate解决方案。分析试剂混合2毫升(解决方案B)与100毫升(解决方案)。解决方案B: 2通用Na₂有限公司₃和0.4通用氢氧化钠量占100毫升蒸馏水。解决方案C:解决方案(1毫升)+ B(50毫升)。解决方案D: 0.25毫升货代(刚做好的)。

标准误差的计算

(1)

n - 1, A =数值,A =平均值,n =总没有。的观察。

确定可溶性蛋白质含量榄仁树属阿诸那的叶子

这些作品是符合当前的研究。的方法电泳用于确定可溶性蛋白质含量这种植物的主要柞蚕丝蠕虫的主机。试剂使用:丙烯酰胺,Bisacrylamideis (N, N’methylmetrisacrylamide)、三羟甲基氨基甲烷(2-hydroxymethyl-1,探索)液、SDS、tem、铵/硫酸,β-巯基乙醇,(2-mercaptoethanol),甘油,Bromophenolblue,甘氨酸、盐酸(HCl) Dithithreitol(德勤)。

股票的解决方案:(一)2 M-Tris盐酸(pH值8.8),100毫升(b) 1米三羟甲基氨基甲烷HCl液pH值6.8,100毫升(c) 10% w / v SDS, 100毫升,储存在室温下(w / d) 50% v甘油,100毫升(e) 1% w / v溴酚蓝、10毫升。

工作解决方案:(1)解决方案(丙烯酰胺股票解,100毫升)30% (w / v)和丙烯酰胺0.8% (w / v) Bisacrylamide。0.8到29.2 g丙烯酰胺和通用bisacrylamide 100毫升添加蒸馏水,搅拌至完全溶解。在引擎盖下工作并保持丙烯酰胺溶液覆盖保鲜膜,直到丙烯酰胺粉完全溶解。

(2)解决方案B (4 x分离凝胶缓冲区,100毫升)75毫升2 M盐酸三(pH值8.8)-1.5米,4毫升10% sds -0.4%, 21毫升H₂O;

(3)解决方案C (4 x叠加凝胶缓冲区,100毫升)50毫升1 M盐酸三(pH值6.8))-0.5米,4毫升10% sds -0.4 M, 46毫升H₂O;

(4)解决D(10%铵/硫酸,5毫升)0.5通用铵硫酸盐,5毫升H₂O;

(5)解决方案E(电解缓冲区,1升)3 g三,14.4 g甘氨酸,1通用SDS, H₂O使1点燃;

(6)5 x样本缓冲区,10毫升(0.6毫升1米三羟甲基氨基甲烷HCL液pH值6.8,5毫升50%的甘油,2毫升10% SDS, 1毫升1%溴酚蓝,0.9毫升H₂O。

凝胶铸造:水倒覆盖分离凝胶。这些解决方案后,C和水混合在一个小瓶。per-sulfate铵和tem添加和混合轻轻通过反相容器。之后,吸管叠加凝胶溶液转移到凝胶分离直到溶液达到前板的顶部。然后小心地插入梳子在凝胶三明治,直到牙齿达到前板的顶部。离开叠加凝胶聚合。叠加凝胶聚合后,取出梳子小心。那个地方后,凝胶电泳室。然后添加电泳缓冲区内部和外部热源,确保凝胶的顶部和底部都沉浸在缓冲区。

样品制备:电泳的样品分子量测定丝胶和蚕丝蛋白单独准备。丝胶是亲水的性质。因此,他们在水中溶解性是不同的。丝胶溶解提取了丝线在热水维持在80°C水浴。丝胶提取是正常温度,然后沉淀在寒冷的柠檬酸的帮助下最终的浓度为5%。离心沉淀丝胶是颗粒状。球被保留在上层的丢弃。清除脂质,小球被re-suspended丙酮/乙醇溶液和离心机低速度。上层清液含脂质又丢弃。丸是resuspended磷酸盐缓冲剂和储存在4°C进行进一步的评估。丝线丝胶切除后用于蚕丝蛋白的提取。水煮沸丝线用热水洗了3次(80°C)和用于蚕丝蛋白提取。蚕丝蛋白,由于疏水在自然界中,不溶于水。从丝线中提取了蚕丝蛋白溶解在冰醋酸(10%)。丝线浸泡在冰醋酸溶液(10%)和漩涡在正常条件下约5分钟。溶解蚕丝蛋白沉淀的帮助下冷柠檬酸(最终浓缩的。的5%)。 The precipitated fibroin was pelleted by centrifugation. The pellets were retained while supernatant was discarded. For the removal of lipids, the pellets were resuspended by Acetone/Ethanol solution and centrifuged at低速度。丸是resuspended磷酸盐缓冲剂和储存在4°C进行进一步的评估。

示例加载:冲洗注射器用于装载样品几次蒸馏水。插入注射器的约1毫米到2毫米底前交货。后与蒸馏水冲洗注射器几次加载。负载第二和其他与2:l的样本。没有吸管microfuge管的底部的颗粒。后与蒸馏水冲洗注射器几次加载。

这种凝胶:检查缓冲区上缓冲室充满因为缓冲可能发生泄漏。把盖子放在降低缓冲室的顶部。确保连接是正确的。附加电导致一个合适和适当的极性电源组。凝胶的恒流运行30 mA。停止电泳当追踪染料~ 1厘米以上的玻璃盘子。

删除和染色的凝胶:从缓冲室被凝胶。松开所有四个螺丝夹具的装配和拆卸玻璃板三明治。其中一间隔器推到一边的盘子没有删除它。轻轻捻间隔,这样上层玻璃板把远离凝胶。一边把凝胶凝胶(定位)。除去凝胶的凝胶轻轻抓住两个角落并将其放在容器包含Coomassie蓝色污点。确保凝胶完全淹没在染色的解决方案。染色的凝胶1 h;慢慢搅拌罐。使退色凝胶在使脱色溶液几次直到蛋白质乐队可视化。 Approximately determine the molecular weight
可视化蛋白质乐队通过比较它们的分子量标记。

可以生成校准曲线的几种形式。

相对分子量和迁移距离。。

b。日志相对分子量和迁移距离。

图表绘制得到的分子量和迁移距离产生双曲线,使分子量
确定困难。几乎是线性关系,然而,当获得对数(分子量)绘制vs。
迁移距离。未知蛋白质的分子量可以确定回归或直接从
图。绘制对数(分子量)与相对迁移距离(Rf)需要比较获得的结果
从单独的凝胶。

(2)

采用蒽酮法评估确定糖含量的光谱光度测量的

血淋巴作为循环流体,供应所有的营养和允许气体交换组织。存在不同类型的糖可以估计通过蒽酮或血淋巴酚的方法。这些方法可靠,广泛用于糖的定量估计的样本。最有价值的糖存在于血淋巴是海藻糖(α、α-1 D吡喃葡萄糖),两个葡萄糖单元的调光器。这个海藻糖不能被估计,而是通过设计实验对海藻糖估计,可以估计总糖含量和海藻糖存在于样本的数量在一个特定的地位状态。海藻糖可以消化成其单体(葡萄糖)通过一种被称为海藻糖酶的酶,这种酶消化海藻糖为葡萄糖和能够估计可溶性总糖含量和海藻糖含量的样品。糖样品含有海藻糖被消化成葡萄糖单体与蒽酮和苯酚反应形成有色化合物。因此,总糖的示例可以估计。这个方法也可以用来估计减少以及非还原糖和总糖的样品。在这种方法中,存在的糖浓硫酸脱水,产生糠醛(从戊糖)或5-hydroxy甲基糠醛(5-HMF)(从己糖),当与蒽酮发生反应产生一个彩色复合λ_马克斯620海里。戊糖、己糖庚糖及其衍生物在这些反应产生有色产品而丙糖、四糖和氨基糖不产生任何的产品。蒽酮法很简单,不干扰,因此,给一个可靠的指标总碳水化合物的样品。

试剂:海藻糖酶(α,α-Trehaloseglucohydrolase)、蒽酮试剂(0.2%,刚做好的)200毫克蒽酮溶解在5.0毫升乙醇蒸馏和100毫升的75%硫酸和标准糖溶液(0.1%)100毫克的海藻糖溶解在100毫升蒸馏水。稀释1:10的估计。

海藻糖估计通过光谱光度测量的苯酚的方法

血淋巴作为循环流体,供应所有的营养和允许养分交换组织。存在不同类型的糖可以估计通过蒽酮或血淋巴酚的方法。这些方法可靠,广泛用于糖的定量估计的样本。最有价值的糖血淋巴中海藻糖,两个葡萄糖单元的调光器。这个海藻糖不能被估计,而是通过设计实验对海藻糖估计,可以估计总糖含量和海藻糖存在于样本的数量在一个特定的地位状态。海藻糖可以消化成其单体(葡萄糖)通过一种被称为海藻糖的酶,这种酶消化海藻糖为葡萄糖和能够估计可溶性总糖含量和海藻糖含量的样品。糖样品含有海藻糖被消化成葡萄糖单体与蒽酮和苯酚反应形成有色化合物。因此,总糖的示例可以估计。海藻糖的浓度可以通过推导估计样本的总糖浓度与海藻糖酶消化未消化的样品的浓度。

浓缩的。海藻糖=(浓缩的。样品总糖的消化后,浓缩的。糖的未消化的示例)。

这个方法也可以用来估计减少以及非还原糖和总糖的样品。在这种方法中,存在的糖浓硫酸脱水,产生糠醛(从戊糖)或5-hydroxy methylfurfural (5-HMF)(从己糖),而当λ与苯酚反应生成有色化合物_马克斯490海里。戊糖、己糖庚糖及其衍生物在这些反应产生有色产品三人小组,而上和氨基糖不产生任何的产品。苯酚的方法很简单,不干扰,因此,给一个可靠的指标总碳水化合物的样品。

试剂使用:海藻糖(α,α-trehalose glucohydrolase)酚试剂(5.0%,刚做好的)5 g酚100.0毫升蒸馏水溶解。标准糖溶液(0.1%)100毫克的海藻糖溶于100毫升蒸馏水。稀释1:10的估计。

观察:

表8:试剂的数量估计海藻糖的苯酚的方法。

结果

我的血淋巴中的可溶性蛋白Antheraea mylitta表2.0中所示。在目前研究的血淋巴总可溶性蛋白答:mylitta研究了用洛瑞方法(1951)。结果显示低数量的蛋白质含量在血淋巴。总可溶性蛋白的变化从37.514到38.366(μgμg指示利用可溶性蛋白质合成的丝茧的形成本身。

二世。从标志与标准的准备后蛋白质的分子量蚕丝蛋白被计算为大约195 kDa 198 kDa,分子量丝胶被计算为大约65 kDa 70 kDa。

三世。血淋巴中海藻糖浓度Antheraea mylitta表4.0所示。总糖变化的值从0.4523μgμg到0.4477。

iv。海藻糖估计是由减去平均OD的未经处理的样品的平均OD对样本(样本与海藻糖酶酶消化)。

平均OD的消化,平均OD OD的未消化的区别。

糖样品:0.457,0.412,0.045。

在这项研究中估计总糖已经用光谱光度测量的蒽酮的方法。采用蒽酮法总糖变化从0.4523μg - 0.4477μg。

讨论

柞蚕丝蠕虫是一种野生品种培育森林的自然条件。蚕的生命周期是由气候条件控制的。根据当时的气候条件有44 eco-races发现在印度。Kumari和罗伊(2011)研究了eco-races Tasar蚕的表型和行为差异Antheraea mylitta特鲁里街与环境因素。一直尝试研究的某些方面的识别营养高效蚕他们的代谢率和可持续发展的能源资源。他们得出的结论是,热带Tasar蚕可能是合适的模型物种所需的可持续发展能源资源的农村地区。罗伊研究可持续发展的案例研究桑塔尔十四伯尔格那(恰尔肯德邦)他通过野外各种Tasar蚕Antheraea mylitta并得出结论,通过培养物种长期和短期的环境管理和保护的地方生态系统将会完成。这样的目标,本研究的“血淋巴的生化分析Antheraea mylitta”。在目前的项目工作已经尝试调查总可溶性蛋白(μg), sds - page分析分子量测定丝胶和丝绸纤维和蚕丝蛋白海藻糖估计使用光谱光度测量的蒽酮和苯酚方法进行的蛹的阶段热带eco-race的野生品种Antheraea mylittad。有趣的是,关闭总可溶性蛋白和海藻糖含量之间的敌对的关系已被观察到。丝绸纤维是一种蛋白质合成的丝腺细胞并存储在丝腺腔的随后转化成丝纤维。因此,丝腺是bio-factory和丝绸是生物材料可应用到多方面的领域。当蚕分泌液体丝绸在旋转,通过前丝腺通过喷丝头,被驱逐出开放的丝绸是晕了过去。丝胶的数量和性质的基本特征在赋予不同的特征的茧。丝胶蛋白是有用的因为其特殊的性质,如抗氧化,抗菌,抗紫外线,吸收和释放水分容易抑制酪氨酸激酶和活动。丝胶是化学non-filamentous蛋白质也包含其他天然杂质如脂肪和蜡在有机盐和着色材料。丝胶是一种亲水。它是丝绸生产过程中从蚕丝蛋白使有光泽的,去除丝胶浪费产品。最近,这些seri-waste产品和seri-by产品作为一个增值产品。脱胶后剩下的蚕丝蛋白2-chains组成。蚕丝蛋白是众所周知的对水的吸收性、染色亲和力,thermo-tolerance和预防紫外线辐射。丝胶的丝胶和蚕丝蛋白之间的差异表明,更多的氨基酸与非极性侧链在蚕丝蛋白与酸侧链氨基酸存在。另一个区别野生和家养蚕丝胶在前与非极性氨基酸侧链,后者与极性侧链氨基酸丝胶。蚕丝蛋白具有较高的丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸。少量的半胱氨酸残基给了我们非常少量的硫的纤维和酸侧链。蚕丝蛋白是主要的水不溶性蛋白质(即78%的重量生丝)。在目前的研究中,总可溶性蛋白血淋巴的估计Antheraea mylitta和价值μgμg范围从37.514到38.336。sds - page分析清楚地显示的分子量丝胶在柞蚕丝纤维和蚕丝蛋白。之间有显著的不同的乐队丝胶和蚕丝蛋白。丝胶,65 kDa - 70 kDa之间的分子量不同而在蚕丝蛋白分子量变化从195 kDa - 198 kDa。血淋巴总可溶性蛋白质含量的Antheraea mylitta逐步减少随着开发的进行,这可能是由于利用蛋白质在丝绸合成5 thinstars末。在这项研究中海藻糖估计已经使用光谱光度测量的苯酚的方法。通过光谱光度测量的苯酚方法总糖变化从0.4523μgμg到0.4477。有趣的是在目前的研究中观察之间的密切关系,解决蛋白质含量血淋巴和海藻糖浓度。总可溶蛋白质含量同时,海藻糖在早龄期增加但是在达到4^th龄的蛋白质含量降低了。然而,海藻糖浓度降低从1^圣5^th龄和蛹的阶段的价值也在最低水平。目前的工作体现一些解释发现之间的关系总可溶性蛋白海藻糖和分子量丝胶和蚕丝蛋白。完善,这些昆虫血淋巴是仓库的各种蛋白质和酶。用电泳法,许多血淋巴蛋白质已确定。的标准之一知道真丝纤维的适宜性指数的测定分子量的丝绸纤维是由丝素和丝胶。sds - page和分子量标记受到电泳。在目前通常SDS蛋白质被揭露。移动标记蛋白质的乐队是策划针对日志分子量,并在此基础上直线画从那出来,蛋白质的分子量丝胶的乐队是65 kDa 70 kDa的蚕丝蛋白195 kDa 197 kDa。结果表明,蛋白质含量在蚕丝纤维是相当高的。因此,随着分子量的决心使用sds - page电泳作为一个生物标志物为评价丝纤维的质量。碳水化合物是主要的燃料Tasar蚕的生长和发育,他们大多来自饮食。蚕Antheraea mylitta,保存足够的量能源在幼虫在蛹的开发利用和成人阶段。海藻糖是主要和新陈代谢活跃非还双糖现在血淋巴中合成脂肪的身体。水库的大部分时间生物分子这是几乎每一个生理活动所需的昆虫。因此,血淋巴的构成的变化反映了地貌成因的和生物化学变化发生在昆虫组织。昆虫血淋巴执行一些功能,比如免疫力,运输,储存等。在目前的研究中,尝试探讨站的血淋巴的状态Antheraea mylitta。海藻糖是主要血淋巴的双糖。其活跃的生物合成发生在脂肪体和快速利用丝绸合成在过去蚕的幼虫龄期。血淋巴中海藻糖的水平反映了碳水化合物在体内的水平以及昆虫的生理状态因此,海藻糖的水平作为一个索引的生理状态的昆虫。海藻糖的水平是发现最低的蛹的阶段Antheraea mylitta;这可能是由于这一事实蛹的阶段是不活跃的,没有喂食,滞育状态茧包围。海藻糖的最低水平蛹是由于碳水化合物的消耗。海藻糖水平的增加与宿主植物的叶子的喂养。相关的更高层次的碳水化合物是食品消费率较高的幼虫阶段导致葡萄糖通过消化道吸收的增加应对增加的生理活动。海藻糖在蛹的阶段的低水平表明其提供的更大的利用燃料活跃的合成的丝绸和其他生理过程,如进一步旋转,也可能与食物摄入量的减少在过去5的一部分^th龄幼虫。Hirano和山下式之间的关联的利用率和周转率血淋巴海藻糖在蜕变家蚕。因此,目前的结果按照齐藤的早期发现,1963年提出的存在可能在蚕体内平衡机制调节体内海藻糖水平。在Tasar蚕海藻糖和可溶性蛋白质作为纺织和丝绸的间接因素评价合成。在目前的研究中,一个非常密切观察海藻糖水平和总可溶性蛋白之间的关系。在蛹期生化资料密切观察到他们的最低水平。Tasar蚕是野生品种,只有在开放的在自然条件下传播。最近做了一些试图semi-domesticate这个物种受控条件下避免变幻莫测,干扰活动以及丝绸柞蚕丝的特征。目前的研究有关总可溶性蛋白,sds - page对分子量测定丝胶和蚕丝蛋白和海藻糖水平估计将增加一些知识改进质量的柞蚕丝以及给线索使它完全驯化。这样的特质将实现生化操作后,蚕的架构。

结论

而搜索文献的血淋巴的“生化分析Antherea mylitta“信息总可溶性蛋白质,氨基酸的定量和定性分析,电泳研究,sds - page等的信息。所有这些生化参数相关的丝绸生产的改进,需要改进的柞蚕丝的质量和数量。考虑到所有这些事实,本研究在“血淋巴的生化分析Antheraea mylitta”。减少农村贫困仍然是一个重要的目标像印度这样的发展中国家的大多数贫困人口仍居住在农村。例如,世界银行估计,超过70%的世界贫困人口生活在农村地区。到目前为止,各种策略一直在追求中解决这个问题,主要的是农村就业创造。的农业部门,然而,竞争的因素有限生成新的就业机会的潜力在农村地区。这些因素可能包括土地持有规模小、资本和投资激励不足,农业基础设施不足,有限的市场和农产品价格停滞不前。因此有必要关注农村经济的更广泛的光谱。建立农村养蚕等基础产业,特别是,可以非常有效的在创造新的就业机会和提供补充收入。作为一个农村agro-based劳动密集型行业这个领域也可以充满活力的作用在检查从农村迁移到城市地区。在这个项目中工作,养蚕产业在印度的现状,趋势,地位在全球养蚕和科学和技术的成就了。除此之外,一些关键部门在国民经济的潜力等问题,农村发展,妇女赋权和就业代已确定。一直在尝试画一个战略模型加强和促进印度养蚕产业提高生产力和质量的丝绸等。该项目将有助于识别潜在的力量和挑战的养蚕产业在印度,制定社会经济发展一定的政策和措施。柞蚕丝蠕虫是一种野生品种培育森林的自然条件。蚕的生命周期是由气候条件控制的。根据当时的气候条件有44 eco-races发现在印度。尝试研究的表型和行为差异eco-races Tasar蚕Antheraea mylitta特鲁里街与环境因素。Kumari和罗伊也试图研究的某些方面营养高效的蚕的识别他们的代谢率和可持续发展的能源资源。他们得出的结论是,热带Tasar蚕可能是合适的模型物种所需的可持续发展能源资源的农村地区。罗伊研究可持续发展的案例研究桑塔尔十四伯尔格那(恰尔肯德邦)他通过野外各种Tasar蚕Antheraea mylitta并得出结论,通过培养物种长期和短期的环境管理和保护的地方生态系统将[完成52]。这样的目标,本研究的“生化分析的血淋巴Antheraea mylitta”进行。在目前的项目工作已经尝试调查总可溶性蛋白(μg), sds - page分析分子量测定丝胶和丝绸纤维和蚕丝蛋白海藻糖估计使用光谱光度测量的蒽酮和苯酚方法进行的蛹的阶段热带eco-race的野生品种Antheraea mylittad。有趣的是,关闭总可溶性蛋白和海藻糖含量之间的敌对的关系已被观察到。丝绸纤维是一种蛋白质合成的丝腺细胞并存储在丝腺腔的随后转化成丝纤维。因此,丝腺是bio-factory和丝绸是生物材料可应用到多方面的领域。当蚕分泌液体丝绸在旋转,通过前丝腺通过喷丝头,被驱逐出开放的丝绸是晕了过去。丝胶的数量和性质的基本特征在赋予不同的特征的茧。丝胶蛋白是有用的因为其特殊的性质,如抗氧化,抗菌,抗紫外线,吸收和释放水分容易抑制酪氨酸激酶和活动。丝胶是化学non-filamentous蛋白质也包含其他天然杂质如脂肪和蜡在有机盐和着色材料。丝胶是一种亲水。它是丝绸生产过程中从蚕丝蛋白使有光泽的,去除丝胶浪费产品。最近,这些seri-waste产品和seri-by产品作为一个增值产品。脱胶后剩下的蚕丝蛋白2-chains组成。蚕丝蛋白是众所周知的对水的吸收性、染色亲和力,thermo-tolerance和预防紫外线辐射。丝胶的丝胶和蚕丝蛋白之间的差异表明,更多的氨基酸与非极性侧链在蚕丝蛋白与酸侧链氨基酸存在。另一个区别野生和家养蚕丝胶在前与非极性氨基酸侧链,后者与极性侧链氨基酸丝胶。蚕丝蛋白具有较高的丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸。少量的半胱氨酸残基给了我们非常少量的硫的纤维和酸侧链。蚕丝蛋白是主要的水不溶性蛋白质(即78%的重量生丝)。在目前的研究中,总可溶性蛋白血淋巴的估计Antheraea mylitta和值范围从37.514μg - 38.336μg。sds - page分析清楚地显示的分子量丝胶在柞蚕丝纤维和蚕丝蛋白。之间有显著的不同的乐队丝胶和蚕丝蛋白。65年之间的分子量不同丝胶kDa 70 kDa在蚕丝蛋白的分子量不同的195 kDa 198 kDa。血淋巴总可溶性蛋白质含量的Antheraea mylitta逐步减少随着开发的进行,这可能是由于利用蛋白质在丝绸合成5 thinstars末。在这项研究中海藻糖估计已经使用光谱光度测量的苯酚的方法。通过光谱光度测量的苯酚方法总糖变化从0.4523μgμg到0.4477。有趣的是在目前的研究中观察之间的密切关系,解决蛋白质含量血淋巴和海藻糖浓度。总可溶蛋白质含量同时,海藻糖在早龄期增加但是在达到4日龄蛋白质含量降低了。然而,海藻糖浓度降低从1^圣5^th龄和蛹的阶段的价值也在最低水平。目前的工作体现一些解释发现之间的关系总可溶性蛋白海藻糖和分子量丝胶和蚕丝蛋白。完善,这些昆虫血淋巴是仓库的各种蛋白质和酶(Wiggleswoth, 1972)。用电泳法,许多血淋巴蛋白质已确定。的标准之一知道真丝纤维的适宜性指数的测定分子量的丝绸纤维是由丝素和丝胶。sds - page和分子量标记受到电泳。在目前通常SDS蛋白质被揭露。移动标记蛋白质的乐队是策划针对日志分子量,并在此基础上直线画从那出来,蛋白质的分子量丝胶的乐队是65 kDa 70 kDa的蚕丝蛋白195 kDa 197 kDa。结果表明,蛋白质含量在蚕丝纤维是相当高的。因此,随着分子量的决心使用sds - page电泳作为一个生物标志物为评价丝纤维的质量。碳水化合物是主要的燃料Tasar蚕的生长和发育,他们大多来自饮食。蚕Antheraea mylitta,保存足够的量能源在幼虫在蛹的开发利用和成人阶段。海藻糖是主要和新陈代谢活跃非还双糖现在血淋巴中合成脂肪的身体。众所周知,在昆虫血淋巴只是细胞外液与多元函数(57]。水库的大部分时间生物分子这是几乎每一个生理活动所需的昆虫。因此,血淋巴的构成的变化反映了地貌成因的和生物化学变化发生在昆虫组织,昆虫血淋巴执行一些功能,如免疫力,运输,储存等。在目前的研究中,尝试探讨常务的血淋巴Antheraea mylitta。海藻糖是主要血淋巴的双糖。其活跃的生物合成发生在脂肪体和快速利用丝绸合成在过去蚕的幼虫龄期。血淋巴中海藻糖的水平反映了碳水化合物在体内的水平以及昆虫的生理状态因此,海藻糖的水平作为一个索引的生理状态的昆虫。海藻糖的水平是发现最低的蛹的阶段Antheraea mylitta;这可能是由于这一事实蛹的阶段是不活跃的,包围茧nonfeeding,滞育状态。海藻糖的最低水平蛹是由于碳水化合物的消耗。海藻糖水平的增加与宿主植物的叶子的喂养。相关的更高层次的碳水化合物是食品消费率较高的幼虫阶段导致葡萄糖通过消化道吸收的增加应对增加的生理活动。海藻糖在蛹的阶段的低水平表明其提供的更大的利用燃料活跃的合成的丝绸和其他生理过程如旋转。此外,它也可能与食物摄入量的减少在过去5的一部分^th龄幼虫。之间的相关性的利用率和周转率血淋巴海藻糖在蜕变家蚕目前的结果是按照齐藤的早期发现,1963建议的存在可能在蚕体内平衡机制调节体内海藻糖水平。在Tasar蚕海藻糖和可溶性蛋白质作为纺织和丝绸的间接因素评价合成。在目前的研究中,一个非常密切观察海藻糖水平和总可溶性蛋白之间的关系。在蛹期生化资料密切观察到他们的最低水平。Tasar蚕是野生品种,只有在开放的在自然条件下传播。最近做了一些试图semi-domesticate这个物种受控条件下避免变幻莫测,干扰活动以及丝绸柞蚕丝的特征。目前的研究有关总可溶性蛋白,sds - page对分子量测定丝胶和蚕丝蛋白和海藻糖水平估计将增加一些知识改进质量的柞蚕丝以及给线索使它完全驯化。这样的特质将实现生化操作后,蚕的架构。

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